血府逐瘀汤对冠心病血瘀模型家兔血管活性物质的影响

唐汉庆，王金花，赵善民，黄俊杰，莫小强，王露瑶，廉春容

（右江民族医学院，广西百色533000）

冠心病（Coronary heart disease，CHD）严重危害 人类的健康，在我国CHD 患病率呈逐年上升趋势，对CHD 进行有效的防治是个重大课题。冠心病属于中医学“胸痹”、“心痛”或“真心痛”范畴，临床证型以痰浊、血瘀为主［1］，其中冠心病血瘀证的发病机理以往研究重点集中于脂质浸润、血栓形成及平滑肌增殖，但已有研究表明肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）分泌水平升高引起的氧化应激及其介导的氧化损伤反应在冠心病的发生发展、病理转归与预后中发挥关键作用［2］。本研究建立冠心病血瘀家兔模型，以血府逐瘀汤进行干预，观察血管活性物质AngⅡ、活性氧（ROS）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）变化，从氧化应激致内皮损伤角度讨论血府逐瘀汤治疗CHD 血瘀证的相关作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康家兔32只，雌雄各半，体重2.5 kg±0.5kg，普通级，本院科学实验中心提供，动物合格证号：SCXK（桂）2013-0002。

1.1.2 主要试剂和仪器 30g／L 戊巴比妥钠，批号20100021，为北京化学试剂公司产品；AngⅡ试剂盒，批号201323，为上海聚力研究所产品；NO 试剂盒（批号061110），ROS试剂盒（批号031205），均为南京建成生物工程研究所产品；ET 试剂盒，批号230612，为北京普尔伟业公司产品；电子天平，AE160型，为瑞士Mettler公司产品；小动物呼吸机BIPAPSYNCHRONY 型，为飞利浦公司产品；彩色多普勒超声诊断仪，Vivid 7 型，为美国GE 公司产品；酶标仪，AD340型，为美国Beckman Coulter公司产品；分光光度计，722型，为上海精密科学仪器有限公司产品；γ 放射免疫计数器，FJ-2021型，为广州飞迪公司产品；台式高速低温离心机，Z360K型，为德国HERMLE公司产品。

1.2 方法

1.2.1 动物分组和处理 适应性饲养7d后，随机分成对照组、模型组、假手术组、中药组4组，每组8只。模型组造模方法参照文献［3］加以改良，动物麻醉，辅助呼吸，左冠状动脉远端放置缩窄环，制备冠心病血瘀模型，假手术组开胸但不放置缩窄环。中药组在模型组基础上，术后第7天起，每天早上8时开始按20g生药／kg血府逐瘀汤灌胃（intragastric administration，ig）。每天1次，连续10d。对照组、模型组、假手术组则灌胃等体积生理盐水。家兔给药剂量的计算依据，参照文献［4］中药复方药动学研究中给药剂量标准进行折算，按汤剂折成动物平均等效剂量20g／kg。

1.2.2 血府逐瘀汤制备 血府逐瘀汤由桃仁70g，红花、当归、柴胡各60g，生地黄50g，枳壳40g，川芎、赤芍、桔梗、甘草各30g，牛膝20g组成，本院药理教研室提供并鉴定，先将药物清水漂洗2次，加双蒸水2 500mL浸泡30min后，煎煮30min，收集煎煮液，药渣再加水1 000mL煎煮20min，合并2次滤液，水浴加热浓缩至含生药2g／mL，灭菌，4℃保存备用。

1.2.3 检测方法 取静脉血2mL，于4℃以1 000 r／min离心5min，分离血清，置-70℃冻存。采用硝酸还原酶法测定血清NO，采用比色法测定血清ROS；取静脉血2mL，加入30μL 100g／L EDTANa2和40μL抑肽酶，在4℃以4 000r／min离心10min，分离血浆，置-70℃冻存。采用放免法测定血浆ET；取静脉血2mL，加入冰浴的酶抑制剂30μL和0.3 mmol EDTANa2，于4℃以1 000r／min离心5min，分离血浆，置-70℃冻存，采用放免法在冰浴中测定AngⅡ。均严格按说明书操作进行检测。

