氟伐他汀与促红细胞生成素联合预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

蔡智慧 王兴红

氟伐他汀与促红细胞生成素联合预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

蔡智慧 王兴红

目的 观察氟伐他汀与促红细胞生成素（EPO）联合预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（I/R）的保护作用。方法 建立大鼠心肌I/R模型。将50只SD大鼠随机分为假手术组（SHAM）、缺血再灌注组（I/R）、EPO预处理组（I/R+E）、氟伐他汀预处理组（I/R+F）和氟伐他汀联合EPO预处理组（I/R+E+F），每组10只。实验结束后，测定各组血清中心肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白（cTnI）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平以及血清中一氧化氮（NO）含量和内皮型NO合酶（eNOS）活性。结果 氟伐他汀和EPO联合预处理可进一步明显降低血清中CK-MB、cTnI和TNF-α的含量，提高NO和eNOS的水平。结论 氟伐他汀和EPO联合预处理对大鼠心肌I/R有协同保护作用。

氟伐他汀；促红细胞生成素；心肌缺血再灌注损伤；预处理

单一药物预处理对心肌I/R保护作用的报道较多，但促红细胞生成素（EPO）与他汀类药物联合治疗，对心肌是否能起到协同保护作用，关于此方面的研究比较少见。本实验通过建立大鼠心肌I/R模型，旨在观察氟伐他汀与EPO联合预处理对I/R心肌是否具有协同保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组 将50只SD大鼠（河南省实验动物中心提供）随机分为5组：假手术组（SHAM）、缺血再灌注模型组（I/R）、EPO预处理组（I/R+E）、氟伐他汀预处理组（I/R+F）、氟伐他汀联合EPO预处理组（I/R+E+F），每组10只。氟伐他汀预处理组与氟伐他汀联合EPO预处理组均以氟伐他汀粉剂溶于0.9%氯化钠注射液连续灌胃10 mg/（kg·d）2周，EPO预处理组与氟伐他汀联合EPO预处理组均在术前24 h腹腔注射EPO 1 500 U/kg。假手术组和I/R模型组予以注射0.9%氯化钠注射液对照。

1.2 动物模型制备 采用SD大鼠穿线结扎左冠状动脉前降支30 min，再灌注2 h的方法制备心肌I/R模型。假手术组仅穿线不结扎，以心电图和心肌颜色改变作为I/R造模成功的标志。

1.3 血清中CK-MB、cTnI、TNF-α和NO、eNOS的测定 各组大鼠再灌注2 h后从颈总动脉取血2～3 ml，以3 000 r/min离心10 min（离心半径r＝2 000 mm），分离出血清-20℃保存备用。采用ELASA法测定血清CK-MB、cTnI、TNF-α和NO、eNOS的含量，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行分析，计量资料用±s表示，组间比较用方差分析， P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清中CK-MB、cTnI和TNF-α含量 I/R组血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平明显高于SHAM组（P＜0.01）；与I/R组比较，I/R+E组、I/R+F组或I/R+E+F组血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平较I/R组降低（P＜0.05），与I/R+E或I/R+F组比较，I/R+E +F组血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平进一步降低（P＜0.05），见表1。

表1 各组血清CK-MB、cTnI、和TNF-α比较(±s)

表1 各组血清CK-MB、cTnI、和TNF-α比较(±s)

注：与SHAM组比较＃P＜0.01；与I/R组比较▲P＜0.05；与I/R+E或I/R+F组比较☆P＜0.05

组别 n CK-MB(IU/L) cTnI(μg/L) TNF-α(μg/L) SHAM 10 501±31 0.35±0.04 34±3 I/R 10 2 010±76＃2.3±0.8＃114.±22＃I/R+E 10 1 511±53＃▲1.5±0.4＃▲73±11＃▲I/R+F 10 1 350±43＃▲1.7±0.3＃▲74±12＃▲I/R+F+E 10 1 159±30＃▲☆1.09±0.11＃▲☆65±9＃▲☆

