赵卫华 罗立勇 解士海 黄小雄
【摘要】目的 研究尖锐湿疣复发与其皮损中Livin表达的关系,探讨CA的复发机制。方法 根据CA患者治疗后的转归,将CA患者分为复发组和未复发组。采用免疫组化SP法检测Livin蛋白在22例复发组CA患者的复发疣体组织中的表达,并与24例未复发组CA患者和复发组CA患者的初发皮损组织中Livin蛋白的表达进行比较。结果 复发组CA患者的复发疣体组织中Livin蛋白阳性表达率为95.45%(21,22),未复发组CA患者和复发组CA患者的初发皮损组织中Livin蛋白阳性表达率分别为70.83%(17,24) 、72.73%(16,22),前者与后两组的阳性表达率差异分别具有统计学意义(P<0.05);复发组CA患者的复发疣体组织中Livin蛋白阳性表达强度多为(++)~(+++),未复发组CA患者和复发组CA患者的初发皮损组织中Livin蛋白阳性表达强度分别多为(+)~(++),前者与后两组的阳性表达强度差异分别具有统计学意义(P<0.05),未复发组CA患者和复发组CA患者的初发皮损组织中Livin蛋白阳性表达率分别为70.83%(17,24)、72.73%(16,22),阳性表达强度分别均多为(+)~(++),差异均无统计学意义(P<0.05)。结论CA复发患者皮损组织中存在Livin过表达,提示CA的复发可能与其皮损组织中存在Livin过表达有一定关系。
【关键词】尖锐湿疣; Livin; 复发; 免疫组化
【Abstract】 Objective To explore The relationship between the recurrence of condyloma acuminatum and the expression of Livin protein in CA local lesions and study the mechanism of the recurrence of condyloma acuminatum.Methods The expression oflivin protein in the recurrent lesions of 22 recurrent CA patients wasanalyzed by immunocytochemical stainwithstreptavidin and compared to that in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups. Results The detection rates of Livin in recurrent lesions of 22 recurrent CA patients was 95.45%(21,22) , The detection rates of Livin in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups were respectively 70.83%(17,24) 、72.73%(16,22), which were statistically different respectively; The expressions of Livin were strongly positive (+++) in the recurrent lesions of 22 recurrent CA patients .The expressions of Livin varied from positive (++) to strongly positive (+++) in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups. which were statistically different respectively(P<0.05);The detection rates of Livin in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups wererespectively 70.83%(17,24) ,72.73%(16,22),The expressions of Livin varied from positive (++) to strongly positive (+++) in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups,which were not statistically different respectively (P<0.05).Conclusion Recurrent CA patients showed overexpression of Livin in local lesions , overexpression of Livin in local lesions might play an role in the recurrence of condyloma acuminatum
【key words 】condyloma acuminatum; Livin;recurrence ;immunohistochemistry
【中圖分类号】R752.5 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2014)06-0107-01
1 对象与方法
1.1 对象 收集我院皮肤性病科门诊46例CA患者的外阴皮损组织标本,其中男18例,女28例;年龄18-67岁,平均36.8岁;病程15-90天,平均26.9天;均经组织病理学确诊。取材前半年内均未接受免疫性药物、激光、冷冻等治疗,且无其他系统疾病。CO2激光术后每周复诊一次,四周后每月复诊一次,共随访六个月,治愈标准为皮疹消退,恢复正常外形,无新发皮疹,随访六个月无复发。复发判断标准为CO2激光术去除疣体后六个月内,无再感染病史,在治疗部位或其它部位出现新的皮疹,判断为CA复发。根据目前对CA的诊断标准和复发判断选择本研究的对象,分为CA复发组(22例)和CA非复发组(24例)。非复发组男性10例,女性14例;年龄18-57岁,平均35.8岁;复发组男性8例,女14例;年龄18-56岁,平均34.6岁;末次复发的病程为4周至5个月,平均2.6个月。个组间年龄,性别和病程经t检验均P>0.05, 差异无统计学意义。所有标本经4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续作4um厚度切片后覆于用多聚赖氨酸处理过的玻片上,60℃烤箱烤片4h以上,备用。
