单麻叶千里光多糖的提取及含量测定*

秦汝兰，王丹萍

（1.通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化 134002;2.通化师范学院长白山药用植物研究实验室，吉林通化 134002;3.吉林省通化市园艺研究所，吉林通化 134002）

单麻叶千里光多糖的提取及含量测定*

秦汝兰1，2，王丹萍3

（1.通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化 134002;2.通化师范学院长白山药用植物研究实验室，吉林通化 134002;3.吉林省通化市园艺研究所，吉林通化 134002）

利用超声波辅助技术从单麻叶千里光中提取多糖，苯酚－硫酸法显色测定多糖含量.结果表明，单麻叶千里光中多糖平均含量为5.29%，葡萄糖标准品在10～70μg·mL－1的浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为A=0.0079C+

0.0046（r=0.9993），加样回收率为99.80%（n=6，RSD=0.137%）.采用超声波辅助提取单麻叶千里光中的多糖，提取方法方便可行，得到的多糖含量较高，值得进一步开发研究

单麻叶千里光;多糖;苯酚－硫酸法;含量测定

R284.2

A

1008－7974（2014）03－0013－02

单麻叶千里光（Senecio cannabifolius var integrilifolius（Koidz.）Kitam），为菊科千里光属多年生草本植物，别名单叶返魂草，其主要分布于我国东北的长白山地区，具有散瘀、止血、理气化痰、清热解毒等功效，民间广泛用于治疗感冒、炎症等症状.本研究对单麻叶千里光中多糖提取和含量测定方法进行了研究，为单麻叶千里光资源的充分开发利用提供依据.

1 材料与方法

1.1 试验材料、仪器与试剂

单麻叶千里光采自于修正药业返魂草种植基地，经通化师范学院制药与食品科学学院于俊林教授鉴定为单麻叶千里光正品;UV－2600A型紫外－可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限责任公司）;KQ－5200E超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）;电子天平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司）;石油醚、无水乙醇等试剂均为分析纯.

1.2 试验方法

（1）单麻叶千里光多糖的提取与精制.取单麻叶千里光粉末10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入石油醚200mL，回流提取60min，3次，弃去滤液，药渣挥去溶剂，加水200mL，38℃条件下超声提取30min，共3次，合并滤液，将滤液浓缩至50mL，加入氯仿:正丁醇（4:1）的混合溶液，2000rpm离心5min，取上清液，加无水乙醇，静置过夜，滤过.沉淀再加水溶解，加无水乙醇至醇含量为80%，静置过夜，取沉淀分别用无水乙醇、丙酮依次洗涤3次，每次20mL，低温烘干至恒重，所得物质即为单麻叶千里光精制多糖.

（2）葡萄糖标准溶液的配制.取葡萄糖标准品25mg，精密称定，于105℃干燥至恒重，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，摇匀，定容，即为0.1mg·mL－1的葡萄糖标准品溶液，备用.

（3）单麻叶千里光多糖溶液的配制.精密称取105℃干燥至恒重的单麻叶千里光多糖2.5mg，置于25mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，摇匀，定容，即为0.1mg·mL－1的单麻叶千里光多糖溶液.

（4）样品溶液的配制.精密称取单麻叶千里光粉末200mg，3份，分别置于圆底烧瓶中，加入石油醚溶液，回流提取3次，每次60min，弃去滤液，药渣挥去溶剂，加水20mL，38℃超声提取30min，提取3次，合并提取液，置于250mL容量瓶中，定容，即得供试品溶液.

2 结果与分析

2.1 测定波长的选择

精密吸取葡萄糖标准品溶液和单麻叶千里光多糖溶液各 1.0mL置于试管中，加 5%苯酚溶液1.5mL，摇匀，然后加入浓硫酸 6.0mL，摇匀，静置5min后于40℃水浴中加热30min，以蒸馏水为空白对照，在400～600nm波长下进行扫描，结果显示标准品溶液和样品溶液均在490nm处有最大吸收，因此检测波长确定为490nm.

