探讨Bcl-2和p16蛋白在胃癌组织中的表达与意义

胡果宇

【摘要】目的：观察癌基因Bc1-2和抑癌基因p16相关产物蛋白在胃癌组织中的表达，探讨Bc1-2和p16基因与胃癌发生的关系。方法：用免疫组化法检测Bc1-2和p16蛋白在不同类型胃癌组织中的表达，并以胃黏膜异型增生和肠上皮化生作对照。结果：Bc1-2蛋白在胃癌和异型增生组织中的阳性率无显著性差异（P＞0.05），但是显著高于肠上皮化生（p＜0.01）；p16蛋白在胃癌、异型增生和肠上皮化生组织中的表达有非常显著的差异（p＜0.01）。结论：在胃癌组织中Bc1-2表达显著增高，而p16表达显著减低，提示两种蛋白表达变化可能与胃癌相关，Bc1-2可能是胃癌发生的早期指标，p16基因的缺失可能与细胞异型性有密切关系。

【关键词】胃癌；免疫组化；Bc1-2；p16

【中图分类号】R735.2 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2014)06-0112-01

引言

胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，其发生是一个复杂的过程。从正常胃黏膜到癌前病变再到胃癌，是一个渐进的过程，致病因素作用于不同的基因并引起相关基因结构和表达水平的改变，最终导致胃癌的发生。癌基因和抑癌基因在恶性肿瘤中表达的研究已有较多报道，但同时观察不同癌基因和抑癌基因在胃癌发生中不同阶段的活性变化还鲜有报道。本研究用免疫组化方法检测了癌基因Bc1-2和抑癌基因p16表达产物在不同类型胃癌中的表达情况，并以胃黏膜异型增生和肠上皮化生为对照，旨在探讨胃癌发生过程中不同基因的改变及意义，并进一步探明胃黏膜癌前病变与胃癌发生的相互关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集我院病理科2012年2月至2014年3月间存档的病理蜡块123例，其中胃癌79例、异型增生23例、肠上皮化生21例。在胃癌组中，高分化腺癌（包括管状腺癌和乳头状腺癌）25例，低分化腺癌18例，黏液腺癌19例，黏液细胞癌17例。所有组织均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色观察分类后进行免疫组化检测。

1.2 免疫组化检测

免疫组化染色采用Ｅnvision法。鼠抗人一抗Bc1-2和p16单克隆抗体以及HRP兔抗鼠二抗均购自北京中杉生物技术公司，用PBS取代一抗作阴性对照。阳性结果判断标准：Bc1-2以细胞质及p16以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性表达；高倍镜下取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数≤25为％（－），＞25%-50%为（＋），＞ 50%－75%为（＋＋），＞75%以上为（＋＋＋）。

1.3 统计学方法

用SPSS11.5统计软件进行分析，X2检验分析各组间阳性率的差异，Kruskal-wallis H检验分析各组不同阳性强度的差异，Nemenyi对其进行两两比较，p＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Bc1-2蛋白在各组织中的表达在胃癌、异型增生和肠上皮化生组织，Bc1-2的阳性率分别为73.4%、78.3%、38.1%。统计学分析，Bc1-2在胃癌和异型增生组织中的阳性率无显著性差异，但显著高于肠上皮化生（P＜0.01），在不同类型胃癌中阳性率无显著性差异（P＞0.05），见表１。

表1Bcl-2在胃癌、异性增生和肠上皮化生中的表达

Tissues n Bcl-2 Positive (+) (++) (+++) rate(%)Well-differentiated adenocarcinoma 25 5 9 5 76.0Poorly differentiated saenocarcinoma 18 3 6 4 72.2Mucinous adenocarcinoma 19 410 1 78.9Carcinoma muco-cellulare 17 4 5 2 64.7Dysplasia 23 8 6 4 78.3

Intetinal metaplasia 21 6 2 0 38.12.2p16蛋白在各组织中的表达p16蛋白在胃癌、异型增生和肠上皮化生组织中的阳性率分别为45.6%、65.2%、76.2%。经统计学分析，p16在胃癌、异型增生和肠上皮化生组织中的表达有非常显著的差异（P＜0.01）；而在不同类型胃癌中其阳性率无差异（P≥0.05），见表２。

