多潘立酮片的微生物限度方法学验证

解艳　吕文博

摘 要 目的：建立多潘立酮片的微生物限度检查法。方法：采用平皿法。结果：建立了多潘立酮片的微生物限度检查的验证方法。结论：方法学研究结果符合规定，多潘立酮片可以采用平皿法进行微生物限度检查。

关键词：多潘立酮片；平皿法；验证

微生物限度检查法分为平皿法和薄膜过滤法。当供试品具有抑菌活性时，应消除抑菌活性后，再依法检查，常用方法为：稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法。

1 实验条件

1.2 培养基

2.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法合格标准

在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应不低于70%。若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。

2.2 控制菌检查方法合格标准

阴性菌对照组不得检出该试验菌。试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。

2.3 菌液的制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌新鲜培养物用0.9% 无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化纳溶液制成50-100cfu的孢子悬液。

菌液制备后在室温下放置，于2 小时内使用。菌液制备后在2～8℃保存，在24 小时内使用。

3 样品制备

4.1.6实验检查结果：3次独立的平行试验中试验组的菌回收率均大于70%，稀释剂对照组的菌回收率也均大于70%，结果符合规定。

4.2 控制菌检查法的验证

控制菌检查方法验证用菌种：大肠埃希菌。

4.3 菌液制备：（同菌液的制备2.3）。

4.4 大肠埃希菌的验证

4.4.1试验组

取供试液10ml及50～100cfu大肠埃希菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，混匀，按照《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范中控制菌检查方法验证项下方法进行检查。

4.4.2 阳性对照组

取50～100cfu试验菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.3 阴性对照组

取稀释液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.4 实验检查结果：：试验组均应能检出该试验菌，阳性对照组检出试验菌，阴性对照组无菌生长。结果符合规定。

5 结束语

试验表明：多潘立酮片的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法验证结果符合规定，大肠埃希菌的方法验证结果也符合规定。多潘立酮片的微生物限度方法学验证结果符合规定，可以采用药典中片剂的微生物限度方法检查微生物限度。

参考文献

[1]《中国药典》2010年版.

[2]《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范.endprint

摘 要 目的：建立多潘立酮片的微生物限度检查法。方法：采用平皿法。结果：建立了多潘立酮片的微生物限度检查的验证方法。结论：方法学研究结果符合规定，多潘立酮片可以采用平皿法进行微生物限度检查。

关键词：多潘立酮片；平皿法；验证

微生物限度检查法分为平皿法和薄膜过滤法。当供试品具有抑菌活性时，应消除抑菌活性后，再依法检查，常用方法为：稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法。

1 实验条件

1.2 培养基

2.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法合格标准

在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应不低于70%。若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。

2.2 控制菌检查方法合格标准

阴性菌对照组不得检出该试验菌。试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。

2.3 菌液的制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌新鲜培养物用0.9% 无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化纳溶液制成50-100cfu的孢子悬液。

菌液制备后在室温下放置，于2 小时内使用。菌液制备后在2～8℃保存，在24 小时内使用。

3 样品制备

4.1.6实验检查结果：3次独立的平行试验中试验组的菌回收率均大于70%，稀释剂对照组的菌回收率也均大于70%，结果符合规定。

4.2 控制菌检查法的验证

控制菌检查方法验证用菌种：大肠埃希菌。

4.3 菌液制备：（同菌液的制备2.3）。

4.4 大肠埃希菌的验证

4.4.1试验组

取供试液10ml及50～100cfu大肠埃希菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，混匀，按照《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范中控制菌检查方法验证项下方法进行检查。

4.4.2 阳性对照组

取50～100cfu试验菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.3 阴性对照组

取稀释液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.4 实验检查结果：：试验组均应能检出该试验菌，阳性对照组检出试验菌，阴性对照组无菌生长。结果符合规定。

5 结束语

试验表明：多潘立酮片的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法验证结果符合规定，大肠埃希菌的方法验证结果也符合规定。多潘立酮片的微生物限度方法学验证结果符合规定，可以采用药典中片剂的微生物限度方法检查微生物限度。

参考文献

[1]《中国药典》2010年版.

[2]《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范.endprint

摘 要 目的：建立多潘立酮片的微生物限度检查法。方法：采用平皿法。结果：建立了多潘立酮片的微生物限度检查的验证方法。结论：方法学研究结果符合规定，多潘立酮片可以采用平皿法进行微生物限度检查。

关键词：多潘立酮片；平皿法；验证

微生物限度检查法分为平皿法和薄膜过滤法。当供试品具有抑菌活性时，应消除抑菌活性后，再依法检查，常用方法为：稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法。

1 实验条件

1.2 培养基

2.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法合格标准

在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应不低于70%。若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。

2.2 控制菌检查方法合格标准

阴性菌对照组不得检出该试验菌。试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。

2.3 菌液的制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌新鲜培养物用0.9% 无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化纳溶液制成50-100cfu的孢子悬液。

菌液制备后在室温下放置，于2 小时内使用。菌液制备后在2～8℃保存，在24 小时内使用。

3 样品制备

4.1.6实验检查结果：3次独立的平行试验中试验组的菌回收率均大于70%，稀释剂对照组的菌回收率也均大于70%，结果符合规定。

4.2 控制菌检查法的验证

控制菌检查方法验证用菌种：大肠埃希菌。

4.3 菌液制备：（同菌液的制备2.3）。

4.4 大肠埃希菌的验证

4.4.1试验组

取供试液10ml及50～100cfu大肠埃希菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，混匀，按照《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范中控制菌检查方法验证项下方法进行检查。

4.4.2 阳性对照组

取50～100cfu试验菌1ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.3 阴性对照组

取稀释液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，依试验组项下方法进行大肠埃希菌检查。

4.4.4 实验检查结果：：试验组均应能检出该试验菌，阳性对照组检出试验菌，阴性对照组无菌生长。结果符合规定。

5 结束语

试验表明：多潘立酮片的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法验证结果符合规定，大肠埃希菌的方法验证结果也符合规定。多潘立酮片的微生物限度方法学验证结果符合规定，可以采用药典中片剂的微生物限度方法检查微生物限度。

参考文献

[1]《中国药典》2010年版.

[2]《中国药典》2010年版中国药品检验标准操作规范.endprint