HPLC法测定竹叶提取物中荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素的含量

★ 王晖 陈梅荣 刘良玉

(江西省药物研究所 江西 南昌 330029)

竹叶提取物中的黄酮类成分具有抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用，而竹叶黄酮主要成分为荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素等，为评价竹叶提取物的内在质量，本文对竹叶提取物中黄酮主要成分应用高效液相色谱法进行了定量分析，经方法学考察，结果表明本方法简便、快速、准确。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪(包括SCL-10A VP控制器、LC-10AT VP泵、SPD-10A VP检测器、SIL-10AD VP自动进样器、DGU-14A脱气机、CTO-10AS VP柱温箱、CLASS-VP工作站)；KQ-250型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；梅特勒-托利多AE 100电子天平(梅特勒-托利多上海仪器公司)；Mettler M3电子天平(梅特勒公司)。

荭草苷对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号：111777-200801)，异荭草素对照品(购于上海同田生物技术股份有限公司，批号：E-0160)，牡荆素对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号：111687-200602)，异牡荆素对照品(购于上海同田生物技术股份有限公司，批号：E-0673)；竹叶提取物(自制)；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-2%冰醋酸(14∶86)；流速：1mL/min；检测波长：350nm；柱温：40℃；进样量：20μL。

2.2 供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.2g，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇超声处理(功率：250W，频率：40kHz)45min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 标准曲线的绘制 取荭草苷对照品约2mg、异荭草素对照品约4mg及异牡荆素对照品约0.8mg，精密称定，置同一5mL量瓶中；另取牡荆素对照品约1.4mg,置5mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取1mL置上述5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中分别精密吸取5,10,15,20,25,30μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，结果见表1。

表1 回归方程与线性范围

2.4 精密度试验

精密吸取荭草苷、异荭草素、牡荆素与异牡荆素混合对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录峰面积，重复测定6次，结果荭草苷RSD为0.99%，异荭草素RSD为1.12%，牡荆素RSD为1.17%，异牡荆素RSD为1.26%。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，于0,2,4,6,8h分别精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录峰面积，结果荭草苷RSD为0.94%，异荭草素RSD为1.15%，牡荆素RSD为0.84%，异牡荆素RSD为0.85%。表明供试品溶液在8h内稳定。

2.6 重复性试验

取同一批号样品6份，精密称定，照正文中含量测定方法依法平行测定，结果荭草苷平均含量为39.17mg/g，RSD为0.97%；异荭草素平均含量为74.67mg/g，RSD为1.14%；牡荆素平均含量为10.61mg/g，RSD为1.28%；异牡荆素平均含量为24.34mg/g，RSD为0.70%。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的本品(批号：20130501)，研细，精密称取适量，分别精密加入荭草苷对照品、异荭草素对照品、牡荆素对照品与异牡荆素对照品适量，按照2.1条件进行含量测定，计算评价回收率和RSD，见表2～5。

表2 荭草苷加样回收试验结果

表3 异荭草素加样回收试验结果

表4 牡荆素加样回收试验结果

表5 异牡荆素加样回收试验结果

图1 混合对照品HPLC图谱

图2 供试品HPLC图谱

2.8 系统适用性试验

分别取荭草苷、异荭草素、牡荆素与异牡荆素混合对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果在选定的色谱条件下，供试品中荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素与其它组分分离较好。理论板数按荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素峰计算均不低于3000。HPLC图谱见图1～2。

2.9 样品测定 取样品3批，依法测定含量，结果见表5。

表5 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 样品前处理时，对不同溶剂提取进行了比较试验，结果表明甲醇提取干扰少且提取亦完全，因此确定提取溶剂为甲醇。

3.2 经紫外扫描，荭草苷、异荭草素、牡荆素与异牡荆素均在350nm左右有最大吸收，因此选择350nm作为本品检测波长。

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