依达拉奉注射液杂质谱分析

许真玉

（国家食品药品监督管理总局药品审评中心,北京 100038）

依达拉奉注射液杂质谱分析

许真玉

（国家食品药品监督管理总局药品审评中心,北京 100038）

杂质控制是注射剂质量控制的重要指标之一，而杂质谱分析是建立合理可行的杂质检测方法的基础。本文结合依达拉奉制备方法、稳定性特征、依达拉奉注射液处方分析、原研厂产品介绍文件、国外药典等对依达拉奉注射液的杂质谱分析进行讨论，供相关研究者参考。

依达拉奉注射液；杂质谱；分析

依达拉奉注射液是田边三菱制药株式会社开发的脑保护剂，具有自由基清除作用及过氧化反应抑制作用，2001年4月在日本上市，规格为20 m L∶30 mg，商品名为“RADICUT”，适应证为改善急性脑梗死所致的神经症状、日常生活活动能力和功能障碍，用法用量为每次30 mg，加入适量生理盐水中稀释后静脉滴注，30分钟内滴完，每日2次，14日为一个疗程，尽可能在发病后24小时内开始给药。

原研厂依达拉奉注射液尚未进口我国，目前已有多家国产依达拉奉注射液上市，也有多家申报单位在进行依达拉奉注射液的仿制申请。作为注射液，有关物质检查是非常重要的一项质量控制指标，而杂质谱分析是有关物质检查方法学研究和检测方法建立的基础。本文结合相关文献和日常审评工作经验，对依达拉奉注射液的杂质谱分析进行讨论。

1 药物制剂杂质来源

通常情况下，作为药物制剂，其杂质来源主要包括两方面。

第一是药物制剂各组成成分引入的杂质，包括原料药、辅料等引入的杂质。考虑到原料药是组成制剂的活性成分，而辅料通常为稳定性相对较好的惰性物质，所以需要重点关注原料药可能引入的杂质，可以结合原料药杂质谱分析进行这方面杂质情况的分析。

对于原料药引入的杂质，在进行制剂质量控制时，可以有两种控制方式。一种是在原料药质量标准中进行严格控制，通过严格保证原料药的质量来保证制剂的质量，当然，这种控制方式的前提条件是这些杂质在制剂生产、贮藏过程中不发生变化。另一种方式是一并在制剂质量标准中进行控制，这种方式更适用于原料药杂质控制不够完善的情况。

第二是药物制剂在生产和贮藏过程中产生的杂质，包括各种降解杂质、原辅料相互作用产生的杂质等。这类杂质是制剂杂质研究和控制的重点，可以结合原料药的结构特点和降解途径、原辅料相容性研究情况、制剂处方工艺情况、制剂包装和贮藏情况、强制破坏试验情况、对比研究情况、相关文献资料等，研究分析在制剂生产和贮藏过程中可能生产的杂质。通常这类杂质需要在制剂的质量标准中进行有效的控制。

2 依达拉奉注射液杂质谱分析

如上所述，依达拉奉注射液杂质的主要来源，包括原料药依达拉奉引入的杂质以及在依达拉奉注射液生产和贮藏过程中产生的杂质，下面将分别从这两个方面开展讨论。

2.1 原料药依达拉奉引入的杂质

对于原料药依达拉奉引入的杂质，可以结合原料药依达拉奉的杂质谱进行分析。通常原料药本身的杂质谱包括工艺杂质和降解杂质两方面，考虑到依达拉奉原料药在固体状态下稳定性较好，不容易产生降解杂质[1]，本文将重点对其工艺杂质进行讨论。

2.1.1 依达拉奉的制备方法依达拉奉的制备方法比较成熟，有很多相关的文献报道[2-3]，最常见的制备方法是等摩尔的乙酰乙酸乙酯和苯肼反应制得依达拉奉，反应方程式如下：

图1 依达拉奉反应方程式

2.1.2 依达拉奉原料药工艺杂质分析根据上述依达拉奉制备方法，在依达拉奉原料药中可能存在的工艺杂质包括未反应完全的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼以及起始原料中含有的杂质、反应副产物二聚体等。其中，对于起始原料中含有的杂质，可以通过进一步追溯所使用的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼的制备方法而进行分析。乙酰乙酸乙酯可以采用双乙烯酮与乙醇酯化法，或者乙酸乙酯与乙醇钠Claisen缩合法制得粗品，通过减压蒸馏得到成品[4]。苯肼通常以苯胺为起始原料，经重氮化、还原、酸析成盐、中和等反应制得[5]。

