HPLC法测定乳脂体中白藜芦醇的含量

2014-04-27 01:54游国叶李光霞黄传辉
亚太传统医药 2014年9期
关键词:乳脂白藜芦醇精密度

游国叶,李光霞,黄传辉

(信阳职业技术学院 药学院,河南 信阳 464000)



HPLC法测定乳脂体中白藜芦醇的含量

游国叶,李光霞,黄传辉

(信阳职业技术学院 药学院,河南 信阳 464000)

目的:建立HPLC法测定自制白藜芦醇乳脂体中白藜芦醇的含量。方法:采用Luna C18(5μm,250mm×4.6mm)柱,以甲醇∶水(75∶25)为流动相,流速1.0mL/min, 305nm波长处检测。结果:白藜芦醇在0.1~50μg/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为:A=125 485.4C+8 407,R=0.999 9;平均回收率为99.1%,RSD为0.63%。结论:本法快速、准确,结果可靠,重现性好,适用于白藜芦醇制剂的质量控制。

白黎芦醇;HPLC;含量测定;乳脂体

白藜芦醇(本文下称RES)又名芪三酚,是含芪类结构的二苯乙烯芪类、非黄酮类多酚物质,文献报道其对光敏感,在多种植物如虎杖、决明、葡萄中均有RES存在。多篇文献报道[1]RES药理作用较多,对心脑血管疾病有明显的疗效,还具有较强的抗突变、抗炎、抗氧化等生物活性,部分研究显示它能够抑制肿瘤生长,具有较强的抗肿瘤活性,有望成为新一代植物类抗肿瘤新药物。 由于RES难溶于水,半衰期短,生物利用度低,本研究欲将其制备新剂型乳脂体,该剂型可将脂溶性药物包裹其中,改善其在体内存留时间短的缺陷。制备过程中使用一些具有特殊功能的辅料,提高体内吸收程度,改善疾病治疗效果。本实验仅对含量测定进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BP211D型半微量电子天平、Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996紫外检测器 (美国Waters公司);100μL进样针(江苏汉邦科技有限公司)。

1.2 试药

白藜芦醇(湖北银河化工厂,含量99.9%)、分析级甲醇及氯仿。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 波长选择 取处方量RES标准品和不含药的空白辅料混合物,分别置于25mL容量瓶中,甲醇溶解定容,备用。以甲醇为空白,分别取上两溶液进行紫外扫描,由试验可知在305nm处标准品有最大吸收峰,不含药的空白辅料混合液无吸收,故选择305nm为最佳波长,扫描图谱见图1。

2.1.2 色谱条件 色谱柱:Luna C18(250mm×4.6mm ,5μm);流动相:甲醇-水(75∶25);流速:1.0mL/min;检测波长:305nm;柱温:室温;进样量:20μL。

图1 波长扫描

2.1.3 储备液制备 精密称取白藜芦醇对照品适量,用甲醇配制成200μg/mL的RES对照品储备液。

2.1.4 干扰试验 精密量取上储备液7.5mL于100mL容量瓶,甲醇定容,得15μg/mL的RES对照品溶液;同上操作制备相当于含15μg/mL RES的空白乳脂体和含药RES乳脂体。取上述三种溶液分别按照“2.1.2”项下色谱条件进样测定,由试验结果可见,在选定的色谱条件下,药峰与杂质峰、溶剂峰均能有效分离且峰形稳定,保留时间约为6.3min,其它辅料均不影响RES测定。色谱见图2。

图2 白藜芦醇色谱

2.2 线性关系考察

精密量取“2.1.3”储备液5mL于100mL容量瓶中,流动相定容,摇匀,得浓度为10μg/mL的RES对照品溶液。分别精密吸取RES标准溶液适量于10mL容量瓶中,流动相定容,摇匀,得浓度分别为0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、50.0μg/mL的系列溶液,进样,以“2.1.2”项下色谱条件进样测定峰面积,以峰面积A对浓度C作线性回归,得标准曲线方程为A=125 485.4C+8 407 ,R=0.999 9,表明RES在0.1~50μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.3 精密度试验

精密量取RES对照品储备液适量配制浓度分别为5、15、50μg/mL的RES溶液3份,按“2.1.2”项下色谱条件进样,每份样品每隔4h测定1次,共测5次;每份样品每天测1次,连续测定5天。分别计算RES的日内及日间精密度。可得日内精密度和日间精密度三浓度RSD分别为1.31%、0.91%、1.01%和1.40%、0.95%、1.25%,由此可知,精密度良好。

2.4 加样回收率试验

取已知含量的RES(99.9%)9份, 每份约0.1g,精密称定,分别置于已标号的1~9号烧杯中,其中1、2、3号中加入RES对照品溶液50μg·mL-1,4、5、6号中加入RES对照品溶液100μg·mL-1,7、8、9号加入RES对照品溶液150μg·mL-1各10mL,得到9份加样回收供试液。按“2.1.2”项下色谱条件测定,结果见表1。由表1可知:平均回收率为98.71%,表明用HPLC测定RES的含量准确度良好。

表1 回收率试验结果

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液,在放置时间为0、2、5、8、12h时进样,测定峰面积,稳定性试验RSD为1.46%,小于2%药典标准,说明稳定性在此条件下良好。

2.6 样品含量测定

按成熟的制备工艺和处方量制备三批含药乳脂体(编号1、2、3),精密吸取该制剂5mL置100mL容量瓶中,流动相定容,摇匀后过滤,取续滤液得约相当于;另精密量取浓度约为20μg/mL的RES对照品溶液,分别取供试液和对照品液进样,用峰面积外标法计算含量,结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

通过文献查阅和反复预实验,在紫外扫描的基础上确定了主药的测定波长,最终选择了甲醇∶水(75∶25)为流动相,室温条件下测定白藜芦醇乳脂体的体外含量分析方法,以HPLC测定白藜芦醇的含量,试验条件下线性关系良好,精密度、回收率均符合药典规定,重现性好,方法学考查表明此法可用来进行含RES的乳脂体制剂的含量测定。由试验可知,由于RES对光敏感,自然光照下室温放置16h,含量下降20%,棕色瓶室温条件下放置72h后含量降低5%,所以在实验过程中应避光操作。

白藜芦醇属于强脂溶性药物,体内药代不佳,消除半衰期短,难以达到有效治疗的血药浓度,不利于疾病的治疗,而新剂型乳脂体类似于脂质体,可包封脂溶性药物,使被包封的药物性质不发生改变,毒性降低,提高利用度。

[1] 张文众.白黎芦醇雌激素作用研究[J].中国食品卫生杂志,2008,20(3):214-216.

(责任编辑:宋勇刚)

2014-01-06

游国叶(1984- ),女,河南省信阳职业技术学院助教,研究方向为药物新剂型与新技术。

R284.2

A

1673-2197(2014)09-0031-02

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