返魂草资源调查及分子鉴别研究

孙仁爽，张立秋，杨洪凯，邓 琦，薛长松

（通化师范学院·吉林通化·134002）

返魂草为菊科多年生宿根草本植物麻叶千里光和单麻叶千里光的花期干燥全草[1]，是中成药肺宁冲剂的原料药。在民间广泛用于抗病毒性感冒、抗炎及感染性疾患的治疗。返魂草具有清热解毒、舒肝理气等作用，外用还可用于止血及分娩的镇痛等[2]。 这两种植物主要分布于吉林省的长白山区，另外黑龙江、内蒙古及朝鲜、日本、俄罗斯（远东地区）也有分布[4]。主要生于海拔 700～1100 m的林间湿地、山沟林缘及湿草甸子[5]。另外在长白山区还分布另外一种千里光属植物-林荫千里光，与返魂草形态相似，容易被采集混入药材市场。

为了解返魂草分布及基原情况，本研究对长白山返魂草进行了调查，并采集了三种药用植物的叶片，进行DNA分析，为返魂草合理应用提出合理建议。

1 调查及研究方法

在近三年时间对长白山返魂草进行调查，并收集返魂草及林荫千里光叶片装入硅胶袋中迅速脱水干燥处理，形成待测样品。

2 DNA处理

将待测样用植物DNA提取试剂盒提取总DNA；参考罗焜等[6]研究方法，对提取的总DNA进行处理和分析[7，8]。 应用 MEGA6.0 计算分析[9]，构建系统聚类树。

3 调查结果与分析

3.1 生境调查

长白山区返魂草主要生于海拔700～1100m的林间湿地、山沟林缘及湿草甸子。在实地调查的过程中发现，林荫千里光与返魂草混生于山沟林缘处。两种外观形态相似，易于混淆。

3.2 DNA材料

本研究共收集23份样品，详细信息见表1。

表1 实验样品信息表

3.3 样品处理结果

从全部样品的根提取基因组总DNA，对DNA进行PCR扩增，扩增后PCR产物电泳均显示较亮条带，结果见图1。

图1 凝胶电泳图

图1 表明基因组总DNA提取质量较好，对PCR产物进行双向测序得到高质量的ITS2条形码序列。

3.4 物种遗传距离分析及发育树构建

根据测序结果对返魂草和林荫千里光进行分析，结果见表2。

表2 单麻叶千里光、麻叶千里光、林荫千里光遗传距离

由表2可知，返魂草、林荫千里光的种内遗传距离均为0，单麻叶千里光、麻叶千里光中间遗传距离为0.1302，而与林荫千里光种间遗传距离均为0～0.1735，其种间遗传距离都大于种内遗传距离。

基于ITS2序列，构建了系统发育树见图2。

图2 ITS2序列构建返魂草、林荫千里光NJ树

结果表明返魂草与林荫千里光聚为二支，返魂草与林荫千里光在分子上可以区分。所以采用K2P遗传距离、NJ法构建系统发育树可区分返魂草和林荫千里光。

4 结论与讨论

本研究通过对返魂草资源情况调查可知，返还草野生资源逐年减少，在长白山海拔 700～1100m左右或在此类条件下栽培，也可在环境条件相似或相近的地方栽培，对野生资源的保护起到一定的作用。

另比较了药材返魂草和林荫千里光的遗传距离和系统发育树。返魂草药材来源的麻叶和单麻叶千里光，虽然在遗传距离和系统发育上差异不明显，但在我们多年野外考察经验上看，这两种植物从形态上有较大区别，而林荫千里光与返魂草之间区别在细节上，非专业鉴别不能很好的区分。这说明，经典形态分类鉴别与分子鉴别相结合才能科学合理分类。今后还应进一步加大千里光属药用植物资源的样本量，来更好开发该属植物。