抗核抗体和自身免疫性肝病相关抗体检测在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值

胡玲，谷磊，刘蓓蓓，高成城

论著·临床

抗核抗体和自身免疫性肝病相关抗体检测在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值

胡玲，谷磊，刘蓓蓓，高成城

目的探讨抗核抗体(ANA)和自身免疫性肝病相关抗体联合检测在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值。方法选取2012年7月—2013年12月住院的原发性胆汁性肝硬化患者40例作为观察组，86例非自身免疫性肝病患者为对照组。采用间接免疫荧光法检测患者血清ANA，采用免疫印迹法检测抗线粒体抗体(AMA)、SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210，分析其诊断价值。结果观察组患者AMA检出率为95.00%(38/40)，明显高于对照组的5.81% (5/86)(χ2=6.25，P<0.05)。ANA中的着丝点型、核膜型及核多点型检出率分别为35.00%(14/40)、30.00%(12/40)和22.50%(9/40)，明显高于对照组的11.63%(10/86)、5.81%(5/86)和3.49%(3/86)(χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05)。观察组SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210检出率明显高于对照组(分别为30.00%、22.50%、17.50%、10.00%、15.00% vs. 3.49%、1.16%、4.65%、2.33%、3.49%，均P<0.05)。ANA检测观察组灵敏度和特异度及符合率分别为92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明显高于对照组的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。结论临床采用ANA和自身免疫性肝病相关抗体谱联合检测，可提高原发性胆汁性肝硬化的临床检出率，为其诊断和治疗提供重要的参考价值。

抗核抗体；肝硬化，原发性，胆汁性；自身免疫性肝病相关抗体

自身免疫性肝病主要是一组因患者自身抗体存在而导致的肝组织特异性病理损伤的慢性疾病，目前对其发病机制及相关致病因素还不明确[1，2]，临床一般认为其与自身免疫存在一定关系。临床上将其分为原发性胆汁性肝硬化(PBC)、自身免疫性肝炎(AIH)及原发性硬化性胆管炎(PSC)。这3种疾病可表现为严重肝脏病变，甚至可发展为肝硬化。随着医学检验技术的不断发展，这类人群的临床检出率不断增加。现探讨抗核抗体(ANA)和自身免疫性肝病相关抗体在原发性胆汁性肝硬化患者中的诊断价值，为临床诊断和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2012年7月—2013年12月于我院住院的原发性胆汁性肝硬化患者40例作为观察组，按照美国肝病学会2000年制定的PBC诊断标准确诊[3]。其中男17例，女23例；年龄 52～75 岁，中位年龄62.0岁；病程1.1～3.4年，中位病程2.0年；基础病：类风湿性关节炎12例，强直性脊柱炎10例，病毒性乙型肝炎10例，系统性硬化病8例；合并症：糖尿病14例，高血压17例，股骨头坏死9例。非自身免疫性肝病患者86例为对照组，患者超声及胆管造影检查提示肝管正常。胆汁淤积生化指标碱性磷酸酶升高。其中男48例，女38例；年龄 49～74岁，中位年龄61.5岁；病程1.2～3.7年，中位病程2.4年；基础病：类风湿关节炎15例，强直性脊柱炎12例，病毒性乙型肝炎9例，系统性硬化病4例；合并症：糖尿病17例，高血压13例，股骨头坏死10例。2组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。入选患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 观测指标与方法 于早上9∶00，患者处于空腹下使用专用血凝真空管采集静脉血液。以稀释液稀释、轻摇调匀，并置于抗凝管中，然后于采血后1 h内检测完成，采用SYSMEX XS-800i血液分析仪，按照全自动血球计数仪标准操作程序检测，稀释液、溶血素、清洗液全部为仪器配套试剂以及美国贝克曼公司生产的质控液，抗凝剂用浓度为80 g/L的EDTA-K2溶液。观察组与对照组均采用间接免疫荧光法检测患者血清ANA，分别采用鼠肾、猴肝为抗原基质进行操作[4]。自身免疫性肝病自身抗体谱用免疫印迹法检测：包括抗线粒体抗体(AMA)和抗核颗粒抗体(SP100)、抗肝—胰抗体与抗可溶性肝抗原抗体(SLA/LP)、抗肝细胞溶质抗原I型(LC-1)、抗肝肾微粒体抗体(LK-M)、抗核膜糖蛋白抗体(gp-210)。免疫印迹法：采集患者血清，然后按照1∶100比例稀释，再利用欧蒙滴定平板技术，将抗原带位置固定好，用肉眼判断检测结果[5]。阳性：观察特定区条带，清晰可见强着色带。其中TS-型转移脱色摇床(由江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司生产)，自身免疫性肝病自身抗体谱试剂盒由德国欧蒙公司提供并严格按照德国欧蒙公司提供操作说明书进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计与分析。计数资料以率(%)表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 AMA及ANA阳性检出情况比较 观察组患者AMA检出率明显高于对照组(P<0.05)；ANA中的着丝点型、核膜型及核多点型检出率均明显高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 2组AMA及ANA阳性检出情况比较 [例(%)]