1.2 方法 免疫组化SP法检测Livin蛋白的表达。兔抗Livin多克隆抗体(浓缩型),通用型SP检测试剂盒均购于北京博奥森生物有限公司,DAB酶底物显色剂购自北京中杉生物有限公司。操作步骤均按试剂盒说明进行,抗体工作液Livin为1:80。所有切片染色均采用相同条件,每批染色均设阳性对照、阴性对照。阳性对照用已知染色阳性的组织切片,阴性对照以PBS代替一抗孵育组织切片。
1.3 結果判定 Livin阳性显色为棕黄色颗粒,主要为胞质着色,少量胞核着色,评分标准参照文献[1],根据组织切片中阳性细胞百分比和着色强度进行半定量分级评分。阳性细胞百分比≤10%为0分,11%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,≥76%为4分。着色强度:0分为不着色;1分为浅黄色;2分为黄色;3分为棕黄色。取上述两项分值的乘积作为总积分:0分为阴性(-),1~4分为弱阳性(+),6~8分为阳性(++),9~12分为强阳性(+++)。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包对所得数据进行处理,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1复发组复发皮损和复发组初发皮损组织中Livin蛋白表达 阳性反应大多定位于胞膜和胞膜附近的胞浆,多呈黄色,棕黄色至棕褐色着色。阳性细胞多呈鱼网状分布于棘层的中、上部和颗粒层。复发组复发皮损和复发组初发皮损的阳性表达率分别为95.45%(21,22)、72.73%(16,22) ,两组阳性表达率差异有统计学意义(χ2=4.247,P<0.05),且两组表达强度差异有统计学意义(χ2=24.555,P<0.05)。见表1,图1
图1复发组复发皮损组织中Livin的表达,SP法 200 X
表1 Livin在CA复发组和未复发组组织中的表达 (例数)
组别 例数 表达强度 X2 P值- + ++ +++ 复发组 复发皮损
初发皮损 22
22 1 2 4 15
6 13 2 1 24.555
1.4450
0.695未复发组 24 7 11 5 1 *复发组皮损与未复发组的X2值为 23.048
2.2复发组复发皮损和未复发组初发皮损组织中Livin蛋白表达阳性反应定位于胞浆,阳性着色多呈黄色,棕黄色,少数呈棕褐色,阳性细胞多呈灶状或片状分布于棘层中上部和颗粒层,复发组复发皮损和未复发组初发皮损组织中Livin蛋白表达阳性表达率分别为95.45%(21,22)、70.83%(17,24) ,两组阳性表达率差异有统计学意义(χ2=4.843,P<0.05),且两组表达强度差异有统计学意义(χ2=23.048,P<0.05)。见表1,图2
图2未复发组皮损组织中Livin的表达,SP法 200 X
2.3复发组初发皮损和未复发组皮损组织中Livin蛋白表达阳性反应定位于胞浆,阳性着色多呈黄色,棕黄色,少数呈棕褐色,阳性细胞多呈灶状或片状分布于棘层中上部和颗粒层,复发组初发皮损和未复发组初发皮损组织中Livin蛋白表达阳性表达率分别为72.73%(16,22) 、70.83%(17,24),两组阳性表达率差异无统计学意义(χ2=0.200,P>0.05),且两组表达强度差异无统计学意义(χ2=1.445,P>0.05)。见表1。
3讨论
尖锐湿疣(CA)是临床上常见的性传播疾病(STD),病原体是人乳头瘤病毒(HPV),属DNA病毒,传染性很强,发病率较高,易复发,是性传播疾病中最容易传播的一种。Livin是近年新发现的凋亡抑制基因。特异性表达于人的胚胎组织以及多数人类实体瘤组织,这种异常的表达与肿瘤的发生、发展、转移甚至预后相关[2,3]。为探讨Livin与CA发生、发展和复发的关系,我们用免疫组化SP法对CA组织Livin的表达进行了研究。
Livin是近年来发现的一种新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,
IAP)家族成员[4],该蛋白是从人类基因组cDNA文库中克隆得到,因其从人的胎肾cDNA文库中发现,又被命名为KIAP(kidney inhibitor of apoptosis protein)[5],特异的高表达于某些实体肿瘤组织和肿瘤细胞系,能抑制许多凋亡刺激剂诱发的细胞凋亡,提示该基因可能在肿瘤的发生和发展中起着重要作用[6] 。近期研究表明,Livin在一些肿瘤组织中异常表达,与肿瘤的预后和复发有关。我们应用免疫组化检测CA组织中凋亡抑制蛋白Livin的表达,结果发现Livin蛋白在CA组织中高表达,Livin在CA组织中的表达增高,其可能直接通过抑制Caspase的细胞凋亡途径,抑制细胞凋亡,导致细胞数目不断增加,从而使疣体过度增生,参与CA的发生、发展。同时还发现,复发组复发皮损Livin蛋白阳性表达率及阳性表达强度均高于未复发组和复发组初发皮损,提示Livin在CA的复发机制中可能起着一定作用,这具有一定价值,有可能成为CA治疗的一个崭新的潜在的靶点,为降低CA的复发率提供一条新的途径。
总之,Livin在CA组织中的表达尤其在复发组织中的高表达,提示该基因可能在CA的发生,发展和复发中起到重要作用。
参考文献
[1] Buerkle MA,Pahernik SA,Sutter A,et al,Inhibition of the alpha-nu integrins with a cyclic RGD peptide impairs angiogenesis,growth and metastasis of solid tumours in vivo.Br J Cancer,2002,86(5);788-795.
[2] Nachmias B,Ashhab Y,Ben-Yehuda D.The inhibitor of apoptosis protein family (IAPs): an emerging therapeutic target in Cancer-Semin Cancer Biol,2004.14(4):231-243.
[3] Wagener N,Crnkovie-Merten I,Vetter C,et a1.Expression of inhibitor of apoptosis protein Livin in renal cell carcinoma and non-tumorous adult kidney.Br J Cancer, 2007,97(9):1271-1276.
[4]Kasof GM, Gomes BC.Livin, a novel inhibitor ofapoptosisprotein family member. [J].J Biol Chem, 2001, 276(5):3238-3246.