佛手水提取物对小鼠抗运动性疲劳作用研究

张颖，江玲丽，赵小平

(1.安徽中医药高等专科学校，安徽芜湖241000;安徽商贸职业技术学院，安徽芜湖241000)

0 引言

佛手(Fructus citri Sarcodactylis)系芸香科柑桔属植物佛手(Citrus medica L.var.Sarcodactylis Swingle)干燥果实.味辛、苦、甘，性温，入肝、胃、脾经，属理气类中药中的代表药物.中医认为其有舒肝理气，和胃化痰之功，用于胃气滞，胸胁涨痛，胃脘痞满，食少呕吐等症[1].目前常见有关佛手化学成分、质量分析等文献报道，药效学研究相对较少.运动性疲劳是由运动引发的不可避免的生理现象，与单纯的脑力劳动或因情致(精神)引起的疲劳不同，而与劳动所致的疲劳类相同[2].实验研究了佛手水提取物对小鼠负重游泳的影响，观察了负重游泳力竭时间、血乳酸、肝糖原等指标的变化，探讨了佛手水提取物抗疲劳作用的规律，为理气类中药抗疲劳研究提供了一定的科学依据.

1 材料与试剂

1.1 材料

昆明种小鼠(6周龄)，体重(30.37±2.7)g，雌雄各半，由皖南医学院动物实验中心提供;佛手药材(金华)，购自芜湖市中大药房，由安徽中医药高等专科学校中药教研室刘学医老师鉴定确系芸香科柑桔属植物佛手的干燥果实.

1.2 试剂

血乳酸试剂盒产自长春汇力生物技术有限公司，肝糖原测试盒产自南京建成生物工程研究所，纯净水为商用纯净水.

1.3 仪器

FA21048型分析天平为上海越平仪器厂产;ATM40-1B超声波清洗机为苏州爱拓玛机械公司产;UV-5100型紫外可见分光光度计由上海元析仪器有限责任公司生产.

2 方法

2.1 佛手水提液的制备

精密称取佛手药材25 g，切碎后转移至500 mL圆底烧瓶中，加入100 mL纯净水，室温下超声提取30 min，过滤后再加入100 mL纯净水，同法提取3次，合并提取液，浓缩至100 mL，既得得佛手水提取液待用.

2.2 抗疲劳试验

采用小鼠负重游泳法.选取100只小鼠，在其尾部绑缚相当于其体重5%的铅丝，放入水深不低于30 cm、水温25℃的水槽中进行负重游泳训练，每隔2天训练一次，每次30 min.选取耐力时间相近的小鼠60只为实验对象.将实验对象小鼠平均分为空白对照和药物高低剂量组，每组20只.低剂量组按照0.1 mL/10 g给药体积小鼠灌胃给药，高剂量组按照0.4 mL/10 g给药体积小鼠灌胃给药，空白组给予生理盐水灌胃，1次/d.连续给药14 d，末次给药1 h后，每组选取10只尾部绑缚约为体重5%的铅丝，放入水槽中人工驱赶不停游泳直至完全沉入水中8 s不出水面，即判断为力竭，记录时间;另取各组别10只小鼠，置于水槽中游泳30 min后，取出休息20 min后断头处死，立即收集血液，用于测试血乳酸含量，并采集肝组织，用滤纸吸干血迹后，称取约50 g，用于测试肝糖原含量.

2.3 统计学方法

实验数据采用spss16.0分析处理，所有数据以平均数±标准差(x±s)表示，组间采用q检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义.

3 结果

3.1 小鼠负重游泳力竭时间

实验结果显示佛手水提液高低剂量组均能延长小鼠负重游泳力竭时间，低剂量组与空白对照组相比差异不显著(P＞0.05)，高剂量组与空白组对比差异具有统计学意义(P＜0.05)，可显著延长小鼠负重游泳力竭时间，详见表1.

表1 小鼠游泳力竭时间(±s，n=10)

表1 小鼠游泳力竭时间(±s，n=10)

注:*代表与空白对照组存在显著差异(P＜0.05)

t/min空白对照组别剂量/(mL/10 g)27.33±3.51佛手水提物低剂量组0.139.28±4.15佛手水提物高剂量组0.448.17±4.73 0*

3.2 小鼠血乳酸、尿素氮浓度变化

实验结果显示佛手水提液高低剂量组均能降低运动后小鼠血液中乳酸和尿素氮浓度，低剂量组可显著降低运动后小鼠血液中乳酸浓度，差异具有统计学意义(P＜0.05)，高剂量组可非常显著降低运动后小鼠血液中乳酸浓度，差异具有统计学意义(P＜0.01)，同时高剂量组亦可显著降低小鼠血液中尿素氮浓度(P＜0.05)，详见表2.

