缺血性脑卒中患者血清基质金属蛋白酶-9、超敏C 反应蛋白水平与颈动脉粥样硬化的相关性

朱卫香，刘彦敏，韩亚军，王大力

论著·临床

缺血性脑卒中患者血清基质金属蛋白酶-9、超敏C 反应蛋白水平与颈动脉粥样硬化的相关性

朱卫香，刘彦敏，韩亚军，王大力

目的探讨急性缺血性脑卒中患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平与颈动脉粥样硬化的关系。方法选择发病72 h内的急性前循环缺血性脑卒中患者120例为观察组，应用彩色多普勒超声检查颈动脉粥样硬化斑块；应用酶联免疫法(ELISA)测定血清MMP-9、hs-CRP浓度，同时选取门诊健康体检者72例作为健康对照组。观察组根据颈动脉斑块的性质分为不稳定斑块亚组(39例)、稳定斑块亚组(51例)及无斑块亚组(30例)，将有斑块患者根据颈动脉狭窄程度分为轻度狭窄亚组(28例)、中度狭窄亚组(45例)、重度狭窄亚组(17例)，比较各组间血清MMP-9、hs-CRP浓度的差异。结果缺血性卒中患者MMP-9、hs-CRP水平较健康对照组明显升高(分别为t=11.716，t=10.759，P均<0.01)。随着颈动脉斑块不稳定性增加，MMP-9、hs-CRP水平升高(P均<0.01)； 随着颈动脉狭窄程度加重，MMP-9、hs-CRP水平也升高(P均<0.01)；且缺血性卒中患者急性期血清MMP-9与hs-CRP呈显著正相关(r=0.855,P<0.01)。结论MMP-9、hsCRP参与了急性缺血性脑卒中的发病过程，颈动脉粥样硬化严重程度不同的缺血性脑卒中患者血清MMP-9、hs-CRP水平存在差异， MMP-9和hs-CRP可能是不稳定性斑块及缺血性脑卒中的一个潜在血清标志物。

卒中，缺血性，急性；基质金属蛋白酶-9；超敏C反应蛋白；粥样硬化斑块，颈动脉

颈动脉粥样硬化是缺血性脑血管病的主要病因，与脑梗死的发生密切相关。目前动脉粥样硬化斑块的稳定程度受到了更多的关注。而血清基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在一定程度上可以反映斑块的稳定性。超敏C-反应蛋白(hs-CRP)作为炎性标记物与动脉粥样硬化斑块的形成、发展密切相关。本研究通过对急性缺血性脑卒中患者进行颈动脉彩色多普勒超声检查及血清MMP-9、hs-CRP水平的测定，观测缺血性脑卒中患者血清MMP-9、hs-CRP水平与颈动脉粥样硬化严重程度的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2007年12月—2010年2月唐山市协和医院和河北联合大学附属医院神经内科诊治发病72 h内的急性前循环缺血性脑卒中患者120例(观察组)，诊断均符合1995年中华医学会第四届全国脑血管病会议制定的诊断标准，并经头颅CT或MR证实。排除标准: (1)明确的肿瘤病史、自身免疫性疾病史；(2)各种感染性疾病、1年内患心肌梗死或进行大手术者、非动脉粥样硬化性脑卒中患者。120例中男67例，女53例；年龄39～82(62±10)岁；其中合并高血压60例，冠心病40例，糖尿病42例。同时选择门诊体检的健康者72例作为健康对照组，男33例，女39例，年龄40～81(61±11)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，且患者家属签署知情同意书。

1.2 观测方法

1.2.1 颈动脉超声多普勒检测： 采用美国ATL-HDI-5000型彩色多普勒超声仪，探头中心频率7～12 MHz。检测部位为颈总动脉远端、颈内动脉起始部和颈动脉分叉处。颈内动脉检测范围应达4～6 cm，观察内膜中层厚度(IMT)、有无斑块以及斑块的大小、形态、性质、管腔是否狭窄及狭窄程度。颈动脉粥样斑块诊断标准为颈动脉IMT≥1.2 mm，局部隆起，向管内突出[1]。根据超声特点将斑块分型：(1)不稳定斑块：局部呈低回声、等回声或混合回声的软斑；(2)稳定斑块：高、强回声伴或不伴声影的硬斑。颈动脉狭窄程度: 彩色多普勒超声仪自动计算出狭窄率,若同一血管内存在多处斑块或狭窄, 分析时仅考虑狭窄最严重的部位。(1)轻度狭窄：狭窄率<50%，灰阶图像显示局部斑块形成，管径相对减小，血流无明显变化；(2)中度狭窄：狭窄率为50%～69%，狭窄段血流出现加速度，狭窄远段病理性涡流形成；(3)重度狭窄：狭窄率为70%～99%，狭窄段流速进一步升高，狭窄近段流速相对减低，远段出现涡流和湍流混杂的血流信号；(4)血管闭塞：血流信号消失，无血流通过。