2.1.3 依达拉奉原料药引入杂质的控制对于上述分析中提到的杂质，二聚体杂质在依达拉奉注射液的生产和贮藏过程中也会产生，需要在依达拉奉注射液中进行研究和控制。苯肼属于潜在遗传毒性杂质，为更好地保证依达拉奉注射液质量，建议一并在依达拉奉注射液中进行研究和控制，根据欧洲药品管理局（EMA）指导原则[6]，每日摄入量应低于1.5 μg，依达拉奉注射液的日剂量为60 mg，据此计算，建议将其控制在25 ppm以内。未反应完全的起始原料乙酰乙酸乙酯以及起始原料中含有的杂质，建议在原料药依达拉奉的质量标准中进行控制。

2.2 依达拉奉注射液降解杂质的分析

2.2.1 原料药依达拉奉理化性质的分析文献报道，依达拉奉在固体状态下稳定性较好，田边三菱制药株式会社的依达拉奉注射液产品介绍（interview form，IF）文件显示，依达拉奉无引湿性，在50℃高温条件下放置3个月、在40℃/75%相对湿度的高湿条件下放置6个月、在1 000 lx的光照条件下放置4周、在室温下长期放置36个月，除颜色稍有变化外，性状、熔点、纯度、干燥失重、含量等基本无变化[1]。

但依达拉奉在水溶液状态下稳定性较差，易被氧化、对高热不稳定、在碱性条件下稳定性差、在酸性条件下稳定性较好[7-8]。

2.2.2 依达拉奉注射液处方分析田边三菱制药株式会社的依达拉奉注射液处方组成包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、氯化钠、氢氧化钠、磷酸、注射用水，同时进行充氮处理[1]。在日本上市的大部分依达拉奉注射液仿制产品，其处方组成与原研产品基本一致。也有部分仿制产品的处方与原研产品不同，如处方组成为依达拉奉、亚硫酸氢钠、枸橼酸、氯化钠、氢氧化钠、磷酸、注射用水，同时进行充氮处理[9]。

已上市的产品中，处方中大多添加了抗氧剂等稳定剂，如亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸等，以保证依达拉奉注射液中主成分的稳定性。

2.2.3 原研厂IF文件中的杂质分析在田边三菱制药株式会社的依达拉奉注射液IF文件[1]中，较详细地讨论了产品中可能含有的杂质，如表1所示。

表1 田边三菱制药株式会社依达拉奉注射液IF文件中的杂质

根据表1杂质结构信息可知，化合物a为依达拉奉二聚体杂质，降解物P1和降解物P3为依达拉奉与辅料发生相互作用而产生的杂质，降解物P2为苯肼。

同时，原研厂IF文件中提供的稳定性研究结果显示，依达拉奉注射液采用无色玻璃安瓿包装，在不同条件下放置时，杂质有变化的趋势。如25℃长期放置稳定性试验中，降解物P1由0时的0.04%～0.06%变为0.21%～0.25%（12个月）、0.25%～0.28%（36个月），但其他杂质变化不明显，大多由0.01%～0.04%变为0.06%～0.08% （36个月），均能够维持在0.1%以下；在40℃/75%相对湿度条件下进行的6个月加速稳定性试验中，可以检测到化合物a、降解物P1、降解物P2分别为0.23%、0.27%、0.05%；在影响因素试验中，在50℃放置3个月可以检测到降解物P1、降解物P2分别为0.43%、0.09%，在2 000 lx/25℃放置4周，未观察到变化。

以上信息显示，化合物a和降解物P1是依达拉奉注射液中含有的主要杂质，降解物P2为苯肼，属于潜在遗传毒性杂质，也需要进行研究和控制。

2.2.4 依达拉奉注射液日本药典标准的分析在依达拉奉注射液日本药典标准[10]中，采用两套高效液相色谱法（HPLC）系统进行有关物质检查。

系统一采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流动相为水-甲醇-醋酸（100∶100∶1），紫外检测器240 nm检测，柱温约40℃，调整流速使主成分依达拉奉保留时间为4 m in左右，色谱图记录时间为主成分峰保留时间的7倍，采用主成分自身对照法，检出的杂质不得大于0.2%。

