Immuknow检测在肾脏移植方面的应用

滕昊林,赵 军,李丹丹,于金宇,张文岚,薛立娟

(1.吉林大学第一医院 泌尿系统疾病诊治中心，吉林 长春130021；2.长春市宽城区疾病预防控制中心 检验科，吉林 长春130051)

随着肾脏移植的发展，大量新型免疫抑制剂的广泛应用，使得移植患者存活率明显提高。目前，对移植患者血液中免疫抑制剂浓度的检测，是一个普遍控制剂量的依据，但血药浓度检测虽然能较准确反映受者免疫抑制剂代谢状态，却不能准确评估受者免疫功能，可能出现感染和排斥等问题，一定条件下影响了肾脏移植患者的生存状况。

由于免疫抑制剂个体应用的差异较大，而这种差异主要表现为患者免疫状态，这就需要对肾移植患者进行有效、准确的免疫功能检测，作出正确评估，对患者合理监测，提高长期生存率。因此建立一种能检测肾移植患者免疫状态的方法，并配合免疫抑制剂药物浓度的检测就显得十分必要。为了达到这一目标，很多检测方法大量的应用，但是由于都不能标准化，室间比对差异限制了他们的应用。

随着移植免疫的深入研究，Kowalski确定了T淋巴细胞在移植中的调节作用[1]，CD4+T淋巴细胞的活化是核心环节，调节机体多种免疫反应，且ATP为CD4+T淋巴细胞免疫的能量基础，检测CD4+T细胞内ATP含量可以了解细胞活化程度，反映出机体的免疫功能状态[2]。

1 Immuknow检测免疫状态的界定

ImmuknowTM-Cylex通过使用PHA刺激全血淋巴细胞增殖，培养15-18个小时，用抗CD4+T淋巴细胞的单克隆抗体包被的磁珠选择性结合CD4+T淋巴细胞，并加入发光试剂检测裂解后淋巴细胞释放的ATP值来评价细胞免疫活化程度，进而评价免疫状态。

FDA[1]对155名正常人和127名生存良好的器官移植患者进行Immuknow分析，将免疫状态分为三个参考区间，即ATP≤225 ng/ml为低免疫， 226 ng/ml≤ATP≤524 ng/ml为中度免疫，≥524 ng/ml为高免疫。其中健康儿童(12岁以下)，参考区间略有减少，即低免疫为≤175 ng/ml，中免疫为175 ng/ml≤ATP≤395 ng/ml，高免疫为≥395 ng/ml；12岁以上儿童参考范围与成人无差异；稳定成人肾移植患者为258 ng/ml，儿童则为165 ng/ml[3]。器官移植患者免疫状态维持在中免疫时，相对稳定。

Kowalski[4]等对美国504名器官移植(心、肝、肾、小肠)患者进行1833次Immuknow分析，证实移植患者CD4+T淋巴细胞ATP在280 ng/ml时是控制感染和排斥风险的平衡点。

Zhou[5]等对我国259例肾移植患者Immuknow检测结果显示238 ng/ml≤ATP≤497 ng/ml为中度免疫，与国外比较有些许差异。且肾移植术前患者普遍Immuknow检测结果低于正常人，而在术后一周左右，ATP含量最低，两周左右开始上升，但四周时仍然低于术前水平[6]。术后短时间内ATP降低这可能与接受移植手术前诱导及早期免疫抑制治疗方案有关。

随着感染、排斥、临床指标、个体免疫状态相关性的分析，Immuknow结果参考区间意义逐步明确，但对于理想的控制范围、依据以及个体间的差异，仍需更多的临床检测数据予以完善。

2 检测Immuknow对感染与排斥的意义

肾移植术后患者面临的主要威胁是感染和排斥，而且严重影响患者生存状态。免疫状态过高，可能导致器官发生排斥反应，而免疫状态过低，又可加大感染的发生几率。无论是免疫水平过高还是过低，最终都会影响到移植肾的长期存活，甚至还会威胁到患者的生命。

Immuknow的检测价值在于能够早期预测感染和排斥的发生[7]，如果能够定时定期地对术后患者进行Immuknow检测，提早给予治疗，可减少相应并发症的发生，可以避免不必要的风险，更好地延长患者和移植肾脏寿命。当患者免疫状态在低免疫或高免疫时，较同期处于中免疫状态患者发生感染或排斥发生的风险增加十几至几十倍[4]，且临床意义更加明显。当术后ATP≤100 ng/ml时，几乎都会存在一定的感染[8]。

对同一患者来讲，动态监测不同时期的检测结果，对其自身的免疫状态评估更有意义。Cadillo-Chavez[9]等通过对个体的动态检测，发现肾脏移植患者在术后两周时Immuknow检测结果比术前有所升高，提示有发生排斥的可能，检测结果比术前有所降低可提示感染风险加大，亦可能存在免疫抑制过度，应加以注意。尤其对术后重症感染的发生有一定预知性，为临床抗感染治疗和适时调整免疫抑制剂提供依据。据报道，重症肺感染一般在肾移植术后半年内[10]，急性排斥反应多发生在术后1个月内，术后半年内进行Immuknow动态监测具有重要临床应用价值。