1.2.2 实验室检查： 患者入院后第2天采取空腹静脉血5 ml，静置1～2 h后3000 r/min离心，离心10 min后，吸取血清，放入-20℃冰箱，采用ELISA法分批测定MMP-9、hs-CRP浓度。血清MMP-9的ELISA试剂盒购于上海卓康科技有限公司，血清hs-CRP的ELISA试剂盒购于美国RB公司，均按试剂说明书严格进行操作。

2 结 果

2.1 MMP-9、hs-CRP浓度比较

2.1.1 2组间比较： 与健康对照组相比，观察组的血清MMP-9、hs-CRP浓度明显升高，差异有统计学意义(t=11.716，t=10.759，P<0.01)。

表1 2组MMP-9、hs-CRP浓度的比较

注：对照组比较，aP<0.01

2.1.2 不同斑块性质比较： 将观察组按颈动脉斑块性质分成3个亚组，即不稳定斑块亚组(39例)、稳定斑块亚组(51例)、无斑块亚组(30例)，进行方差分析，并用SNK法两两比较后显示：MMP-9、hs-CRP浓度不稳定斑块亚组>稳定斑块亚组>无斑块亚组(P均<0.01)。见表2。

表2 不同颈动脉斑块性质MMP-9、hs-CRP水平比较

注：与无斑块亚组比较，aP<0.01；与稳定斑块亚组比较，bP<0.01

2.1.3 不同狭窄程度比较： 将观察组颈动脉斑块患者按颈动脉狭窄程度分成轻(28例)、中(45例)、重(17例)度狭窄3个亚组，进行方差分析，并用SNK法两两比较后显示：MMP-9、hs-CRP浓度重度狭窄亚组中度亚组>轻度亚组(P均<0.01)。见表3。

表3 不同颈动脉狭窄程度MMP-9、hs-CRP水平比较

注：与轻度狭窄亚组比较，aP<0.01；与中度狭窄亚组比较，bP<0.01

2.2 Pearson相关分析 血清MMP-9水平与斑块不稳定程度及狭窄程度均呈显著正相关(分别为r=0.772、r=0.736，P均<0.01)，hs-CRP水平与斑块不稳定程度及狭窄程度均呈显著正相关(分别为r=0.609、r=0.571，P均<0.01)。且缺血性卒中患者急性期血清MMP-9与hs-CRP呈显著正相关(r=0.855,P<0.01)。

3 讨 论

越来越多的证据表明动脉粥样硬化是一种炎性疾病，炎性反应的激活可导致斑块的不稳定。不稳定斑块是以脂质为主的软斑块，表面有溃疡，或斑块内出血或炎性反应，易造成急性缺血性事件的发生[2]。而炎性标志物MMP-9在动脉粥样硬化和缺血性脑卒中中发挥重要作用[3～5]。MMP-9又称明胶酶B，是一种糖蛋白，其主要生理功能是降解细胞外基质，作用底物包括IV、V型明胶原。V 型明胶原是纤维帽及粥样斑块基底膜重要组成物质，MMP-9 可促使V 型明胶原进入平滑肌细胞内，并加速动脉粥样斑块破裂及粥样硬化进程[6]。Wang 等[7]研究指出，不稳定斑块容易脱落或出现破损，从而导致脑血管栓塞，引起急性脑梗死。本文通过对120例急性缺血性脑卒中患者血清MMP-9 水平进行检测，发现患者血清MMP-9水平明显高于对照组，提示MMP-9与缺血性脑卒中的发生密切相关，可能参与了急性缺血性卒中的发病过程，与国内外的研究结果一致[8，9]。

MMP-9在粥样硬化斑块处的血管重构、斑块的不稳定性及其破裂诱发的血管疾病都起着很重要的作用。Razuvaev等[10]研究了106例通过颈动脉内膜剥除术(CEA)获得的斑块，发现MMP-9和MMP-7在斑块中的表达要比正常动脉中高100倍。国内李毅等[11]对19例脑梗死死亡患者的颅内Wills动脉环(大脑中动脉起始段粥样斑块)标本进行研究，发现MMP-9在不稳定性斑块中的表达较在稳定性斑块中的表达均明显增加，表明MMP-9是促进动脉粥样硬化斑块不稳定的重要因素。Loftus等[12]还发现具有颈动脉粥样硬化斑块并有自发性栓塞证据的患者血浆MMP-9水平明显升高，因此认为血浆MMP-9水平可作为反映动脉粥样硬化斑块不稳定性的一个新的指标。Konstantino等[13]提出MMP-9是斑块不稳定的生化标志，可以作为降低急性心脑血管事件发生的潜在治疗靶点。本结果显示缺血性脑卒中患者随着其颈动脉粥样斑块不稳定程度的增加血清MMP-9水平明显升高；同时还显示随着缺血性脑卒中患者颈动脉狭窄程度加重，血清MMP-9水平也升高，且血清MMP-9与斑块不稳定程度及狭窄程度呈正相关。这提示血清MMP-9水平与颈动脉粥样硬化的严重程度相关，可能直接参与动脉粥样硬化的发生、发展及继发脑梗死，与Sapienza等[14]及Eldrup等[15]的研究结果一致。

