鸡血藤总黄酮对大鼠佐剂性关节炎作用的实验研究

刘仰斌，张志花

（赣南医学院，江西 赣州 341000）

·基础研究·

鸡血藤总黄酮对大鼠佐剂性关节炎作用的实验研究

刘仰斌，张志花

（赣南医学院，江西 赣州 341000）

目的 探讨鸡血藤总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用，并探讨其作用机制。方法 采用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎动物模型；观察不同浓度鸡血藤总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的慢性足肿胀度、血清中一氧化氮（NO）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响。结果 与佐剂性关节炎模型组相比，高、低剂量的鸡血藤总黄酮均能抑制大鼠慢性足肿胀，降低关节炎大鼠血清NO水平，并使GSH-Px含量增加。结论 鸡血藤总黄酮对大鼠佐剂性关节炎有治疗作用，其作用可能与其恢复抗氧化物酶活性、清除自由基的作用有关。

鸡血藤；总黄酮；佐剂性关节炎；抗氧化作用

鸡血藤是一种传统的活血化瘀药材，全国各地均有分布，但主要产地为广东、广西、江西、福建等南方地区，具有补血活血、调经止痛、舒经通络的作用[1]。药理研究证实，鸡血藤具有较强的抗氧自由基、抗心律失常、降血压、改善血液系统、抑菌、增强人体免疫力、抗病毒活性、抗肿瘤、抗心肌缺血等作用[2-4]。研究表明其含有多种成分，如黄酮、有机酸、蒽醌、三菇、甾体等[5]，其中黄酮类成分是鸡血藤中的主要活性成分。为进一步研究鸡血藤黄酮的药理作用，应用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎模型，并以雷公藤多苷作为阳性药物对照，观察鸡血藤总黄酮对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）的治疗作用及其作用机制，以期为鸡血藤总黄酮在临床上应用提供理论和实验依据。

1 材料

1.1 药品与试剂

鸡血藤总黄酮试剂按照刘仰斌等[4]建立的方法先配制好，浓缩成2.5 g/mL的溶液，并储存于冰箱中备用；雷公藤多苷片（Tripterygium, TPT，批号为Z32021007，江苏美通制药有限公司）；二药物在临用前用双蒸水配制成实验所需浓度。一氧化氮（nitric oxide, NO）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）检测试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）；弗氏完全佐剂（Freund's complete adjuvant, FCA，Sigma公司）；10%水合氯醛（广东广州苏喏化工有限公司）。

1.2 主要仪器设备

ZH-ZZY型足趾容积测量仪（安微正华生物仪器设备有限公司）；SP-Max 2300A型全波长酶标仪（上海闪谱生物科技有限公司）；FA2004电子分析天平（上海光学仪器厂）；TGL-16M型台式冷冻离心机（上海乔跃电子有限公司）；HH-ZS型恒温水浴箱（上海恬恒仪器有限公司）；不锈钢动物解剖台（上海标普公司）；手术刀、剪、镊，量杯，烧杯等。

1.3 动物分组与处理

SPF级SD大鼠50只，自由饮食，均为雄性，体质量（180±20）g，由学院实验动物中心提供，许可证号：SYXK（赣）2007-0002。根据实验动物使用的3R原则，所有SD大鼠在实验前均给予人道的关怀。实验时50只SD大鼠随机分为5组：正常对照组、佐剂性关节炎模型组、鸡血藤总黄酮低剂量组（5 g/kg）、鸡血藤总黄酮高剂量组（10 g/kg）及阳性药物对照组（TPT，10 mg/kg），每组10只。实验前适应性饲养1周。

2 方法

2.1 SD大鼠关节炎模型的建立

按文献[6]方法，各组大鼠右后足常规消毒后，除正常对照组外，其余各组于足底皮下注射0.1 mL FCA致炎，正常对照组注射0.1 mL生理盐水，所有各组在第7、20天加强1针，复制佐剂性关节炎模型。于致炎前3 d至致炎后28 d，致炎共28 d。各组分别连续灌胃给予高、低剂量的鸡血藤总黄酮、阳性药物及等体积的生理盐水，每日1次，给药容积为10 mL/(kg·d)。

2.2 足肿胀度测定

根据排水法原理采用足趾容积测量仪，于致炎前测定每只大鼠右后肢足跖容积（mL），分别于致炎前和致炎后8、12、16、20、24、28 d测定大鼠致炎侧足容积，以致炎前、后致炎足容积差作为肿胀度：小鼠足肿胀度(ΔmL)＝致炎后容积－致炎前容积。

2.3 血清NO含量和GSH-Px活性测定

于致炎后28 d，10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，静置，3 000×g，4 ℃离心10 min，分离血清于-80 ℃保存，采用NO试剂盒和GSH-Px试剂盒，严格按照试剂盒说明书要求进行操作，检测血清中NO含量和GSH-Px活性。

2.4 统计学处理

采用SPSS19.0 软件对数据进行分析，实验结果均以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 鸡血藤总黄酮对AA大鼠足肿胀度的影响

