基质金属蛋白酶－9基因表达与心绞痛病情程度、危险度分层相关性研究

陈义 苏伟

（南京中医药大学附属无锡中医医院，江苏 无锡 214000）

心绞痛是冠心病的常见类型，冠状动脉内易损斑块纤维帽破裂、局部血栓形成是引起心绞痛病情进展的主要发病机制。目前认为斑块纤维帽破裂是由于纤维帽细胞外基质合成和崩解失去平衡的结果，即崩解多于合成。研究发现在正常内膜，细胞外基质（ECM）的合成和降解是平衡的，而在动脉粥样硬化的内膜，特别是易损斑块，基质的降解占优势［1］。基质金属蛋白酶（MMP）特别是基质金属蛋白酶－9（MMP－9），在降解细胞外基质，使斑块纤维帽的崩解和随后的斑块破裂中起重要作用。研究表明，易损斑块局部MMPs主要来源是单核－巨噬细胞，而 MMPs主要成分是 MMP－9［2－3］。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2011年02月至2011年10月本院心血管内科门诊和住院患者125名，其中28名为健康体检者，97名为心绞痛患者。入选者均除外各种急慢性炎症、结缔组织病、肿瘤、风湿性心脏病、肝肾疾病等。稳定型心绞痛诊断标准参照中华医学会心血管病学分会2007年中国慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南，不稳定型心绞痛诊断标准参照2007年中华医学会心血管病学分会不稳定性心绞痛和非ST段抬高心肌梗死诊断与治疗指南。心绞痛分级参照加拿大心血管病学会（CCS）的心绞痛分级，不稳定型心绞痛危险度分层参照ACC/AHA非ST段抬高型ACS危险性分层评判标准。将125名研究对象分为健康体检组28例，稳定型心绞痛组20例，不稳定型心绞痛组77例。入院初对其危险因素进行评估，并对心绞痛组进行严重程度分级、危险度分层。治疗前分别抽晨血，测定MMP－9 mRNA。3组临床资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法 （1）MMP－9基因表达的测定方法。①全血总RNA抽提：取入组者晨空腹血2 mL，经EDTA·Na2抗凝，全血0.3 mL采用3S柱离心式血液总RNA抽提试剂盒（K3620上海博彩生物科技有限公司）抽提RNA，RNA提取物－80℃保存。②MMP－9 mRNA表达水平测定：通过实时荧光定量PCR技术进行相对定量检测。全血总RNA合成cDNA使用TAKARA反转录反应试剂盒（DRR037S大连宝生物工程有限公司）。实时荧光定量PCR反应体系为20 μL，包括2×SYBR®Premix Ex TaqTM，1～100 ng cDNA，50 pmol/μL 引物。两步法PCR循环条件：预变性95℃ 30 s为1个循环，变性95℃ 5 s，退火/延伸60℃ 20 s共40个循环。溶解曲线分析95℃ 1 s，65℃ 15 s，95℃ 1 s。③相对定量分析：采用Light Cycler Relative Quantification（Version1.5）软件，标准化比值计算公式采用2－△△CT法，△CT（患者样本）＝CT目的基因－CT内参基因，△CT（校正品）＝CT目的基因－CT内参基因，△△CT＝△CT（患者样本）－△CT（校正品）。

1.3 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料以（）表示；两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组治疗初期MMP－9基因表达水平比较 见表1。不稳定型心绞痛组MMP－9 mRNA表达水平高于健康体检组、稳定型心绞痛组（P＜0.01）

表1 各组治疗初期MMP－9基因表达水平比较（）

表1 各组治疗初期MMP－9基因表达水平比较（）

与不稳定型心绞痛组比较，△P＜0.01。

2.2 心绞痛不同分级初期MMP－9基因表达水平比较见表2。Ⅳ级患者的MMP－9 mRNA水平明显高于其他各级（P＜0.01）；Ⅲ级 MMP－9 mRNA 水平明显高于Ⅱ级、Ⅰ级（P<0.01）。

