柴胡疏肝散对抑郁症模型大鼠HPA轴功能的影响❋

马书娟，姚建平,樊蔚虹,禹 方

(1.河南中医学院第一附属医院，郑州 450004；2.河南中医学院，郑州 450046)

下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴是一个重要的内分泌轴，是神经内分泌网络的枢纽，对维持机体内环境的平衡起着至关重要的作用。研究发现，HPA轴功能紊乱与抑郁症的发生有密不可分的关系。HPA轴的功能亢进是抑郁症患者的主要神经内分泌改变，这种HPA轴功能亢进随着抑郁症的加重或缓解也随之发生改变。本实验采用慢性应激法造成大鼠HPA轴功能紊乱模型即抑郁症模型，以柴胡疏肝散进行干预观察各组大鼠HPA轴功能的差异，探索柴胡疏肝散治疗抑郁症的作用机理。

1 材料

1.1 实验动物

SPF级雄性SD大鼠100只，体质量(200±20)g，由河南省实验动物中心提供(动物许可证号SCXK(豫)2010-0002)。

1.2 主要试剂与药品

大鼠(Rat)促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒，大鼠(Rat)皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒，中药(饮片)由河南东升药业有限公司提供。

1.3 主要实验仪器

酶标仪。

2 方法

2.1 动物分组、造模与给药

SPF级SD雄性大鼠，open-field法进行行为学评分，水平运动和垂直运动总得分低于30分或高于120分的动物予以剔除。选择60只动物按随机数字表法分为正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组3组，每组20只。采用慢性应激造模方法，应激刺激参考文献[1]改进，冰水游泳、热应激、束缚、夹尾、禁水、禁食及昼夜颠倒共7种刺激，每日随机安排1种刺激方式，整个刺激实验每种刺激给予3次共21 d。柴胡疏肝散组大鼠在应激开始时灌胃给药，每日1次，模型组蒸馏水ig共21 d。

2.2 药材及制剂

柴胡疏肝散方药参照中国中医药出版社《中医方剂学》第七版教材。按原方比例水提，生药浓度为1 g/ml。大鼠按生药量7.875 g/kg/d灌胃，相当于成人(60 kg)临床用量的15倍。从应激刺激开始灌胃至应激结束止共用药21 d。

2.3 取材

大鼠腹腔麻醉(25%乌拉坦，0.75 mg/kg)，腹主动脉取血8 ml,其中4 ml用于制备血浆，另4 ml用于制备血清，-70℃保存。

2.4 指标检测

2.4.1 ELISA法检测大鼠血清ACTH浓度 从室温平衡20 min 后的铝箔袋中取出所需板条；设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL；样本孔先加血清10 μL，再加血清稀释液40 μL，空白孔不加；除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅温育60 min；弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，重复洗板5 次；每孔加入底物A、B 各50 μL，37℃避光孵育15 min； 每孔加入终止液50 μL，15 min 内在450 nm 波长处测定各孔的OD 值。

2.4.2 ELISA法检测大鼠血浆CORT浓度 方法同上。

2.5 数据及结果分析

在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。所得数据以均数±标准差(±s)表示，SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 柴胡疏肝散对抑郁症大鼠血清ACTH浓度的影响

表1显示，与正常对照组比较，模型组大鼠血清ACTH浓度显著升高(P<0.05)；与模型组比较，柴胡疏肝散组大鼠血清ACTH浓度显著降低(P<0.05)。

表1 大鼠血清ACTH浓度比较(±s)

表1 大鼠血清ACTH浓度比较(±s)

组 别例数剂量(生药g5kg-1)血清ACTH浓度(pg/ml)正常对照组10—22.34±1.88*模型组10—44.30±2.58柴胡疏肝散组107.87522.66±2.05*

注：与模型组比较:＊P<0.05

3.2 柴胡疏肝散对抑郁症大鼠血浆CORT浓度的影响

表2显示，与正常对照组比较,模型组大鼠血浆CORT浓度显著升高(P<0.05)；与模型组比较，柴胡疏肝散组大鼠血浆CORT浓度显著降低(P<0.05)。

表2 大鼠血浆CORT浓度比较(±s)