1.2.4 统计学处理 数据统计采用SPSS 13.0软件。计量资料用均数±标准差（±SD）表示。组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用q 检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

家兔（总例数32例）全部存活并被纳入统计学分析。与对照组比较，模型组血浆AngⅡ、ET 及血清ROS水平均升高，差异极显著或显著（P＜0.01或P＜0.05），而血清NO 水平显著降低，差异极显著（P＜0.01）。与模型组比较，中药组血浆AngⅡ、ET 及血清ROS水平均降低，差异极显著或显著（P＜0.01或P＜0.05），而血清NO 水平显著升高，差异极显著（P＜0.01）。与对照组比较，假手术组AngⅡ、ET 水平稍升高，但差异不显著（P＞0.05），ROS、NO 水平稍降低，但差异不显著（P＞0.05）；与对照组比较，中药组AngⅡ、ROS、NO、ET 水平有趋近趋势，差异不显著（P＞0.05）（表1）。

3 讨论

冠心病血瘀证的发病机理有脂质浸润、血栓形成及平滑肌增殖等学说，但氧化应激损伤在冠心病发生发展中的机制也不容忽视，其介导的内皮功能损伤在血瘀证的形成和发展中是关键，不仅是临床预防与治疗冠心病的重要节点，也是中医活血化瘀药物治疗作用靶向节点之一［5-7］。氧化应激反应伴随RASS的激活，AngⅡ分泌水平升高通过Ras-Raf-ERK 途径介导强缩血管物质ET 的产生，启动氧化损伤反应，AngⅡ水平升高是心血管疾病的危险因素［8］，诱导活性氧ROS等的产生［9］，大量的ROS使NO 失活，通过抑制心肌K＋的去极化作用于L型慢Ca2＋通路［10］，产生负性肌力作用，促进血瘀证的发展［11］。氧化应激反应以及氧化损伤所涉及的血管活性物质变化在冠心病的研究中受到重视，这些血管活性物质既可作为判断血瘀证进展的标志分子，也可作为中药干预的药物疗效及预后观察的参考指标［12］。

表1 各组AngⅡ、ROS、NO、ET 水平比较Table 1 Comparison of the levels of AngⅡ，ROS，NO and ET in each group

ET 是由血管内皮细胞所分泌的一种强力缩血管活性肽，是由21 个氨基酸组成的酸性多肽，具有促血管平滑肌细胞增殖、收缩血管和升高血压的作用。NO 是血管内皮细胞分泌的血管活性物质，具有强大的舒张血管、抑制血小板聚集与激活、抑制中性粒细胞与单核细胞对血管壁的浸润与吸附、抑制血管平滑肌细胞增殖和抗血栓形成的作用。ET 与NO 相互制约、相互拮抗、相互协调，在正常情况下保持平衡维持内皮正常功能［13-14］。AngⅡ、ET 与其相关基因高度表达成为判定冠心病血瘀证模型的重要指标［15］，ROS反映了血瘀证血管损伤程度［16］。在本试验工作中，观察到和对照组比较，模型组AngⅡ水平显著升高（P＜0.01），模型组ET 水平升高而NO 水平降低（P＜0.01或P＜0.05），提示高水平AngⅡ促进ET 分泌，ET／NO 平衡向ET 倾斜，启动氧化损伤，同时，在试验中观察到，和对照组比较，模型组ROS水平升高（P＜0.05），说明模型动物的血管已受到损害。

血府逐瘀汤为清代名医王清任所创，方中当归、生地、川芎、赤芍、桃仁、红花有活血养血功效，柴胡、枳壳、牛膝等有活血祛瘀功效［17］，在本试验中观察到，以血府逐瘀汤干预后，和模型组比较，中药组AngⅡ、ET 及ROS水平均降低（P＜0.01或P＜0.05），而血清NO 水平显著升高（P＜0.01），趋近于对照组水平（P＞0.05），说明血府逐瘀汤能恢复冠心病血瘀证血管活性物质分泌水平，推测其活血化瘀功效可能部分通过减少氧化应激反应、改善内皮功能而实现的，同时，也提示我们如果能在氧化应激开始时有针对性地对始动血管活性分子如AngⅡ等进行干预，有可能比较有效地预防冠心病血瘀证的发生和发展。

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