系统二采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流动相为稀醋酸（1→100）-甲醇（3∶1，氨水溶液调整pH值为5.5），紫外检测器240 nm检测，柱温约40℃，调整流速使主成分依达拉奉保留时间为11 m in左右，色谱图记录时间为主成分峰保留时间的2.5倍，采用主成分自身对照法，相对保留时间0.3的杂质不得大于0.4%，相对保留时间0.4的杂质不得大于0.1%，其他杂质不得过大于0.2%。

在依达拉奉注射液日本药典标准中，对两个特定杂质进行了单独控制，由于仅提供了相对保留时间，目前还不能确定这两个特定杂质的种类。

2.2.5 依达拉奉注射液降解杂质的控制综合以上各方面信息，由于依达拉奉在水溶液状态下稳定性较差，需要在处方中添加抗氧剂等稳定剂。在依达拉奉注射液的生产和贮藏过程中，可能产生二聚体等降解杂质，同时依达拉奉可能与辅料亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸等发生相互作用而产生杂质。另外作为潜在遗传毒性杂质的苯肼，也需要进行严格控制。

对于特定杂质的研究和控制，通常建议采用外标法进行，杂质对照品可以外购，也可以自行制备。对于外购的杂质对照品，需要关注该对照品的用途、质量控制情况，在有效期内使用。对于自行制备的杂质对照品，需要建立制备方法，并对制得的对照品进行结构确证研究、纯度标定研究，并建立质控标准和有效期。

3 讨论

以上结合依达拉奉制备方法、依达拉奉稳定性特征、依达拉奉注射液处方、原研厂IF文件、国外药典等对依达拉奉注射液的杂质谱分析进行了讨论。杂质控制是注射剂质量控制的重要指标之一，而杂质谱分析是建立合理可行的杂质检测方法的基础。作为注射剂生产者，需要高度关注杂质谱分析工作，不断提升产品质量控制水平。

[1]PMDA.ラジカット注30 mg.[EB/OL].http://www.info.pmda.go. jp/go/pack/1190401A1023_3_04.

[2]刘燕华，万涣，许军，等.正交设计法选择依达拉奉的合成条件[J].中国药业，2006，15（21）：43-44.

[3]张学超.依达拉奉、拉米呋啶、医药中间体的合成开发研究[D].山西：山西大学，2011.

[4]吴禄勇，林小明，黄国华.乙酰乙酸乙酯合成实验的方法改进[J].广东化工，2012，39（11）：4-5.

[5]胡云根，徐正安.苯肼的合成工艺研究[J].江西化工，2006（4）：187.

[6]EMA.Guideline on the Limit of Genotoxic Impurities.[EB/OL]. http：//www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500002903.pdf.

[7]付桂英，温明铃，贾立华，等.处方因素对依达拉奉注射剂稳定性的影响[J].中国新药杂志，2005，14（6）：726-728.

[8]林冠雄，廖荣寿.依达拉奉注射液制剂处方及工艺的研究[J].海峡药学，2005，17（5）：17-20.

[9]PMDA.エダラボン点滴静注液30 mg「ケミファ」.[EB/OL]. http：//www.info.pmda.go.jp/go/pack/1190401A1171_1_02.

[10]Supplement I，JP XVI.Edaravone Injection[S].2011：2401-2402.

Analysis on Impurity Profile of Edaravone Injection

Xu Zhenyu（Center forDrug Evaluation of the State Food and Drug Administration，Beijing 100038，China）

Impurity control isone of the important itemsof quality control of injections，and impurity profile analysis is thebasis for theestablishmentof a reasonable and feasiblemethod for detection of impurities.In thisarticle，impurity profile analysis of edaravone injection was discussed based on the preparation technique，stability characteristics，and formulation analysisof edaravone injection，and referring to the research documentof the productand foreign pharmacopoeia，etc.

Edaravone Injection；Impurity Profile；Analysis

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.08.007

2014-04-21）

许真玉，女，博士。研究方向：药物技术审评。E-mail：xuzhy@cde.org.cn