血清pro-hepcidin水平与类风湿性关节炎贫血、 疾病活动指标的相关性

曾婷，宋超英，陆静忠

论著·临床

血清pro-hepcidin水平与类风湿性关节炎贫血、 疾病活动指标的相关性

曾婷，宋超英，陆静忠

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者血清中pro-hepcidin水平，探讨其与RA患者贫血、疾病活动度之间的相关性。方法收集50例RA患者为RA患者组，50例健康体检者为健康对照组，RA患者疾病活动度通过疾病活动度积分表28(DAS28)评估。检测受试者的血红蛋白、血清铁、结合铁、铁蛋白、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子滴度和抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)滴度、血清pro-hepcidin水平，并比较组间差异及进行相关性研究。结果RA患者组血红蛋白、血清铁显著低于健康对照组，而ESR、CRP类风湿因子、抗CCP抗体、铁蛋白、pro-hepcidin水平显著高于健康对照组(P<0.01)，且RA患者活动亚组(DAS28>5.1分)血清中铁蛋白、CRP、ESR、pro-hepcidin水平显著高于不活动亚组(DAS28≤5.1分)(P<0.05)。pro-hepcidin水平和RA疾病活动指标如DAS28、关节肿痛数、ESR和CRP、铁蛋白均呈正相关(r=0.596、0.406、0.502、0.567、0.420，P<0.05，P<0.01)。而血清中pro-hepcidin水平在RA伴和不伴贫血患者中无明显差异。结论RA患者血清中pro-hepcidin水平可反映疾病活动度，临床上pro-hepcidin有望作为判断RA患者疾病活动度的另一标志。

类风湿关节炎；Pro-hepcidin；贫血

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病，以关节滑膜炎性反应为特征，滑膜炎的持久反复发作，引起关节软骨及骨质的破坏，最终导致关节畸形及功能障碍。贫血是类风湿性关节炎关节外最常见的表现之一，类风湿性关节炎患者贫血发生率为26.9%～77.6%。类风湿性关节炎患者发生贫血主要为慢性炎性反应所致，多为正细胞正色素性贫血，这与血清铁和总铁结合力下降有关，但是储存铁却是正常或升高的[1]。近年研究发现，主要在肝细胞中合成的小分子肽hepcidin具有独特的抗微生物活性和调节体内铁代谢平衡的作用，通过干扰铁从肠道的吸收和从巨噬细胞的释放，从而调节肠道铁的吸收、循环利用和储存，hepcidin除了在体内铁的调节中起重要作用，也与炎性反应和感染有着密切的关系[2]。由于血清中hepcidin检测较为困难，近年国外有报道探讨类风湿性关节炎患者hepcidin前体物质pro-hepcidin水平与疾病活动的相关性，但是其结果不一，而国内尚无相关研究报道。本项目拟通过检测类风湿性关节炎患者血清中pro-hepcidin水平，以及其与类风湿性关节炎患者贫血、疾病活动度之间的相关性，试图探讨pro-hepcidin在类风湿性关节炎疾病发生及活动中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集本院门诊及住院部就诊的类风湿性关节炎患者50例为RA患者组，均符合美国风湿病学会1987年提出的类风湿性关节炎分类标准[3]，无急性、慢性感染及严重心、肝、肺、肾疾病，无外伤、手术、失血性疾病、肿瘤及骨髓造血异常，近3个月未接受输血、铁剂、促红细胞生成素治疗。其中男4例，女46例，年龄(48.8±16.7)岁，病程(54.5±87.4)月，晨僵(66.8±76.6)min，肿痛关节数(8.4±5.3)个， RF阳性37例(74.0%)，抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)阳性42例(84.0%)，疾病活动度积分表28(disease activity score 28，DAS28)(4.24±2.28)分。根据DAS28积分又将RA组患者分为2个亚组：DAS28≤5.1分为不活动亚组(n=32)，DAS28>5.1分为活动亚组(n=18)。并同时收集本院体检中心与本研究中性别、年龄匹配的健康体检者50例作为健康对照组，其中男5例，女45例，年龄(40.2±18.9)岁。入选者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测指标与方法 所有研究对象抽血前一晚开始禁食8～10 h，第2天清晨空腹安静状态下采肘静脉血8 ml，均完成以下实验室项目检测：血红蛋白、血清铁、结合铁、铁蛋白、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子滴度和抗CCP抗体滴度，以上检测项目均由本院检验科检测。血红蛋白、CRP的检测分别使用Beckman-Coulter公司生产的全自动血细胞计数仪, ESR检测采用魏氏法, 抗CCP抗体、类风湿因子采用酶联免疫吸附试验方法检查(欧蒙试剂盒)。采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(德国DRG公司)检测患者和正常对照血清标本中pro-hepcidin水平；所有标本均设复孔，严格按照说明书步骤进行操作，测定吸光度，然后再根据标准曲线计算血清中pro-hepcidin水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。计量资料均采用均数±标准差表示，比较分析采用t检验或方差分析。pro-hepcidin与各指标之间的相关性分析采用Pearson或Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2组研究对象实验室检查指标比较 RA患者组血红蛋白、血清铁明显低于健康对照组(P<0.05)，而RA患者组铁蛋白、ESR、CRP、类风湿因子、抗CCP抗体pro-hepcidin水平明显高于健康对照组(P<0.05)。见表1。

