临床生化检验中改良终点法和原终点法的应用比较

张士君

临床生化检验中改良终点法和原终点法的应用比较

张士君

目的比较改良终点法和原终点法在临床生化检验中的应用。方法以氧化酶法对血清葡萄糖进行测定为例, 依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价方案, 比较分析改良终点法和原终点法的相关性, 并评价二者的精密度。结果改良终点法和原终点法的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)；与终点法比较, 正常浓度下改良终点法测定的批内CV和总CV明显更高, 异常浓度下明显更低, 差异有统计学意义(P＜0.05)。结论临床生化检验中改良终点法的精密度明显高于原终点法, 临床推广应用价值显著。

生化检验；改良终点法；原终点法

终点法是临床生化检验中最常用的一种检测方法, 它计算待测物浓度的方法为混合样品和试剂, 反应一定时间后达到平衡点(终点)。一点终点法和两点终点法是终点法的两个主要类型［1］, 依据方法学理论, 作者在对程序进行测定的过程中将改良一点终点法设计了出来, 同时以氧化酶法对血清葡萄糖进行测定为例, 依据NCCLS制定的评价方案, 比较分析了改良终点法和原终点法的相关性, 并评价了二者的精密度, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1检验材料 所用仪器为MODULAR DPP 全自动生化分析仪, 在测定时保证仪器的工作状态良好；所用试剂为Lot No.522 UN/2标准血清和Level2-780UN、Level 3-597UE质控血清, 所用试剂盒为液体单试剂型(氧化酶法)葡萄糖测定试剂盒；所用标本为血清标本, 这些标本均没有溶血、脂浊等, 1 h内完成所有检测；葡萄糖标准液的精确规格［2.00 g/dl (111.00 mmol/L)］。

1.2检验方法

1.2.1相关性比较 定标时运用RANDOX标准血清, 室内质控在每次测定中必不可少。依据NCCLS 制定的评价方案,每天将10份临床标本收集起来, 这些标本的葡萄糖浓度有高、中、低三个类型, 按1-10号顺序分别运用改良终点法与原终点法测定, 然后按10-1的顺序分别运用改良终点法与原终点法测定, 取两次测量结果的均值。进行10 d的连续测量, 标本数为200份, 运用配对t检验及直线回归分析两种方法所得结果。改良终点法和原终点法的测光点、波长、样品量、试剂量R1、反应方向、单点定标参数具体见表1。

表1 改良终点法与原终点法的程序参数设置(葡萄糖测定)

1.2.2精密度 在对精密度进行测算时严格依据NCCLS制定的评价方案, 将2份质控血清选取出来, 其中一份具有正常的浓度, 另一份具有异常的浓度, 对其进行复溶, 复溶时严格依据说明书, 然后将其在塑料管中分装, 每管250 μl,在-20℃的温度下将封闭管口的两种液体冷冻保存, 每次使用前和使用后分别让其融化到室温和丢弃, 每次使用过程中双份测定每份浓度的质控血清, 试验做到定时定点, 2批/d,上、下午各1次, 共进行20 d的测定, 同时进行室内质控,计算出批内的不精密度, 然后计算出总不精密度。

1.3统计学方法 采用统计学软件SPSS17.0处理本次研究中各项临床指标。计量资料以均数±标准差表示,均采用配对t检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1相关性 回归方程为Y=1.0112 X-0.0381, r=0.9992(n=100),改良终点法与原终点法测定结果之间的差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2精密度 正常浓度下改良终点法测定的批内CV和总CV均明显比原终点法高, 差异有统计学意义(P＜0.05), 异常浓度下改良终点法测定的批内CV和总CV均明显比原终点法低, 差异有统计学意义(P＜0.05)。具体见表2。

表2 改良终点法与原终点法测定的精密度结果比较

3 讨论

近年来, 在生化检验中, 终点法得到了日益广泛的应用,总蛋白双缩脲法、葡萄糖氧化酶法等是临床生化检验中的常用实验, 极具代表性［2］。通常情况下, 临床手工操作完成终点法。在对终点法进行改良的过程中严格依据了其检测原理,即减半混合样品和试剂量, 前提是样品和试剂的比例保持不变, 在终点前(仪器测光前)将等量的水加入其中均匀稀释,然后对其吸光度进行测定。在将水加入第二试剂的情况下,在全自动生化分析仪上, 可以使单试剂终点法和双试剂终点法相互转换；在第三试剂中注水的情况下, 双试剂终点法和三试剂终点法也可以相互转换。

随着全自动生化分析仪的日益广泛的应用, 生化分析的智能化、微量化日益突出, 目前广大检验工作者的一个工作和研究重点就是在对检测方法进行有效改良的过程中运用先进的检测设备, 从而将试剂成本减少到最低限度［3］。作者在临床生化检验工作中对终点法进行了改良, 经室内质控及室间质量评价所获取的临床效果是令人极为满意的, 通常情况下不需要稀释高浓度标本, 这是因为测定线性范围较宽, 同时可以将原终点法中所使用的试剂量减半, 从而达到了将实际成本减少到最低限度的目的。

综上所述, 在临床生化检验中高浓度时改良终点法的精密度比原终点法优, 极大节约了成本, 值得在临床广为推广。

［1］ 高小文, 孔花娟, 李筱, 等.葡萄糖氧化酶双试剂终点法测量模式的系统分析.检验医学与临床 , 2014(1):49-51.

［2］ 鲁鸿昊, 高静, 董振南, 等.终点法测定缺血修饰白蛋白(IMA)的评价及其应用研究.标记免疫分析与临床, 2012, 19(1):44-46.

［3］ 黄健, 张刘冬.改良终点法在临床生化检验中的应用探讨.海南医学, 2010, 21(22):46-47.

2014-06-04］

256410 山东省淄博市桓台县果里医院检验科