p53、bcl-2、caspase-3在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析

张黎黎张洁张林于洋刘堃△

临床研究

p53、bcl-2、caspase-3在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析

张黎黎1张洁2张林1于洋3刘堃1△

目的探讨p53、bcl-2、caspase-3在老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及相关性。方法收集经手术后病理学检查确诊的117例老年晚期NSCLC患者的临床资料和存档石蜡组织标本。免疫组织化学方法检测肿瘤组织中p53、bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况，分析p53、bcl-2、caspase-3蛋白表达的相关性及其与患者临床病理学特征的关系。结果117例老年晚期NSCLC组织标本中，p53、bcl-2、caspase-3的阳性表达率分别为42.74％（50/117）、38.46％（45/117）、36.75％（43/117）。p53阳性表达率在低分化、中央型、有淋巴结转移的鳞癌患者中较高；bcl-2阳性表达率在高分化、有淋巴结转移患者中较高；caspase-3阳性表达率在高分化、无淋巴结转移患者中较高。NSCLC组织中bcl-2与caspase-3表达呈正相关（r=0.262,P=0.003）。结论p53、bcl-2、caspase-3可能在老年晚期NSCLC的发生和发展过程中起重要调控作用，为临床病理诊断提供理论依据。

肿瘤抑制蛋白质p53；原癌基因蛋白质c-bcl-2；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3；癌,非小细胞肺；老年人；非小细胞肺癌

肺癌是最常见的恶性肿瘤，其预后较差，5年生存率较低[1]。80％以上的肺癌为非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）[2]，其中约一半发生在65岁以上的老年人，而且2/3的NSCLC患者在确诊时已是恶性程度较高的ⅢB或Ⅳ期[3]。肿瘤的发生是一个复杂的过程，在这一过程中主要起负调控作用的是细胞凋亡，细胞凋亡的过程受p53等凋亡促进因子和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)等凋亡抑制因子的共同调节。而天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族在细胞凋亡阶段起重要作用。本研究应用免疫组织化学方法，对117例老年晚期NSCLC肿瘤组织中p53、bcl-2和caspase-3蛋白的表达进行综合检测，探讨3种蛋白表达情况的相关性及其与NSCLC临床病理学特征之间的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象收集2007年2月—2008年2月辽宁医学院附属第一医院收治的由术后病理学检查确诊的117例老年晚期NSCLC患者资料及存档石蜡组织标本。其中，男80例（68.38％），女37例（31.62％）。年龄60～76岁，平均年龄（64.87±3.73）岁。有吸烟史60例（51.28％），无吸烟史57例（48.72％）。临床分期：Ⅲ期63例（53.85％），Ⅳ期54例（46.15％）。病理类型：鳞癌47例（40.17％），腺癌52例（44.44％），腺鳞癌3例（2.56％），大细胞癌5例（4.27％），其他10例（8.55％）。分化程度：低分化43例（36.75％），中分化51例（43.59％），高分化23例（19.66％）。无淋巴结转移62例（52.99％），有淋巴结转移55例（47.01％）。肿瘤部位：中央型60例（51.28％），周围型57例（48.72％）。

1.2 主要试剂兔抗人CPP-32多克隆抗体（浓缩型1∶50稀释）、兔抗人p53单克隆抗体（浓缩型1∶100稀释）、兔抗人bcl-2单克隆抗体（1∶100稀释）、S-P试剂盒、DAB显示试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色标本经连续石蜡切片（4 μm），免疫组化技术采用SP法,用PBS替代一抗作为阴性对照，用已知的阳性病例作为阳性对照。

1.4 结果判定以半定量法判定结果。p53主要表达于癌细胞胞核，caspase-3主要表达于癌细胞胞浆，bcl-2主要表达于癌细胞胞浆，阳性细胞呈棕黄色或棕褐色颗粒。每例标本随机读取5个不同高倍视野（各计100个细胞），计算肿瘤细胞中p53、bcl-2和caspase-3表达的阳性细胞数。阳性细胞数计分：0～5％为0分，6％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％ 为3分，＞75％为4分。再按阳性细胞染色强度计分：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕黄/棕褐色为3分。两者之和所得总分进行判断，0～2分为阴性（-），3～7分为阳性（+）。