表2 心绞痛不同分级间初期MMP－9 mRNA水平比较（）

表2 心绞痛不同分级间初期MMP－9 mRNA水平比较（）

与Ⅳ级比较，*P＜0.01；与Ⅲ级比较，△P＜0.01。

2.3 不同危险度分级初期MMP－9基因表达水平比较见表3。高危患者的MMP－9基因表达水平明显高于中危、低危（P<0.01）。

表3 不同危险度分级初期MMP－9 mRNA水平比较（）

表3 不同危险度分级初期MMP－9 mRNA水平比较（）

与高危比较，*P＜0.01。

3 讨 论

心绞痛病情进展与冠状动脉内粥样硬化斑块的不稳定密切相关，炎症反应是斑块不稳定的重要机制之一，其在斑块发生、演变及破裂过程中起着重要作用，而且研究表明心绞痛，尤其是不稳定型心绞痛的炎症反应并非局限于单个破裂斑块局部，而是遍布全身系统［4］。单核细胞作为炎性细胞中的一种，在心绞痛的发病过程中起着重要作用，研究发现心绞痛患者外周血单核细胞处于活化状态，并且其活化发生于临床症状之前，提示单核细胞活化可能直接参与心绞痛的发病过程［5］。

MMPs是锌离子依赖性蛋白酶家族，其中MMP－9，主要降解Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原、眀胶、纤维连接蛋白等，通过降解斑块纤维帽在心绞痛的发病机制中起关键作用。目前大量研究已证实心绞痛，尤其是不稳定型心绞痛患者外周血MMP－9水平明显增高，而且MMP－9在易损斑块局部表达明显增加，提示MMP－9参与了不稳定斑块的形成。

本研究显示健康体检组、稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组外周血单核细胞MMP－9 mRNA表达水平依次升高，并且随着心绞痛分级升高，单核细胞MMP－9 mRNA表达水平依次升高，其中Ⅳ级＞Ⅲ级、Ⅱ级、Ⅰ级，Ⅲ级＞Ⅱ级、Ⅰ级。由于健康体检组、稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛之间差别在于冠状动脉内粥样硬化斑块的稳定性。稳定型心绞痛患者可能多数不存在易损斑块，MMP－9只是生理水平的表达，故其MMP－9mRNA表达水平与健康体检组差异无显著性［8］。一项基于63列急性冠脉综合征的研究显示［6］，不稳定型心绞痛组血清MMP－9表达水平显著高于正常对照组。同时随着心绞痛分级逐步增加，冠状动脉内粥样硬化斑块的稳定性逐步变差，因此其MMP－9基因表达逐步增加，尤其当心绞痛分级处于Ⅳ级、Ⅲ级时，冠状动脉内粥样硬化斑块尤其不稳定，故其MMP－9表达水平较其他等级明显升高。本研究显示不稳定型心绞痛初期外周血单核细胞MMP－9 mRNA表达水平：高危组＞中危组、低危组，并且差异具有统计学意义。心绞痛低危、中危、高危之间的区别在于冠状动脉内动脉粥样硬化斑块的稳定性，危险度分层越高，冠状动脉内粥样硬化斑块的稳定性越差，则越容易发生心血管事件。郑卫星、罗助荣等［7］对161例冠心病患者研究表明MMP－9高水平组，终点事件的发生率远大于MMP－9低水平组。

因此，治疗初外周血单核细MMP－9mRNA表达增加反映了斑块的活动性，其表达产物MMP－9水平可作为冠状动脉内粥样硬化斑块易损性的标志，并且在心绞痛患者危险度分层上可能是一个重要的生物学指标［8］。

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［7］郑卫星，罗助荣.基质金属蛋白酶－9在冠心病心绞痛患者危险度分层中的作用［J］.中国误诊医学杂志，2008，8（9）：2017－2020.

［8］陈义，吴小庆.基质金属蛋白酶－9在心绞痛分级及危险度分层中的作用［J］.中国医师进修杂志，2011，34（31）：39－40.