表2 小鼠血乳酸浓度(±s，n=10)

表2 小鼠血乳酸浓度(±s，n=10)

注:*代表与空白对照组存在显著差异(P＜0.05);＊＊代表非常显著差异(P＜0.01).

组别剂量/(mL/10 g)血乳酸浓度/(mmol/L)尿素氮/(mmol/L)空白对照7.38±0.8214.37±1.19佛手水提物低剂量组0.15.42±0.51*11.17±0.92佛手水提物高剂量组0.45.01±0.44＊＊9.28±0.84 0*

3.3 小鼠肝糖原含量变化

实验结果显示佛手水提液高低剂量组均能增加小鼠肝脏中肝糖原含量，其中高剂量组与空白组对比差异具有统计学意义(P＜0.05)，可显著增加小鼠肝脏中肝糖原含量，详见表3.

表3 小鼠肝糖原含量(±s，n=10)

表3 小鼠肝糖原含量(±s，n=10)

注:*代表与空白对照组存在显著差异(P＜0.05).

组别剂量/(mL/10 g)肝糖原含量/(g/100 g)空白对照11.14±1.27佛手水提物低剂量组0.113.49±1.58*佛手水提物高剂量组0.415.72±1.67 0*

4 讨论

1)疲劳指不能维持体力和运动耐力，致使工作能力的下降，是一种复杂的生理过程，主要由内耗和代谢产物的堆积造成[2].实验结果显示，高低剂量的佛手水提取液均能延长小鼠负重游泳力竭的时间，特别是高剂量的佛手水提取液可显著延长小鼠负重游泳力竭时间(P＜0.05)，结果证实佛手水提取液可有效提高小鼠体力和运动耐力，对小鼠抗运动性疲劳具有明显的效果.

2)运动过程中，机体会产生各种代谢产物，如乳酸、氧自由基等在体内堆积.当大量乳酸堆积在肌肉中时可影响肌肉张力，继而造成肌肉疲劳感，产生运动性疲劳.实验中高低剂量的佛手水提取液均可显著降低运动后小鼠血液中乳酸浓度，增加机体对乳酸的排泄率，改善了大强度运动后小鼠体内乳酸堆积的程度，缓解了机体的疲劳感.因剧烈运动造成机体由糖或脂肪分解而获得的能量不足时，就会通过分解蛋白质补充能量，进而造成蛋白质的代谢产物尿素含量的增加[3].研究结果显示，高剂量的佛手水提液可显著降低血液中尿素氮的含量，提示佛手水提液或可提高对体内糖和脂肪的利用率，增加机体能量的获得，从而降低了分解蛋白质而导致的尿素氮含量.

3)当人体运动时，血液中的血糖水平下降，中枢神经会释放出疲劳信号，促使肝脏等器官释放内存糖原以升高体内血糖水平，保持运动的能力，所以肝脏中糖原的储量代表机体抵抗运动性疲劳的能力.糖原主要的储存场所在肝脏和骨骼肌.研究结果表明，高剂量佛手水提液能够明显增加小鼠肝糖原的储备量，提示佛手水提取液可促进机体对糖原的储备，提高人体对运动疲劳的抵抗，继而缓解运动疲劳的产生，延长运动时间.

4)中医对疲劳的认识已有两千多年历史.中医经典《黄帝内经》、《金匮要略》等医著对疲劳有较多的论述，中医较深刻的解释了疲劳的机理和本质，一般认为疲劳与脾虚和肾虚密切相关，并提出不少治疗方法[4].理气药指以疏畅气机，调节脏腑功能，消除气滞、气逆为主的一类药物，而与气运化相关的脏腑包括肝、脾、胃和肺[5].中医用药讲求平衡，从中医药理的角度进行分析，理气类药物虽然不能直接补充能量，但可运化气血，调节脏腑功能，顺畅机体气息，加速体内代谢产物的排泄，平衡内分泌、免疫等多系统的功能，从而改善肌肉能量代谢的模式，最终起到预防运动性疲劳、提高耐力的作用.佛手富含多糖类物质，其水提取物具有的显著抗疲劳作用否就是多糖类药物的生物活性以及其作用机制，留待后续研究验证.

[1] 肖培根.新编中药志[M].北京:化学工业出版社，2002:304-305.

[2] 解丽芳.中医药抗运动性疲劳的研究进展[J].中国运动医学杂志，1998，17(1):67-69.

[3] 施溯筠，李秀国.榆黄蘑饮料对小鼠抗疲劳、耐缺氧和抗氧化作用的影响[J].时针国医国药，2010，21(7):1806-1810.

[4] 孙革，潮芳.中药消除运动性疲劳方法的研究综述[J].北京体育大学学报，2004，27(8):1078-1080.

[5] 张世明.中医药在运动医学领域中的应用研究[M].//中国科协.2005年学术年会体育科学分会场论文摘要汇编.北京:北京体育大学出版社，2005.