2.2 自身免疫性肝病相关抗体阳性检出情况比较 观察组SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210检出率均明显高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 2组自身免疫性肝病相关抗体阳性检出情况比较 [例(%)]

2.3 诊断试验 观察组ANA检测灵敏度和特异度及符合率分别为92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明显高于对照组的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。

3 讨 论

在诊断自身免疫性肝病时，自身抗体检测也具有十分重要的应用价值[6]。但大多数患者自身抗体并无器官特异性或者种属性，同时还无疾病特异性[7]。虽然自身抗体为自身免疫性肝病的血清检测标志物，但在丙型肝炎和药物性肝炎等患者人群中均可检测到。自身免疫性肝病主要有PBC、AIH及PSC，目前临床上非常关注其发病机制和诊断及治疗方法[8]。AIH一般发病于女性人群，根据患者血清中所出现的自身抗体类型，将其分为I型：血清中抗平滑肌抗体和抗核抗体阳性；II型：血清中抗肾微粒抗体1阳性；III型：主要表现为抗可溶性肝抗原/肝胰抗体阳性[9]。

临床上，PBC属于一种慢性肝内胆汁淤积性疾病，这种疾病大多发生于中老年女性人群中，且大多数患者在晚期阶段才得以确诊。经2000年美国肝病学会所制定的PBC诊断指南[10]，这种疾病较为重要的免疫学诊断指标为抗线粒体抗体阳性，有95.0%～98.0%的PBC患者抗线粒体抗体表现为阳性[11]。本研究中，PBC患者的抗线粒体抗体阳性检出率为95.00%，与相关报道一致。

SP100抗体是一种可溶性酸性磷酸化核蛋白，其在AMA阴性PBC患者中的阳性检出率约为60.0%，明显高于AMA阳性患者的20.0%[12]。所以SP100抗体对AMA阴性PBC患者的诊断具有非常重要的意义。本研究发现，在PBC患者核多点型ANA阳性检出率为22.50%，明显高于非自身免疫性肝病患者的3.49%(P<0.05)。抗gp-210抗体所识别的表位主要是gp-210羟基末端上15个氨基酸残基，其自身抗体则被认为是PBC患者高度特异性抗体，特异性大约为95.00%。大约有50.0%AMA阴性PBC患者血清中可检测到抗gp-210抗体，说明患者预后较差，同时其还可作为PBC患者预后判断标准。在ANA中，抗gp-210主要表现为核膜型，本研究中，PBC患者的ANA核膜型阳性检出率为30.00%，明显高于非自身免疫性肝病患者的5.81%(P<0.05)。着丝点型抗体主要是系统性硬化症患者的一种亚型，而PBC常常会与其存在10.00%～15.00%的重叠率。本研究发现，PBC患者着丝点型ANA阳性检出率为35.00%，明显高于非自身免疫性肝病患者的11.63%(P<0.05)。SP100抗体、AMA及gp210抗体对PBC的临床诊断和预后判断具有十分重要的参考价值。联合检测可提高其临床诊断特异性，降低或避免发生漏诊情况。此外，本研究发现，观察组ANA检测灵敏度和特异度及符合率分别为92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)明显高于对照组84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。由此而说明采用ANA和自身免疫性肝病相关抗体检测具有较高灵敏度和特异度，进而可提高临床检出率，并且患者检测符合率较高。

AIH一般发病于中青年女性人群，主要表现为肝脏炎症性疾病，极易发展为肝硬化，且患者病死率较高。采用免疫抑制剂治疗具有较好的治疗效果，因此需及早诊断和及时治疗。采用ANA诊断AIH的诊断率为100.00%。而SLA/LP为AIH最特异性的检测指标，其阳性检出率在10.00%～30.00%，但是其阳性预测值接近100.00%，因此对AIH具有较高的特异性。此外，其在病毒性肝炎患者中主要表现为阴性反应。本研究中。在AIH发病机制中，LKM-1抗体的作用并不明确，同时在慢性丙型肝炎患者的血清中，其阳性率大约为6.00%。然在AIH患者中，LKM-1抗体的滴度要明显高于慢性丙型肝炎患者。本研究发现，观察组SP100、LSA/LP、LC-1、LK-M、gp-210检出率均明显高于对照组(P<0.05)。

总之，ANA和自身免疫性肝病相关抗体检测可提高临床原发性胆汁性肝硬化的诊断率。对原发性胆汁性肝硬化的诊断、治疗及预后判断均具有十分重要的应用价值。所以，对于存在肝脏功能损害和血清肝炎病毒感染指标为阴性者，尤其是女性人群，均需及时进行自身抗体检测，以及早诊断，及时治疗，改善预后，进而提高患者生活质量，降低临床病死率。

1 谭立明,王园园,李华,等.161例自身免疫性肝病患者相关自身抗体检测的临床研究[J].免疫学杂志,2012,28(12):1061-1064.