1.5 统计学方法应用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理。计数资料采用χ2检验；采用Spearman进行等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1p53、bcl-2和caspase-3蛋白的表达免疫组织化学检测结果显示：NSCLC组织中p53、bcl-2和caspase-3的阳性表达率分别为42.74％（50/117）、38.46％（45/117）、36.75％（43/117），见图1。

Fig.1 Expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 in NSCLC tissues （SP,×400）图1 NSCLC组织中p53、bcl-2、caspase-3的表达（SP,×400）

2.2p53、bcl-2和caspase-3表达与患者临床病理特征的关系见表1。NSCLC组织中，低分化及有淋巴结转移患者肿瘤组织中p53阳性表达率高于高分化和无淋巴结转移患者（P＜0.05）；中央型、鳞癌患者肿瘤组织中p53阳性表达率明显高于周围型、其他病理分型患者（P＜0.05），不同性别、吸烟史、临床分期的NSCLC患者组织中p53阳性表达率比较，差异无统计学意义。NSCLC组织中，高分化及有淋巴结转移患者肿瘤组织中bcl-2阳性表达率高于低分化和无淋巴结转移患者（P＜0.05）；不同性别、吸烟史、肿瘤部位、临床分期、病理类型的NSCLC患者组织中bcl-2阳性表达率比较，差异无统计学意义。NSCLC组织中，高分化及无淋巴结转移患者肿瘤组织中caspase-3阳性表达率高于低分化及有淋巴结转移患者（P＜0.05）；不同性别、吸烟史、肿瘤部位、临床分期、病理类型的NSCLC患者组织中caspase-3阳性表达率比较，差异无统计学意义。

2.3NSCLC患者肿瘤组织p53、bcl-2和caspase-3表达的相关性NSCLC组织中，p53与bcl-2、caspase-3表达无明显相关性，bcl-2与caspase-3表达呈显著正相关，见表2～4。

Tab.1 Relationship between expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 with clinicopathological characteristics of NSCLC tissues表1 p53、bcl-2和caspase-3的表达与NSCLC患者临床病理学特征的关系例（％）

Tab.2 Relationship between expressions of p53 and bcl-2 in NSCLC tissues表2 NSCLC组织中p53和bcl-2表达的相关性

Tab.3 Relationship between expressions of p53 and caspase-3 in NSCLC tissues表3 NSCLC组织中p53和caspase-3表达的相关性

Tab.4 Relationship between expressions of bcl-2 and caspase-3 in NSCLC tissues表4 NSCLC组织中bcl-2和caspase-3表达的相关性

3 讨论

肺癌已成为世界范围内发病率和死亡率最高的癌症[4]。我国已逐渐成为老龄化国家，且老年肺癌的发病率呈递增趋势。经研究证实，肺癌的发生与抑癌基因的失活及原癌基因的激活有关。p53是目前公认的抑癌基因，机体内最重要的抑癌基因为野生型p53基因，且大约50％以上的人类肿瘤有p53基因的缺失和突变。因此，一些肿瘤的发生是p53基因的缺失或突变所致。然而，p53基因突变谱的不同可能使肺癌的易感性及相应肿瘤的形成受到影响。Bcl-2是原癌基因，它可以抑制许多凋亡信号从而影响细胞的凋亡，并协助细胞逃避免疫系统监视作用，且与人类肿瘤的发生密切相关。Bcl-2基因定位于人染色体的18q21，由230 kb组成，含有3个外显子，在正常情况下不表达或低表达。由于凋亡细胞的减少，细胞数目相应增多，导致细胞增殖与凋亡的平衡打破，并且细胞的恶性转化可能性增大，进而形成肿瘤。研究证实，bcl-2基因是凋亡抑制基因，可异常延长细胞的生存时间，促进有转化作用的基因突变。caspase-3是caspase家族中最重要的成员，是细胞凋亡的重要执行者。细胞凋亡最终均需caspase-3介导的信号传导途径。caspase-3蛋白与肺癌关系密切。黄凯等[5]研究表明，在NSCLC中caspase-3基因可抑制肿瘤细胞的凋亡，促进了肿瘤细胞的生长，在NSCLC的发生发展中可能起到重要的作用。

