盐酸格拉司琼体外抑菌作用的实验研究

殷祖进唐琦峰顾成永黄晓晨

1)江苏昆山市第四人民医院外科 昆山215300 2)苏州明基医院麻醉科 苏州215009 3)苏州市立医院(北区)麻醉科苏州215008

格拉司琼为临床上常用的抗恶心、呕吐药物。该药常与麻醉性镇痛药物合用，用于术后自控镇痛［1］，但自控镇痛的用药时间一般都超过40 h，自控止痛药液最终能否达到无菌，应引起麻醉医师关注。研究表明［2-5］，局麻药利多卡因、布比卡因均具有一定抑菌作用，本研究对比观察了不同浓度格拉司琼对常见菌群生长的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 药品 盐酸格拉司琼注射液(1 mg/mL，苏州长征-欣凯制药有限公司，中国)用无菌生理盐水稀释至最终浓度分别为0.5、0.25、0.125和0.0625 mg/mL，药品无防腐剂，对照组采用无菌生理盐水。本研究采用三种菌株，包括大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、和铜绿假单胞菌。

1.2 菌株 大肠埃希杆菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和铜绿假单胞菌(ATCC27853)。标准菌株均由江苏省临床检验中心提供。

1.3 实验方法 新鲜细菌在大豆酪蛋白胰酶水解物培养基培养18h(达到指数增长阶段终点)后用无菌生理盐水稀释，密度为每McFarland单位，相当于初始浓度约3×108集落生成单位(CFU)/mL(标准接种物)。标准接种物测算方法采用精确计数可培养的细胞数。每标准接种物采用无菌生理盐水连续的10倍的稀释直至达到10-6。稀释后的菌株每10-5和10-6取部分(100μL)单独接种到血琼脂上，在37℃环境下培养24 h后计数。

每20μL标准接种菌大约含5×106CFU，将其分别加入不同浓度980μL的格拉司琼溶液中。对照组采用等量的无菌生理盐水。接着在37℃环境下培养24 h。培养结束后采用稀释法，即每次用生理盐水稀释10倍，即悬浊液每100μL(试验的药物和细菌的混合液)加到900μL无菌生理盐水，连续稀释5次。经上述稀释后的悬浊液每100μL再接种于血琼脂培养基上，在37℃环境下培养24 h后计数菌落数。每个实验重复三遍，所有菌株的稀释的系列测定均进行两次。平均菌落数采用对数log10表示。

1.4 统计学处理 采用两变量方差分析，方差齐性时各实验组培养的细菌平均菌落数分别与对照组平均菌落数比较采用PLSD-Fisher检测方法，方差不齐时，采用2组独立样本的Mann-WhitneyU非参数检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

格拉司琼对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有明显的抑菌作用，格拉司琼对大肠埃希菌的抑菌作用随着格拉司琼浓度的增加而增加，至0.0625 mg/mL时仍有明显的抑菌作用(P＜0.05)。格拉司琼对金黄色葡萄球菌的抑菌作用在格拉司琼浓度为0.125 mg/mL时消失。格拉司琼对铜绿假单胞菌的抑菌作用在格拉司琼浓度为0.125 mg/mL时消失。见表1。

表1 不同浓度的格拉司琼对细菌菌落数的影响

3 讨论

硬膜外感染的发生率较低，但自从患者自控镇痛的应用后，硬膜外感染的发生率有上升趋势，因此研究镇痛相关药物是否具有抑菌作用具有重要的临床意义［6］。手术后患者自控镇痛常用的药物为局部麻醉药和抗恶心、呕吐药物［1］。以往的研究表明局部麻醉药利多卡因、罗哌卡因等均具有抑菌作用，但有关抗恶心、呕吐药物抑菌作用的文献缺未见报道。因此本研究选用临床上最常见的抗恶心、呕吐药物格拉司琼作为研究对象。本研究结果表明，格拉司琼在体外可以抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的生长。

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌广泛存在于人类皮肤表面，常用于院内感染监测，因此我们选用这三种细菌作为观察指标［3］。目前临床上常用的格拉司琼浓度为0.06 mg/mL至0.1 mg/mL，因此我们选择的浓度从原液开始至0.0625 mg/mL。结果表明格拉司琼在体外可以抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的生长。并且有浓度依赖性，随着浓度的增加，抑菌作用逐渐增加。在三种细菌中对大肠埃希菌的抑菌作用最强，在0.0625 mg/mL浓度下也有明显的抑菌作用。

至于格拉司琼抑菌作用的机制目前还不清楚，已有的研究表明［7］，局麻药的抑菌作用是干扰了真核生物和原核生物细胞膜，改变了细胞膜的功能。有报道利多卡因能抑制粒细胞的粘附和化学趋化过程，具有一般的细胞毒性。研究表明［8］，局麻药抑制大肠杆菌的细胞生长，并导致细胞内容物的外流和干扰其呼吸作用。也有研究表明，通过改变细菌细胞外膜的通透性，利多卡因可以引起细菌细胞的去极化。Tanji等用分子生物学手段研究，发现局麻药可抑制细胞内ATP生成，同时诱导产生热休克蛋白［9］。我们推测格拉司琼抑菌作用的机制可能与局麻药抑菌机制相同。格拉司琼对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌在低浓度时没有抑制作用，可能由于这两种细菌可以产生灭活酶及细菌生物被膜使药物难以渗透到细菌体内［10］。

总之，格拉司琼在体外可以抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的生长。在临床常用浓度下，格拉司琼可以明显抑制大肠埃希菌的生长。格拉司琼在体外的抑菌作用对于预防麻醉相关的感染可能有一定的临床意义。

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