香芍疏肝口服液质量标准研究

★ 毕晓黎 彭丽诗 李素梅

(1.广东省中医药工程技术研究院 广东 广州 510095；2.广州中医药大学 广东 广州 510405)

香芍疏肝口服液由香附、白芍、柴胡等中药组成，具有疏肝解郁、利胆和胃、理气健脾、燥湿化痰的功效。在临床上常用于肝气不疏、脾胃壅滞导致的慢性胃炎、胃溃疡、胆囊炎、胆囊结石等疾病。为了更好地控制其内在质量，保证临床用药安全有效，本文采用薄层色谱法对处方中的香附、白芍和柴胡进行了定性鉴别，采用高效液相色谱法对处方中所含的芍药苷进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪(美国)；DAD检测器；CAMAG TLC SAMPLER 4型全自动薄层点样仪(瑞士)；CAMAG Reprostar 3型薄层成像系统(瑞士)；Mettler XS205DU电子分析天平(瑞士)；KQ5200 DE型数控超声波清洗器(昆山)；电热恒温水浴槽(上海)；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海)。

1.2 试药 香附对照药材(批号：121059-200706)、白芍对照药材(批号：120905-200508)、柴胡对照药材(批号：120992-200504)、芍药苷对照品(批号：110736-201035)均购于中国药品生物制品检定所；香芍疏肝口服液(批号：120907、120908、1210909，由广东省第二中医院制剂室提供)。

2 薄层色谱定性鉴别

2.1 香附定性鉴别 取本品10mL，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解作为供试品溶液。另取对照药材2g，加水30mL，微沸30min，滤过，同法制成对照药材溶液。取缺香附药材的阴性样品，同供试品溶液制备法制成香附阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸(7∶3∶0.1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热约3min，放置5min后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。

1～3、供试品溶液；4、香附对照药材溶液；5、香附阴性对照溶液

2.2 白芍定性鉴别 取本品5mL，加于大孔树脂柱(内径1cm，高10cm)，先加水100mL洗脱，弃去洗脱液，后用20%乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1g，加水20mL，煮沸30min，滤过，滤液浓缩至5mL，同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺白芍药材的阴性样品，同供试品溶液制备法制成白芍阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液和对照药材溶液各5μL，供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，见图2。

2.3 柴胡定性鉴别 取本品20mL，加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，再用氨试液洗涤2次，每次30mL，弃去氨试液，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解即得。另取1g对照药材，同法制得对照药材溶液。取缺柴胡药材的阴性样品，同供试品溶液制备法制成柴胡阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水(1→10)(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，另槽用氨水饱和，展开，取出，晾干，喷以1%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图3。

1、芍药苷对照品溶液;2、白芍对照药材溶液;3～5、供试品溶液;6、白芍阴性对照溶液

1～3、供试品溶液；4、柴胡对照药材溶液；5、柴胡阴性对照溶液

3 芍药苷含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Extend C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(35∶65)；检测波长：230nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

3.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含115.4μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备 精密量取本品5mL，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至10mL，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.4 阴性对照溶液制备 按处方比例，取缺白芍的其他各味药，按制备工艺制成白芍阴性样品，再按“3.3”项下方法制成白芍阴性对照溶液。

3.5 测定 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、白芍阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，见图4。结果显示，在上述色谱条件下，芍药苷与其他峰分离度较好，阴性对照无干扰。

A.白芍阴性对照溶液；B.供试品溶液；C.芍药苷对照品溶液

3.6 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液(115.4μg/mL)2，4，6，8，10μL进行测定，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积(Y)对芍药苷含量(X)进行回归，得标准曲线：Y=23.5629X+1.0045，r=0.9999，表明芍药苷在0.2308～1.1540μg范围内线性关系良好。

3.7 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液(115.4μg/ml)10μL注入液相色谱仪，重复进样6次，测得其峰面积RSD值为0.35%，表明仪器精密度良好。

3.8 重现性试验 取供试品(批号：120907)5份，分别按照“3.3”项下方法制备供试品溶液，并按照上述色谱条件进行测定，结果芍药苷平均含量为0.2051mg/mL，RSD=0.87%，表明该方法重现性好。

3.9 稳定性试验 分别精密吸取同一份供试品溶液(批号：120907)，分别于0,2,4,8,12h进样10μL，按“3.1”项下色谱条件进行测定，结果芍药苷峰面积RSD=0.69%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

3.10 加样回收试验 精密称取9份已知含量的样品(批号：120907)，分别精密加入一定量的芍药苷对照品，按“3.3”项下供试品制备方法处理，按“3.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

3.11 供试品测定结果 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测得三批样品中芍药苷的含量，结果见表2。

4 讨论

表1 芍药苷加样回收率试验结果(n=9)

表2 样品含量测定结果(n=3)

4.1 对方中香附进行薄层鉴别时，按照药典中香附的TLC鉴别方法[1]，但由于香芍疏肝口服液的制备工艺为水提，而α-香附酮为脂溶性物质，难以提取出来，故供试品色谱中与对照品色谱无对应斑点。在参考文献中多种鉴别方法后[2,3]，采用上述方法进行鉴别，且结果斑点清晰，分离效果好，且阴性无干扰。

4.2 对方中白芍进行薄层鉴别时，按照药典中白芍的鉴别方法[1]，结果背景较深，拖尾严重，无法清晰鉴别，故参考了文献中多种方法[4,5]，对供试品进行进一步的纯化处理，结果斑点清晰，分离度高，且阴性无干扰。

4.3 对方中柴胡进行薄层鉴别时，按照药典中柴胡的鉴别方法[1]，发现阴性有干扰，在参考文献中多种鉴别方法后[6]，采用上述方法进行鉴别，结果方法可行，且阴性无干扰。

4.4 芍药苷的含量测定方法，是在参考文献中芍药苷的多种含量测定方法之后[7]，再对流动相进行调整而建立的，通过方法学验证，该法准确、可靠，可作为香芍疏肝口服液中苦芍药苷的含量测定方法。

4.5 本文所建立的方法操作简便、灵敏度高、准确可靠、重现性好，可作为香芍疏肝口服液的质量控制方法。

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[6]叶延程,赵良存.乳康胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(13):125-128.

[7]谢清春,吕竹芬,陈燕忠.补肺活血胶囊中芍药苷的含量测定[J].中药材,2012,35(8):1 335-1 336.