与正常对照组相比，佐剂性关节炎模型组致炎右足各时间点明显肿胀（P＜0.01）；与佐剂性关节炎模型组相比，阳性药物对照组，鸡血藤总黄酮高、低剂量组治疗后各时间点足肿胀度降低（P＜0.05或P＜0.01）；鸡血藤总黄酮高、低组治疗效果与阳性药物对照组接近，以低剂量组效果更好。见表1。

表1 各组AA大鼠足肿胀度比较（x±s）

3.2 鸡血藤总黄酮对AA大鼠血清NO含量及GSH-Px活性的影响

与正常对照组相比，佐剂性关节炎模型组大鼠血清NO含量升高（P＜0.01），GSH-Px活性降低（P＜0.01）；与佐剂性关节炎模型组相比，阳性药物对照组，鸡血藤总黄酮高、低剂量组治疗后，NO含量降低（P＜0.05或P＜0.01），GSH-Px活性升高（P＜0.05或P＜0.01）；鸡血藤总黄酮治疗组与阳性药物对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 各组AA大鼠血清NO含量及GSH-Px活性测定比较（x±s）

4 讨论

类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是以损害滑膜、软骨和骨的一种慢性、炎性、系统性的自身免疫性疾病，但其发病机制仍不明确。类风湿因子的存在和其导致的其他结果被认为是类风湿性关节炎的基本特征，而类风湿因子的产生可能就是与氧自由基的增加有关[7]。研究发现，与健康人群相比，RA患者血浆中脂质、蛋白和DNA过氧化反应产物增多，还原型谷胱甘肽、GSH-Px、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和过氧化氢酶（catalase, CAT）等抗氧化系统活性降低[8]。氧自由基水平升高，可导致关节损伤，其直接和间接毒性作用可引起关节及关节外组织的严重损伤[9]。因此，氧自由基在RA病理生理中起到了非常重要的作用，患者的脂质过氧化程度可作为评定疾病活动指数[8]。

NO是一种具自由基特性的小分子气体物质，高水平NO导致细胞毒性作用，介导免疫损伤[10]，在RA患者血清中NO水平较正常人高[11]。NO可促进巨噬细胞合成释放IL-1β，TNF-α等炎性细胞因子，导致滑膜和炎性细胞产生和释放前列腺素增多。以上证据显示，NO参与了RA的发病机制。GSH-Px是体内存在的一种清除自由基和抑制自由基反应的重要系统，对于防止体内自由基引起的膜脂质过氧化发挥重要作用。有研究表明，RA患者血浆GSH-Px水平降低[12]。本研究发现，鸡血藤总黄酮可明显降低AA大鼠慢性足肿胀度，提示鸡血藤总黄酮对AA大鼠具有很好的治疗作用。另外，鸡血藤总黄酮治疗后，AA大鼠血清NO降低，GSH-Px活性升高，说明鸡血藤总黄酮可通过提高抗氧化物酶活性，促进自由基的清除，抑制氧化应激，从而对FCA诱导的关节炎起治疗作用。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（1部）[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 180.

[2] 程悦, 符影, 王志宇, 等. 鸡血藤提取物中缩合鞣质的含量测定及其抗肿瘤活性初步研究[J]. 中山大学学报: 自然科学版, 2011, 50(2): 75-80.

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[4] 刘仰斌, 张志花. 鸡血藤提取物对离体缺血再灌注损伤心肌生化指标的影响[J]. 湘南学院学报: 医学版, 2013, 15(4): 6-8.

[5] 舒顺利, 应军, 刘军民, 等. 鸡血藤化学成分研究[J]. 中药新药与临床药理, 2012, 23(2): 184-186.

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（责任编辑：高艳华）

Experimental study of net cliffbean total flavonoids on adjuvant arthritis in rats

LIU Yangbin, ZHANG Zhihua
(Gannan Medical University, Ganzhou 341000, China)

Objective To study the effects of net cliffbean total flavonoids on adjuvant arthritis and its mechanism in rats. Methods Rats model with rheumatoid arthritis were injected freund complete adjuvant, to observe the effects of the high and low dosage of net cliffbean total flavonoids to the chronic paw swelling, nitric oxide(NO) content and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity in serum. Results Both net cliffbean total flavonoids groups could reduce the swelling of the model rats, change the level of serum NO, which were lower than that of the model group, whereas the net cliffbean total flavonoids groups could increase the activity of serum GSH-Px. Conclusion Net cliffbean total flavonoids had therapeutic action to rheumatoid arthritis rats, and the mechanism probably was that net cliffbean total flavonoids could strengthen the activity of antioxidase, and scavenge oxygen-free radicals.

net cliffbean; total flavonoids; adjuvant arthritis; antioxidation

R25

A

1674-490X(2014)05-0001-04

2014-09-28

刘仰斌（1970—），男，江西赣州人，副教授，硕士，主要从事免疫细胞与神经疼痛机制研究。E-mail: 15979776628@163.com