表1 RA患者组及健康对照组各项指标比较

2.2 RA患者2个亚组间各检测指标比较 活动亚组和不活动亚组相比，血红蛋白、血清铁、结合铁水平差异无统计学意义(P>0.05)，而相较于不活动亚组，活动亚组患者炎性相关指标铁蛋白、CRP、ESR pro-hepcidin水平均显著升高(P<0.05，P<0.01)。见表2。RA患者伴贫血和不伴贫血患者血清pro-hepcidin水平分别为(309.6±105.1)ng/ml和(298.0±88.9)ng/ml，差异无统计学意义(P=0.26)。

2.3 RA患者pro-hepcidin水平与其他指标间的相关性 通过Pearson相关分析研究，RA患者血清pro-hepcidin水平和RA疾病活动指标如DAS28、关节肿痛数、ESR、CRP和铁蛋白均呈正相关(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表2 RA患者2个亚组间各指标比较

表3 RA患者pro-hepcidin和其他参数间的相关性分析

3 讨 论

hepcidin是一种由25个氨基酸组成的多肽类激素，在肝细胞中合成，干扰铁从肠道的吸收和从巨噬细胞的释放，从而调节肠道铁的吸收、循环利用和储存, 体内铁负荷、炎性因子和红细胞生成等都是调节hepcidin合成的重要因素。hepcidin除了在体内铁的调节中起重要作用，也与炎性反应和感染有着密切的关系[2，4]。体内的炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β等不仅可以促进hepcidin的合成，而且可以上调hepcidin在铁代谢所起的作用，比如抑制肠道铁吸收、促进巨噬细胞对铁的螯合作用，从而造成体内铁缺乏[5]。上述机制在包括类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮的慢性炎性贫血中起了重要作用。目前用于人hepcidin研究的方法有限，且hepcidin分子较小、以及结构和序列的原因，难于获得特异性单克隆抗体，因此，基于单克隆抗体的常用临床检测方法极为有限，目前尚难于推广应用。基于hepcidin前体物质pro-hepcidin已有成熟的ELISA法可检测，因此我们采用检测pro-hepcidin水平进行研究。

国内外已有较多研究表明pro-hepcidin在慢性贫血、肝硬化、肾功能衰竭、系统性红斑狼疮及其他慢性炎性疾病的发病中起了重要作用[6，7]。近年国外有报道探讨类风湿性关节炎患者pro-hepcidin水平与疾病活动的相关性，但是其结果目前仍缺乏一致性[8～10]，国内尚无相关研究报道。本研究表明，RA患者血清中pro-hepcidin水平显著高于健康对照组，且根据患者疾病活动度将患者分为DAS28≤5.1分和DAS28>5.1分2个亚组，DAS28积分越高提示疾病活动度越高，2组对比后发现RA患者活动亚组血清中pro-hepcidin水平显著高于不活动亚组，提示RA患者血清中pro-hepcidin水平和疾病活动度密切相关。