CRP作为一种急性期蛋白，不仅是机体炎性反应的标志物之一，还是动脉粥样硬化的一种典型标志物[16，17]。尚广芹等[18]通过免疫组化染色证实，在早期粥样硬化动脉壁上的CRP沉积主要表达在终末补体复合物和泡沫细胞上，CRP可能通过激活补体系统和参与泡沫细胞形成的过程，促进动脉粥样硬化性损伤。hsCRP不仅是标记炎性反应的相关敏感指标，其含量可反映动脉粥样斑块内炎性反应强度[19]。本结果发现缺血性脑卒中患者随着其颈动脉粥样斑块不稳定程度的增加血清hs-CRP水平明显升高；同时还显示随着缺血性卒中患者颈动脉狭窄程度增加，血清hs-CRP水平也越高。这提示血清hs-CRP水平与颈动脉粥样硬化的严重程度密切相关，因此hs-CRP除了作为炎性标记物外，还是不稳定性动脉粥样硬化发生的危险信号。

本结果还发现脑卒中患者急性期血清MMP-9与hs-CRP水平呈显著正相关，而这恰好反映了体内炎性反应的程度，MMP-9与hs-CRP互相影响以促进脑卒中的发生、发展。因此MMP-9与hs-CRP作为颈动脉粥样硬化斑块形成的危险因素之一不仅反映了动脉粥样硬化的活跃状态， 而且MMP-9、hs-CRP水平增高是导致斑块不稳定并形成血栓的原因。因此监测血清MMP-9、hs-CRP水平有可能及早发现不稳定性斑块，及时采取干预措施稳定斑块，从而降低缺血性脑卒中的发病率。

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RelationshipbetweenlevelsofserumMMP-9,hs-CRPandcarotidatherosclerosisinischemicstroke

ZHUWeixiang*,LIUYanmin,HANYajun，WANGDali.

*DepartmentofNeurology,TangshanXieheHospital,Tangshan063004,China

ObjectiveTo investigate the relationship among serum matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), high sensitive C reactive protein (hs-CRP) level and carotid atherosclerosis in acute cerebral ischemic patients.MethodsOne hundred and twenty cases of onset within 72 h acute anterior circulation ischemic stroke were enrolled as the observation group, ultrasound examination of carotid atherosclerotic plaque by color Doppler were performed; using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to determine the serum MMP-9, hs-CRP concentrations, and selected 72 healthy patient as healthy control group. According to the property of carotid plaque, the observation group is divided into unstable plaque sub group (39 cases), stable plaque sub group (51 cases) and non-plaque sub group (30 cases), according to the degree of carotid artery stenosis, they were divided into mild narrow sub group (28 cases), moderate stenosis sub group (45 cases) and severe narrow sub group (17 cases), the difference of serum MMP-9, hs-CRP concentrations were compared among these groups.ResultsThe ischemic stroke patients’ MMP-9, hs-CRP were higher than the healthy control group (t=11.716,t=10.759, respectively,P<0.01). With the increase of carotid artery plaque instability, MMP-9, hs-CRP levels were increased (P<0.01); along with the degree of carotid artery stenosis aggravates, MMP-9, hs-CRP levels were also elevated (P<0.01); and the acute phase of ischemic stroke patients’ serum MMP-9 were positive correlated with hs-CRP (r=0.855,P<0.01).ConclusionMMP-9 and hs-CRP are involved in the pathogenesis of acute ischemic stroke, different carotid atherosclerosis severity related to different serum MMP9 and hs-CRP level, MMP-9 and hs-CRP may be a potential biomarker for instabilities of plaque and ischemic stroke.

Stroke,ischemic,acute; Matrix metalloproteinase-9; High sensitive C reactive protein ; Atherosclerosis plaque; Carotid artery

063004 唐山市协和医院神经内科二病区(朱卫香、韩亚军)； 063500 河北省滦南县医院神经内科(刘彦敏)； 063000 河北联合大学附属医院神经内科(王大力)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.004

2014-08-14)