芪生胶囊中芍药苷的含量测定

石小鹏，缪珊，毕琳琳，李捷，苗青，党碧艳，栗艳

(1.第四军医大学西京医院药剂科，西安 710032;2.第四军医大学药学系天然药物学教研室，西安 710032)

芪生胶囊是由白芍、生地、黄芪、延胡索等8味中药组成的复方制剂［医院制剂批准文号:兰制字(2011)F68138］，具有滋阴清热、益气活血的功效，主要用于治疗萎缩性胃炎。白芍是方中君药，有镇痛和镇静作用，其中芍药苷对平滑肌有解痉和抑制作用，并有良好的抗炎及抗溃疡作用［1-3］。因此，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定其含量［4-10］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司);LC-20AT型二元高压梯度泵;SPD-M20A型紫外检测器;LC-solution工作软件;SB5200型超声波提取器(上海必能信超声仪器有限公司);R200D型电子分析天平(德国Sartorius公司)。

1.2 试药 芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，含量＞97%，批号:110713-200910);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯;芪生胶囊由第四军医大学药物研究所提供(批号:120801，120802，120803)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性实验 Kromasil C18色谱柱(4.6mm ×250mm，5 μm)，甲醇-水(15∶85)为流动相，流速1.0mL·min－1，检测波长230 nm，柱温:室温，进样量20 μL，理论塔板数按芍药苷峰计算不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品6.25 mg精密称定，加甲醇溶解，用甲醇稀释定容至25mL，制成浓度为0.25 mg·mL－1对照品溶液，作为对照品溶液贮备液备用。

2.3 供试品溶液的制备 取芪生胶囊内容物约0.3 g，精密称定，加75%甲醇20mL，摇匀，室温放置过夜，次日超声 20min，2 500 r·min－1离心 10min(r=6.5 cm)，分取上清液，药渣再加75%甲醇20mL，摇匀，超声20min，离心10min，分取上清液，合并2次上清液并滤过(滤膜孔径0.45 μm)，滤液置50mL量瓶，用75%甲醇定容至刻度，作为供试品贮备液，精密量取供试品贮备液1mL，加甲醇稀释至2mL，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照实验 按处方制备缺白芍的芪生胶囊阴性对照样品。取阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，精密吸取对照品溶液、缺白芍阴性对照溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。芍药苷对照品溶液与芪生胶囊样品溶液在同一保留时间检出色谱吸收峰，而阴性对照溶液在此保留时间未检出色谱吸收峰(图1)，表明处方中其他药材不干扰芍药苷的含量，说明芍药苷专属性较强。

2.5 线性范围考察 精密吸取对照品贮备液10，20，30，40，50 μL，分别移入1mL 量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别吸取20 μL注入液相色谱仪，按以上色谱条件测定，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程Y=30 604X－7 263，r=0.999 9。结果表明，芍药苷在浓度为 2.5 ～12.5 μg·mL－1时，线性关系良好。

2.6 精密度考察 取芪生胶囊(批号:120802)供试品溶液和芍药苷对照品溶液(7.5 μg·mL－1)，重复进样5次，按以上色谱条件测定峰面积，测得供试品溶液峰面积RSD=0.42%(n=5)，对照品溶液峰面积RSD=0.67%(n=5)，结果表明精密度符合测定要求。

2.7 稳定性考察 取芪生胶囊(批号:120801)供试品溶液和芍药苷对照品溶液(5.0 μg·mL－1)，按以上色谱条件，每隔2 h进样一次，共进5次，测得供试品溶液峰面积RSD=0.81%(n=5)，对照品溶液峰面积RSD=0.56%(n=5)，结果表明芍药苷在8 h内稳定。

A.阴性对照品;B.对照品;C.供试品;1.芍药苷图1 芍药苷高效液相色谱图A.negative control;B.control substance;C.sample;1.paeoniflorinFig.1 HPLC chromatogram of paeoniflorin

2.8 重复性考察 取芪生胶囊同一批号内容物(批号:120803)约0.3 g，精密称定，共称5份样品，按供试品溶液制备方法制备，作为供试品溶液，精密吸取供试品液20 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定含量，结果平均含量为 3.68 mg·g－1，RSD=0.44%(n=5)。

2.9 加样回收率考察 精密称取已知含量的同一批号样品，置圆底烧瓶，分别加入0.5 mg·mL－1芍药苷对照品2，2，3，3，4 和4mL，按供试品溶液项下的制备方法制成供试品溶液，再按上述色谱条件进行测定，计算芍药苷回收率，测定结果平均回收率99.97%，RSD=0.94%，说明此方法具有良好的准确性，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率测定结果Tab.1 Determination results of paeoniflorin recovery

2.10 样品测定 取3批芪生胶囊，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，再按上述色谱条件注入液相仪中，测定芍药苷的含量，结果见表2。

表2 芪生胶囊中芍药苷含量测定结果Tab.2 Determination results of paeoniflorin content in Qisheng Capsule

3 讨论

本复方制剂中，白芍作为方中君药，具有镇痛镇静作用，而芍药苷作为其含量最高的有效成分，具有抗炎和抗溃疡作用，故选用芍药苷含量作为本制剂的质量控制指标。

参考相关文献，对芍药苷进行200～400 nm全波长扫描，结果在230 nm时芍药苷的吸收值最大，故选用230 nm波长为检测波长。经过反复考察，最终选择甲醇-水(15∶85)为流动相，流速为 1.0mL·min－1，检测波长为230 nm，其分离效果最好。

研究表明，本实验采用HPLC法测定芍药苷含量，该检测方法准确可靠，不仅可作为芪生胶囊的质量评价方法，还为其质量控制标准的建立提供了实验依据。

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