表2p16在胃癌、异性增生和肠上皮化生中的表达

Tissues n Bcl-2 Positive (+) (++) (+++) rate(%)Well-differentiated adenocarcinoma 25 6 5 2 52.0Poorly differentiated saenocarcinoma 18 5 3 0 44.4Mucinous adenocarcinoma 19 7 2 0 47.4Carcinoma muco-cellulare 17 4 2 0 35.3Dysplasia 23 4 6 5 65.2Intetinal metaplasia 21 3 7 6 76.22.3 Bcl-2和p16蛋白在胃癌組织中表达的相关性统计学分析表明，Bcl-2和p16蛋白在各型胃癌组织中的表达无显著性差异P＞0.05），见表3。

表3 Bc1-2和p16蛋白在胃癌组织中表达的相关性

Tissues n Bcl-2positive P16positiveWell-differentiated adenocarcinoma 25 19 13Poorly differentiated saenocarcinoma 18 13 8Mucinous adenocarcinoma 19 15 9Carcinoma muco-cellulare 17 11 63 讨论

本研究用免疫组织化学方法检测癌基因Bc1-2和抑癌基因p16表达产物在胃癌、胃黏膜异型增生和肠上皮化生中的变化，进一步探讨胃黏膜癌前病变与胃癌的内在联系，为胃癌的预防和早期诊断及癌前病变发展趋势的预测提供有价值的实验资料。Bc1-2基因是第一个被发现的细胞凋亡抑制基因，它编码的蛋白质产物定位于线粒体内膜、内质网膜及核膜上。其主要的生物学功能是长细胞的寿命，增加细胞对各种凋亡刺激因素的抵抗力。Bc1-2基因的生物学功能是增加细胞对各种凋亡刺激因素的抵抗力，它可使DNA受损的细胞继续生存，突变产物聚集，促进肿瘤的发生与发展。有研究发现，过度表达Bc1-2的转基因小鼠容易发生肿瘤［8］。本文研究结果表明，胃癌组织中Bc1-2蛋白的阳性表达率为73.4%，阳性区域与细胞凋亡区域明显不同。在不同类型的胃癌中，以高中分化腺癌中Bc1-2阳性表达率最高。本研究结果还显示，Bc1-2在异型增生中阳性率最高，表明异型增生的组织其细胞增生与凋亡处于明显的不平衡状态，Bc1-2对细胞凋亡有明显的负性调节作用。本结果还发现，胃癌中Bc1-2蛋白的阳性率低于异型增生，提示Bc1-2在异型增生组织中的过度表达可能是胃癌形成的先兆事件，是胃癌发生过程中的早期行为。随肿瘤进一步发展，到后期阶段或向恶性度高的肿瘤转化过程中部分细胞可能丧失Bc1-2的表达。p16基因直接参与细胞生长增殖的负调节，p16基因的失活则可导致正常p16蛋白的表达异常。研究表明，p16蛋白可竞争cyclinD与CDK4的结合，通过抑制CDK4的活性，阻止细胞G1向S期转化，使细胞周期停止在G1 期，避免细胞的过度增殖。当p16基因突变或缺失时，p16蛋白就不能正常表达，细胞增殖失去控制，最终形成肿瘤。目前已经发现多数肿瘤存在p16蛋白表达的下降或缺失，但在胃癌特别是癌前病变中表达的研究尚不多见，p16表达异常与胃癌发生的关系还不明确。本研究结果显示p16蛋白在胃癌、异型增生和肠上皮化生组织中的阳性表达率呈递增趋势，且在胃癌与癌前病变中有显著性差异，提示p16基因的缺失与细胞异型性有密切关系，检测其表达产物p16蛋白的表达对于判断胃黏膜癌前病变的发展趋势和预测胃癌的早期发生有重要意义。总之，本研究结果提示，Bc1-2和p16两种蛋白表达的变化可能与胃癌的发生、发展相关，Bc1-2表达的变化可能是胃癌发生的早期指标，p16基因的缺失可能与细胞异型性有密切关系。至于Bc1-2与p16两种基因在胃癌发生发展过程中相互作用的分子机制还有待于进一步研究探讨。

参考文献

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［2］ Zoos L,Chen,Xu Y.Correlation between p53 studies［J］.Eur J Surg-Oneol,2012,38(3):189-196.

［3］ Lei Jiao,Wang Zhen,Zhang Hua. modulation of Bcl-2,Bax and caspase-3［J］.Mol Med Rep,2013,8(6)：1649-1654.

［4］ 张晖，王宝贵，梁寒．Ａｇａｔ基因差异性表达及其甲基化在胃癌发生和治疗中的意义［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２００７，１４（１５）：