本研究通过进一步研究表明pro-hepcidin水平和RA疾病活动指标如DAS28、关节肿痛数、ESR和CRP呈正相关，这和Kim等[8]研究结果一致。而Koca等[9]研究发现RA患者血清中pro-hepcidin水平虽高于正常对照，但pro-hepcidin水平和DAS28无明显相关性。已有证据表明炎性因子特别是IL-6可以刺激hepeidin mRNA合成[11]。Kim等[8]研究表明RA患者血清pro-hepcidin水平和IL-6、TNF-α和IL-1β水平呈正相关，而IL-6、TNF-α和IL-1β作为炎性因子在RA的发病过程中起的作用已得到普遍认识，且针对上述炎性因子的靶向治疗药物在临床已得到广泛应用[12]。以上提示pro-hepcidin可像ESR、CRP、肿痛关节数、炎性因子等一样作为判断RA患者疾病活动度的另一指标。

Demirag等[10]研究表明RA伴贫血患者血清中hepcidin水平明显高于单纯缺铁性贫血患者组及对照组，RA伴贫血患者和RA无贫血患者之间hepcidin水平无明显差异，进一步研究发现RA伴贫血患者中有铁缺乏者血清中hepcidin水平明显高于RA无贫血患者，提示hepcidin在RA患者贫血的发病机制中发挥了重要作用。另一方面，亦有研究表明RA患者血清中pro-hepcidin水平和贫血指标无明显相关性。另有观点认为hepcidin主要影响铁代谢过程，而pro-hepcidin主要通过炎性反应过程发挥其作用[8]，其中更明确的作用机制还有待进一步研究。本研究通过比较发现血清中pro-hepcidin水平在RA伴和不伴贫血患者中无明显差异。我们推测血清中pro-hepcidin并不能代表有活性的hepcidin，而pro-hepcidin水平并不能影响贫血相关性指标也支持这一推测[13]。

综上所述，我们通过研究发现hepcidin 或pro-hepcidin因其和贫血、炎性因子密切相关性，使其在RA及其伴发的慢性贫血的发病过程中起了重要作用，临床上pro-hepcidin有望作为判断RA患者疾病活动度的另一标志。

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Associationofthelevelofserumpro-hepcidinandrheumatoidarthritis

ZENGTing,SONGChaoying,LUJingzhong.

DepartmentofInternalMedicine,ChongmingBranch,XinhuaHospital,MedicalSchoolofShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai202150,China

SONGChaoying,E-mail:songys2005@126.com

ObjectiveTo detect the level of serum pro-hepcidin levels in the rheumatoid arthritis (RA) patients, and to explore its correlation with disease activity and anemia.MethodsFifty cases of RA patients as RA group, 50 healthy people as healthy control group, disease activity in patients with RA was assessed by disease activity score table 28 (DAS28). Detected the participants of hemoglobin, serum iron, ferritin, iron binding, erythrocyte sedimentation rate (ESR), C-reactive protein (CRP), titers of rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide antibody titer, serum pro-hepcidin level, and compared the difference between groups.ResultsThe hemoglobin, serum iron RA group was significantly lower than that of healthy control group, while ESR, CRP, anti CCP antibody and rheumatoid factor, ferritin, pro hepcidin levels were significantly higher than that in healthy control group (P<0.01), and RA active sub group (DAS28>5.1)’s serum ferritin,CRP, ESR, pro-hepcidin levels were significantly higher than those of inactive sub group (DAS28≤5.1) (P<0.05). Pro-hepcidin levels and RA disease activity index such as DAS28, ESR and CRP, the number of joint pains, ferritin were positively correlated (r=0.596,r=0.406,r=0.502,r=0.567,r=0.420,P<0.05，P<0.01).Serum pro-hepcidin level in RA patients with and without anemia revealed no obvious difference.ConclusionRA patients’ serum pro-hepcidin level can reflect disease activity, pro-hepcidin is expected as a biomarker for disease activity in patients with RA.

Rheumatoid arthritis ; Pro-hepcidin; Anemia

崇明县卫生局科研项目(No.CW2013-02)

202150 上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院血液内科

宋超英，E-mail:songys2005@126.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.009

2014-08-09)