2 陆俊忠,张迎梅,陈莹,等.自身免疫性肝病谱线与抗核抗体联合检测在肝硬化诊断中的意义[J].江苏医药,2013,39(1):117-118.

3 高志远,何新颖,徐湘江,等.原发性胆汁性肝硬化合并系统性硬化症1例[J].世界华人消化杂志,2013,21(2):195-197.

4 钱金花,徐庆武,马丽苹.不同亚型自身免疫性肝病患者隐匿性乙型肝炎病毒感染调查[J].中华医院感染学杂志,2013,23(12):2932-2934.

5 刘金涛.自身抗体在临床自身免疫性肝病中的作用和诊断意义[J].中国免疫学杂志,2013,29(6):669-672.

6 唐劼,卢洁,闫惠平.自身免疫性肝病相关自身抗体谱的检测和临床意义[J].世界华人消化杂志,2013,21(25):2544-2550.

7 王振威,王颖,王炳元,等.自身免疫性肝病的临床特点[J].世界华人消化杂志,2011,19(15):1568-1573.

8 翁厚光,曹维克,张迎梅,等.肝功能异常患者血清自身抗体检测对诊断自身免疫性肝病的意义[J].实用医学杂志,2012,28(11):1885-1887.

9 范琪,包金,姚迪,等.丙型肝炎病毒感染者血清自身抗体检测及临床意义研究[J].现代预防医学,2014,41(2):311-313, 316.

10 陈阳,陈京,张尉华.自身免疫性肝病的临床与病理特点[J].中国老年学杂志,2013,33(24):6307-6308.

11 王波,丁楠,常波.乙型肝炎后肝硬化自身抗体检测及其对肝功能影响的研究[J].中国实验诊断学,2013,17(11):2022-2025.

12 刘向东.自身免疫性肝病的自身抗体检测技术[J].临床检验杂志,2014,32(3):161-164.

EvaluationofANAandautoimmuneliverdiseaseassociatedantibodiesindiagnosisofprimarybiliarycirrhosis

HULing*,GULei,LIUBeibei,GAOChengcheng.

*DepartmentofLaboratory,HuaianHospitalofNanjingMedicalUniversity,JiangsuProvince,Huaian223300,China

ObjectiveTo investigate the anti-nuclear antibody (ANA) and autoimmune hepatitis antibodies in detection of primary biliary cirrhosis.MethodsFrom July 2012 to December 2013, hospitalized patients with primary biliary cirrhosis of 40 cases were enrolled as the observation group, 86 patients with non-autoimmune liver disease patients as control group. Anti-nuclear antibodies in the sera of patients were detected by indirect immunofluorescence (ANA), Western blot was used to detect anti mitochondrial antibody (AMA), SP100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210, analyzed the diagnostic value of them.ResultsIn the observation group, AMA positive rate was 95.00% (38/40), significantly higher than that in the control group of 5.81% (5/86) (χ2=6.25,P<0.05), ANA’s the centromere type, nuclear membrane and nuclear multi point detection rates were 35.00% (14/40), 30.00% (12/40) and 22.50% (9/40), significantly higher than the control group with 11.63% (10/86), 5.81% (5/86) and 3.49% (3/86) (χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05). The observation group’s SP-100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210 positive rate were obviously higher than those of the control group (30.00%, 22.50%, 17.50%, 10.00%, 15.00% vs. 3.49%, 1.16%, 4.65%, 2.33%, 3.49%,P<0.05). The observation group’s sensitivity, specificity and coincidence rate was 92.50% (37/40), 87.50% (35/40), 95.00% (38/40), which were significantly higher than the control group with 84.88% (73/86), 77.91% (67/86), 87.21% (75/86) (P<0.05).ConclusionClinical application of ANA and autoimmune hepatitis antibody spectrum joint detection can improve the detection rate of clinical primary biliary cirrhosis, provides important reference value for the diagnosis and treatment.

Anti-nuclear antibody; Liver cirrhosis,primary,biliary; Autoimmune liver disease associated antibodies

223300 南京医科大附属淮安第一医院检验科(胡玲、谷磊、刘蓓蓓)，消化科(高成城)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.007

2014-06-13)