不同厂家川芎配方颗粒中阿魏酸含量比较*

周滢，杨军宣

(重庆医科大学中医药学院，重庆 400016)

川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiongHort.)的干燥根茎，始载于《神农本草经》，具有活血行气、祛风止痛的功效，主要用于胸痹心痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛、月经不调、经闭痛经、癥瘕腹痛、头痛、风湿痹痛等［1-2］。目前，国内已有6家企业生产川芎配方颗粒，但笔者未见对不同厂家生产的川芎配方颗粒进行质量评价的研究，为评价不同厂家川芎配方颗粒的质量，笔者在本实验中以阿魏酸的含量为指标，参考文献［3-4］，采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)对6个厂家川芎配方颗粒进行了比较研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦 1200B型高效液相色谱仪(G1312B型二元泵，G1315C型 DAD检测器，ChemStation化学工作站);电子天平:BP211D(Sautoris，德国)d=0.1/0.01 mg，max=210/80 g;超声波清洗器:KQ5200DB型，昆山市仪器有限公司。

1.2 试药 阿魏酸对照品(购自中国食品药品检定研究院，含量:99.8%，批号:110773-200611)，6 批川芎配方颗粒分别为:A，批号:A091181-01;B，批号:0906160;C，批号:0912002;D，批号:0902021;E，批号:0908008;F，批号:090401。甲醇(迪马公司，色谱纯)，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 称取阿魏酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每毫升含0.035 mg溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称定质量，超声处理(功率100 W，频率40 kHz)30min，静置，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 取本品缺川芎药材的配方颗粒1.0 g，照供试品的制备方法制成阴性样品溶液。

2.1.4 色谱条件 色谱柱:C18柱(250mm×4.6mm，5 μm，Phenomenex公司);流动相:甲醇-1%醋酸溶液(30∶70);检测波长:321 nm;流速:1.0mL·min－1，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4 000［5］。在此条件下，川芎配方颗粒中阿魏酸的分离度好，理论板数较高，峰形对称性好。结果见图1。

2.1.5 方法学考察

图1 川芎配方颗粒HPLC图

2.1.5.1 标准曲线的绘制 分别精密吸取阿魏酸对照品溶液(0.035 mg·mL－1)1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以阿魏酸的峰面积值(Y)为纵坐标，以阿魏酸的进样量(X)为横坐标，计算得回归方程为Y=2 744.5X－0.652 7，R2=0.999 9，结果表明，阿魏酸进样量在0.035～0.70 μg范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

2.1.5.2 精密度实验 精密吸取对照品溶液(0.035 mg·mL－1)10 μL，连续进样 6 次，测定峰面积。计算得RSD为0.85%(n=6)，结果表明仪器精密度良好。

2.1.5.3 重复性实验 称取同一批样品(批号:0912002)，精密称定，按上述测定方法制备样品供试品溶液，共6份，测定峰面积，RSD 为0.89%(n=6)，表明该方法重复性良好。

2.1.5.4 稳定性实验 精密吸取对照品溶液(0.035 mg·mL－1)和供试品溶液各 10 μL，室温下放置，分别于0，2，4，6，8，10 h 进样，按上述色谱条件测定阿魏酸的峰面积，计算得对照品RSD为1.17%(n=6)，供试品RSD为1.08%(n=6)，表明对照品溶液和供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.1.5.5 加样回收率实验 取已知含量的样品(批号:0912002，含量为 1.36 mg·g－1)0.25 g，精密称定，共 6份，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品溶液(0.035 mg·mL－1)10mL，按供试品溶液制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，计算回收率，平均加样回收率为99.47%，RSD为1.23%(n=6)，样品回收率良好。结果见表1。

2.2 样品含量测定结果 分别取不同批号的川芎配方颗粒约0.5 g，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，按上述色谱条件测定阿魏酸峰面积，计算阿魏酸含量，所测结果见表2。

3 讨论

3.1 超声提取时间的确定 在供试品溶液的制备中，本研究对样品的提取方法进行了考察，发现超声提取与加热回流的阿魏酸提取率相等，因超声提取方法相对简便且易于操作，为此采用60℃时超声处理作为提取方法。同时考察了超声时间对提取率的影响，发现随着超声时间由10，20min至30min时，阿魏酸的提取率不断增加，而超声提取40，60min，阿魏酸的含量不再增加，因此确定超声提取时间为30min。

表1 阿魏酸加样回收实验结果 mg

表2 不同厂家川芎配方颗粒中阿魏酸含量测定结果

3.2 川芎配方颗粒的质量标准需要尽早制定 由于不同厂家的每克配方颗粒剂相当于原药材饮片的当量并不相同，因此在对不同厂家川芎配方颗粒中阿魏酸含量进行比较时，按每克原药材饮片所提取的阿魏酸含量进行换算，结果表明，6个厂家样品的阿魏酸含量差异显著，含量最低与最高厂家的差异可达8倍多(见表2)。这可能与两个主要因素有关，一是与不同厂家投料的川芎饮片质量差异有关，因为阿魏酸含量也可能受川芎产地、采收季节、储存时间等因素影响;二是与厂家采用的生产工艺不同有关，这也可能是造成阿魏酸含量差异显著的重要原因。因此，生产厂家还应采用合理的生产工艺，相关管理部门也应制定统一的质量标准对其质量进行控制，以减少厂家之间川芎质量的差异，提高临床用药的均一性。

3.3 阿魏酸转移率低，有待考察醇提工艺 2010年版《中华人民共和国药典》规定川芎饮片含阿魏酸不得低于 0.10% ，相当于不得少于 1 mg·g-1［5］，若按 1 g川芎饮片含1 mg阿魏酸计算，6个厂家中含量最高的厂家D，其配方颗粒中阿魏酸的转移率也仅有57.7%，传统中药多为煎剂，因此目前厂家多采用水提取、浓缩的工艺制备配方颗粒。但在传统中医实践中，也有相当一部分中药在临床中采用酒浸或黄酒煎煮使用。因此，若阿魏酸采用醇提方法制备配方颗粒或者川芎饮片在较低温下煎煮提取，可能会大大提高有效成分的溶出和减少阿魏酸的损失，可能对减少原料药的投入、节省中药资源和降低成本有积极的意义。下一步可考虑在药效、毒理、临床疗效研究的支持下，对川芎醇提工艺的可行性进行探讨。

［1］张红梅，宋景政，谭红胜，等.从汤剂到颗粒剂:中药配方颗粒20年回顾与展望［J］.世界科学技术——中医药现代化，2012，14(4):1741－1743.

［2］高学敏.中药学［M］.北京:中国中医药出版社，2007:312.

［3］张昕莹，郭淑云，张文娟，等.不同提取方法对川芎和香附有效成分溶出度的比较［J］.医药导报，2013，32(3):350－353.

［4］宋金春，杨鹤，胡传芹，等.反相高效液相色谱法同时测定血清中阿魏酸和川芎嗪浓度［J］.医药导报，2004，23(1):45－46.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:38.