2.2 血清中NO含量和eNOS活性 I/R组的血清NO和eNOS含量明显低于SHAM组（P＜0.01）；与I/R组比较，I/R+E组或I/R+F组的NO和eNOS含量增加（P＜0.05）；与I/R+E或I/R+F组比较，I/R+E+F组的NO和eNOS含量进一步增加（P＜0.05），见表2。

表2 各组血清NO含量和eNOS活性比较(±s)

表2 各组血清NO含量和eNOS活性比较(±s)

注：与SHAM组比较＃P＜0.01；与I/R组比较▲P＜0.05，※P＜0.01；与I/R+E或I/R+F组比较☆P＜0.05

组别 n NO含量(μmol/L) eNOS活性(ng/L) SHAM 10 29±4 23±4 I/R 10 14±4＃ 8±1＃ I/R+E 10 17±3＃▲ 14±2＃▲ I/R+F 10 20±4＃▲ 15±3＃▲ I/R+F+E 10 23±4*▲☆ 20±2*※☆

3 讨论

心脏缺血再灌注损伤在临床上较为常见，心脏发生I/R的过程中，细胞内产生大量的自由基从而导致细胞损伤，细胞膜的完整性被破坏[1]，细胞内的CK-MB、cTnI从细胞内释放出来，尤其是cTnI在心肌损伤后出现早、持续时间长、特异性强、灵敏度高，可作为目前诊断心肌损伤较好的标志物。有研究证明，EPO可抑制氧自由基生成从而减轻细胞膜的氧化损伤，维持细胞膜稳定[2]。另外，他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂，是临床上经常使用的有效调脂药物[3]。近年来，他汀类药物的非降脂作用日益受到人们关注，临床研究也发现早期应用他汀类药物可以改善心肌I/R损伤，但其作用机制尚未完全阐明。本实验结果显示，EPO和氟伐他汀都能减少损伤标志物的漏出，联合使用使漏出物进一步减少。此外，心脏发生I/R时还会引起强烈的炎性反应，其中TNF-α是一种重要的炎性介质。在缺血和再灌注期间，心肌细胞内的TNF-α表达明显上调，本研究表明，氟伐他汀和EPO联合预处理组比单一药物组更能减少I/R后TNF-α的生成，从而减轻心肌损伤，保护心脏功能。

近年来，很多研究证实NO在心肌I/R时发挥了关键的作用。NO不仅可以使冠脉舒张、提高缺血心肌的收缩能力，而且还具有消除自由基、保护内皮细胞等功能[4]。血管内皮细胞产生的NO需要内皮型NO合酶（eNOS）的参与，实验结果显示，EPO和氟伐他汀预处理均能上调eNOS的活性，使内皮细胞产生NO增多从而改善内皮功能，联合使用效果更为明显，但其联合作用的靶点还有待进一步研究。

综上所述，氟伐他汀与EPO联合预处理对大鼠心肌I/R有协同保护作用，其机制可能与稳定细胞膜、抑制炎性反应及增加内源性NO等有关，有待于进一步的实验研究。

[1] 蔡智慧,郑亚萍.冠心苏合丸对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的作用[J].广州中医药大学学报,2013,30(5):722-724.

[2] Bullard AJ,Govewalla P,Yellon DM.Erythropoietin protects the myocardium against reperfusion injury in vitro and in vivo[J].Basic Res Cardiol,2005,100(5):397-403.

[3] 王兴红,蔡智慧,李海霞.氟伐他汀对大鼠缺血再灌注损伤心肌eNOS和SERCA活性的影响[J].当代医学,2012,18(19):6-8.

[4] 沈继龙,朱克军,周情太,等.不同剂量磷酸肌酸钠预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国现代医学杂志,2013, 23(15):23-27.

R965

A

1673-5846(2014)07-0037-02

漯河医学高等专科学校，河南漯河 462002