2.2 标准曲线的绘制

精密吸取葡萄糖标准溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL 分别置于干燥试管中，加入蒸馏水至1.0mL，再分别加入5%苯酚溶液1.5mL，摇匀，加入浓硫酸6.0mL，摇匀，静置5min，置于水浴中40℃恒温静置30min，选用蒸馏水同法操作作为空白对照，分别于490nm处测定吸光度值.将吸光度值作为纵坐标，葡萄糖浓度作为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为A=0.0079C+0.0046，r=0.9993，表明葡萄糖在 10 ～70μg·mL－1范围内呈良好的线性关系，标准曲线测定数据见表1.

表1 标准曲线测定数据

2.3 换算因子的测定

精密吸取单麻叶千里光多糖溶液1.00mL，于干燥试管中，按2.2项下方法操作，测定吸光度，计算出多糖中葡萄糖浓度，按f=W/（DC）计算换算因子（W为多糖重量，C为多糖中葡萄糖的浓度，D为多糖的稀释因子），测得换算因子f=1.14（n=3）.

2.4 精密度试验

精密称取单麻叶千里光粉末200mg，按1.2（4）项下操作，测定吸光度值，平行操作5次，计算RSD值为0.67%（n=5），结果表明仪器精密度良好.

2.5 稳定性试验

精密称取单麻叶千里光粉末200mg，按1.2（4）项下操作，显色后每隔0.5h测定其吸光度值，连续3h，计算RSD为1.06%（n=6），表明显色后的供试品溶液在3h内稳定性良好.

2.6 重复性试验

精密称取单麻叶千里光粉末200mg，6份，按1.2（4）项下操作，测定吸光度值，计算 RSD为1.42%（n=6），表明该方法重现性良好.

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的单麻叶千里光粉末200mg，6份，分别加入精制单麻叶千里光多糖5mg，按1.2（4）项下操作，测定吸光度值，计算平均回收率为99.80%，RSD=0.137%（n=6），见表2.

表2 加样回收率试验（n=6）

2.8 单麻叶千里光多糖含量测定

精密吸取样品溶液1.00mL，按2.2项下方法测定吸光度，代入回归方程，计算出多糖中葡萄糖浓度C，按多糖含量%=（CDf×100）/W公式计算多糖，式中:C表示样品溶液的葡萄糖的浓度，D表示样品溶液的稀释因子，f表示换算因子，W表示样品的重量.通过测定，单麻叶千里光中多糖的平均含量5.29%，RSD=0.378%（n=3），见表3.

表3 样品含量测定结果（n=3）

3 结论与讨论

多糖具有抗肿瘤和免疫促进、抗炎、抗病毒、抗凝血、降血糖等广泛的生物学活性，近年来广泛用于食品和药品中，目前对单麻叶千里光多糖的研究较少，本试验经超声波辅助技术从单麻叶千里光中提取多糖，通过苯酚－硫酸法显色后测定其多糖含量，经计算单麻叶千里光中多糖含量为5.29%，试验结果表明，中药单麻叶千里光中多糖含量较高，具有较好的开发利用前景，但有关单麻叶千里光多糖的生物活性尚需进一步的深入研究.

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.上海:上海科技出版社，1999.

［2］吴斌，林文辉，高慧媛，等.麻叶千里光抗菌化学成分的研究［J］.中草药，2005，36（10）:1447 －1450.

［3］马鸿雁，王峥涛.单麻叶千里光的化学成分研究［J］.广东药学院学报，2010，26（3）:246 －247.

［4］胡彦武，李婷婷.五味子藤茎中多糖的提取及含量测定［J］.安徽农业科学，2009，37（15）:6990 －6991.

［5］高淑云，马亚东.单麻叶千里光硒多糖及硒元素含量的测定［J］.时珍国医国药，2009，20（11）:2763 －2765.

2014－03－10

秦汝兰（1980－），女，吉林通化人，在读博士，讲师.

（责任编辑:陈衍峰）