在预防和治疗感染、排斥方面，发生感染的患者CD4+T细胞内ATP含量低于非感染者，感染加重时，CD4+T细胞内ATP含量显著下降，且感染程度与免疫力低下程度有关。CD4+T淋巴细胞的ATP含量降低基本早于临床感染的发生，对术后感染有良好的预警作用。因此相对排斥而言，Immuknow更能有效地预测感染的发生[11，12]。也有学者认为Immuknow对于移植术后患者的排斥缺少预见性[13]。

统计分析证实，肾移植术后稳定组ATP值可在(310.19±147.12)ng/ml，而术后感染可在(142.41±118.26)ng/ml，多数排斥组与稳定组无统计学意义。最新研究表明，ATP在(627.07±149.85) ng/ml会发生排斥反应，且明显高于同期稳定组(320.48±149.11) ng/ml[8,14,15]。

3 Immuknow检测结果与临床免疫抑制治疗的调整

T淋巴细胞是免疫应答的主要细胞，大多数免疫抑制剂主要作用于T淋巴细胞[16]，而CD4+T淋巴细胞在移植免疫过程中发挥重要作用，故通过测定CD4+T淋巴细胞内ATP含量可以检测移植患者细胞免疫功能，为免疫抑制剂的调整提供依据。

通常采用FK506的患者Immuknow检测结果较同期环孢素A患者低，可能与FK506比环孢素A免疫抑制作用较强有关[6]。

目前，临床多以患者服用免疫抑制剂后的血药浓度与临床表现作为调节基础，但血液药物浓度与机体免疫的实际情况存在差异，且不同个体之间药物代谢动力学和药物效应也存在较大差异。能否全面、准确的估计肾脏移植患者免疫状态就显得格外重要。

通过Immuknow对患者免疫功能的实时监测，了解肾移植患者免疫状态，弥补免疫抑制剂血药浓度监测的不足，准确给药，实现真正意义的依据免疫功能施行个体化调节，减少不必要的感染与排斥的发生，在免疫不足和免疫过度之间求得平衡。有效预防感染和免疫排斥发生的同时，尽可能使用少量的免疫抑制剂，减少患者药物代谢所带来的不良反应和经济负担。

4 Immuknow检测在肾移植的临床应用价值

Moyer[17]等于1983年最早提出了内源性ATP数量能反映细胞活化程度的理论。Sottong[18]等在2000年应用ATP生物发光法检测多种抗原刺激后淋巴细胞内ATP的量来评估细胞免疫，并用于检测移植、肿瘤治疗等患者。 2002年，美国食品与药品管理局批准Cylex公司的Immuknow作为免疫细胞功能检测技术用于临床，这是唯一经FDA批准的细胞免疫功能测定方法，是目前最为快速、成熟的检测免疫功能的方法。其相对MLR、淋巴细胞增殖等传统方法，可以获得更多更加准确的信息[19]，且利用了抗体包被的磁珠，24 h即可作出诊断，特异性，准确性、重复性均很稳定。能快速准确的体现患者整体免疫功能状态。

Immuknow的检测较准确地评价人体的免疫状态，做到科学适量地应用免疫抑制剂，最大程度抑制排斥的发生，尽量减少免疫抑制剂的使用量，同时降低感染和其他不良反应发生的几率，以达到个体化治疗的目的。

通过检测肾脏移植患者术前、术后的CD4+T淋巴细胞内ATP的浓度水平，客观地反映细胞免疫的功能，并讨论其在肾脏移植前后相应的免疫状态的动态变化，评价机体免疫状态，以分析患者术后感染、排斥的发生机率，并且指导合理应用免疫抑制剂。多个移植中心数据显示，Immuknow检测能有效评估同种异体器官移植前后的机体免疫功能状态[4]，并且在一些移植中心依据Immuknow检测结果调整个体治疗方案取得了初步成果[20]。Immuknow检测已经在肝移植中成为一种能够降低和预防感染、排斥发生的有效工具[21]。

目前国内各大移植研究中心越来越重视Immuknow检测在肾移植中的应用，对肾脏移植患者术前、术后的免疫功能进行测定，将术前ATP含量作为基础，动态监测术后ATP的变化，实时监测CD4+T细胞活化程度、经系统分析，建立一种符合中国人及个体化肾移植患者的CD4+T细胞ATP含量的参考范围，更准确的判断患者的免疫移植状态，成为临床肾移植制定和调节免疫治疗方案及预测感染和排斥预警的科学依据。

5 小结

近期通过对我院肾移植患者进行的术前、术后全血的动态检测，取得了一部分可靠的检测结果，基本与文献相符，提示Immuknow检测可以作为临床一个监测移植患者免疫状态的可靠指标。综上所述， Immuknow检测在肾移植免疫监测方面具有一定的指导作用。

作者简介：滕昊林(1985-)，男，硕士，技师，主要从事器官移植组织配型及临床免疫相关检测工作。

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