表2 大鼠血浆CORT浓度比较(±s)

组 别例数剂量(生药g5kg-1)CORT浓度(ng/ml)正常对照组10— 8.66±0.60*模型组10— 11.95±0.88柴胡疏肝散组107.87510.20±0.54*

注：与模型组比较:＊P<0.05。

4 讨论

HPA轴是神经内分泌的重要组成部分，下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)作用于腺垂体，调控腺垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)的分泌，ACTH又可作用于肾上腺皮质，影响HPA轴终末激素(灵长类为皮质醇，啮齿类为皮质酮)的分泌。研究发现，抑郁症患者的血浆皮质醇浓度增加，失去了正常人夜间自发性分泌抑制的规律，整日处于肾上腺皮质功能亢进状态。Rubin[2]等研究发现，与健康对照组比较，抑郁症患者的肾上腺皮质增生约38%，增生程度与皮质醇浓度有关，且随着抑郁的恢复，这种增生似乎随皮质醇浓度恢复而逐渐消失。唐萍等[3]对23例抑郁症患者治疗前后皮质醇和促皮质醇激素变化研究中发现，抑郁症患者血浆ACTH水平显著升高，血浆皮质醇水平也有显著升高。徐虹等[4]研究亦证实，抑郁症患者HPA轴功能亢进是状态依赖。动物实验也发现，慢性应激可使大鼠血浆CORT浓度增高[5]。

抑郁症是西医病名，类似中医“郁证”、“癫证”、“脏躁”及“百合病”等疾病。虽然很多医家认为抑郁症就是中医的“郁证”，是由情志不舒、气机郁滞所致，以心情抑郁、情绪不宁、胸部满闷、胸胁胀满，易哭易怒、咽中如物阻等症状为主要临床表现的一类病症，但抑郁症不单纯属于中医“郁证”范畴,在“百合病”等其他古代文献中亦有记载。所以抑郁症的表现形式可在多种中医病名的症状中出现,与郁证二者不是简单的等同关系。抑郁症病因繁多、病机复杂，但从肝论郁为大多数医家所认同，认为其基本病机为肝气郁结并贯穿疾病始终，因此疏肝解郁是中医治疗抑郁症的基本法则。

本实验结果显示，模型组大鼠血清ACTH和血浆CORT的浓度均显著高于正常对照组，而柴胡疏肝散组大鼠血清ACTH和血浆CORT的浓度显著低于模型组，表明抑郁症模型大鼠HPA轴功能亢进，其分泌ACTH和COR增多，柴胡疏肝散可通过调节亢进的HPA轴功能，减少大鼠ACTH和CORT的分泌，从而发挥对抑郁症的治疗作用。

参考文献：

[1] Katz R J,Roth K A.Acute and chronic stress effects on open-field activity in the rat:Implications for a model of depression[J].Neurosci Biobehav Rev,1981,5(2):247.

[2] Rubin RT, Phillips JJ , McCracken JT, et al. Adrenal gland volume in major depression relationship to basal and stimulated pituitary-adrenal cortical axis function[J].Biological Psychiatry，1996,40(2): 891.

[3] 唐萍，唐胜修，陈琼英.抑郁症患者治疗前后皮质醇和促皮质醇激素的变化[J].广西医学，2004,26(7)：1012.

[4] 徐虹，孙忠人，李丽萍，等.针灸治疗抑郁症及其对患者下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响[J].中国针灸，2004,24(2)：78-80.

[5] Hsien-Yu Peng,Ming-Chun Hsieh,Cheng-Yuan Lai, et al.Glucocorticoid mediates water avoidance stress-sensitized colon-bladder cross-talk via RSK2/PSD-95/NR2B in rats[J].Am J Physiol Endocrinol Metab, 2012,303: E1094 - E1106.