研究表明，不同的p53基因突变谱可能使肺癌的易感性及相应肿瘤的形成受影响，突变型p53蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率为30％～65％[6]。本研究结果显示，非小细胞肺癌p53的阳性表达率为42.74％，与国内外文献报道相近[7-8]。本研究中，NSCLC组织中p53阳性表达率在低分化、中央型、有淋巴结转移的鳞癌患者中较高。非小细胞肺癌bcl-2的阳性表达率为38.46％，与文献报道相近[9]，而与Qin等[10]的研究结果相差较大。其结果不一致可能是由于本组患者均为60岁以上的NSCLC晚期患者，且该群体为特殊人群，与Qin等[10]所研究的群体不同；还可能由于老年晚期NSCLC的肿瘤细胞对bcl-2蛋白的敏感性与其他人群有差异。NSCLC组织中bcl-2阳性表达率均在高分化、有淋巴结转移患者中较高。非小细胞肺癌的caspase-3阳性表达率为36.75％，与文献报道相近[11-12]。赵阳等[12]研究表明，caspase-3随着肺癌分化程度越高而表达越高。本研究结果示NSCLC组织中caspase-3阳性表达率在高分化、无淋巴结转移患者中较高，与文献报道结果一致[12]。提示caspase-3蛋白表达的缺失与肺癌淋巴结有无转移有着密切关系。有caspase-3蛋白表达缺失的肺癌患者易发生淋巴结转移，与肺癌的发展有关。在老年晚期NSCLC组织中，bcl-2与caspase-3表达呈显著正相关。

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（2013-09-03收稿2014-03-12修回）

（本文编辑魏杰）

Correlation Analysis between Expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 in Patients with Non-Small Cell Lung Cancer

ZHANG Lili1,ZHANG Jie2,ZHANG Lin1,YU Yang3,LIU Kun1
1 School of Nursing College,Liaoning Medical University,Liaoning 121000,China；2 The Third Affiliated Hospital of Liaoning Medical University；3 The First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University LIU Kun,E-mail：522177601@qq.com

ObjectiveTo investigate the expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 in elderly patients with advanced non-small cell lung cancer(NSCLC),and the clinical significance thereof.MethodsThe clinical data and paraffin tissue samples of 117 patients with NSCLC confirmed by postoperative pathology were collected.The expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 protein in tissues of NSCLC were detected by immunohistochemical method.The correlation between the expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 protein was analyzed,and the relationship between the expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 protein and clinicopathological characteristics was explored.ResultsThe positive expression rates of p53,bcl-2 and caspase-3 were 42.74％(50/117),38.46％(45/117)and 36.75％(43/117)in tissue samples of NSCLC.The positive expression rate of p53 was significantly higher in patients with poor differentiation,central type,lymph node metastasis and squamous carcinoma.The positive expression rate of bcl-2 was significantly higher in patients with high differentiation and lymph node metastasis.The positive expression rate of caspase-3 was significantly higher in patients with high differentiation and no lymph node metastasis.There was a positive correlation between expressions of bcl-2 and caspase-3 in NSCLC (r=0.262,P=0.003).ConclusionThe expressions of p53,bcl-2 and caspase-3 may play important roles in development and progression of advanced NSCLC in elderly patients,which may serve as predicators for prognosis.

tumor suppressor protein p53;proto-oncogene protein c-bcl-2;caspase 3;carcinoma,non-small-cell lung;aged;NSCLC

R734.2

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.07.013

辽宁省科学技术计划项目（2012225019）

1辽宁锦州，辽宁医学院护理学院（邮编121000）；2辽宁医学院附属第三医院;3辽宁医学院附属第一医院△

E-mail：522177601@qq.com