CIK细胞的心包腔内灌注在恶性心包积液治疗中的临床研究

熊锐华，田秀荣△，姚红兵，任 庆，唐新云，李金燕，曾丽莎，黄桂君▲

（中国人民解放军第一八一医院：1.肿瘤治疗中心；2.肝胆外科，广西桂林 541002）

恶性心包积液多为恶性肿瘤转移所致，是晚期肿瘤的常见并发症之一。中、大量心包积液属急、危、重症。若不及时治疗可能导致患者死亡。目前治疗恶性心包积液多采用尽量抽尽积液，于心包腔内灌注化疗药物以抑制心包积液生成的方法，但该法存在不良反应重、耐受性差等问题。2009年8月至2011年3月，本院采用心包腔内灌注细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer，CIK）细胞治疗恶性心包积液，取得了满意的疗效，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院经病理学和（或）细胞学证实的恶性心包积液患者45例，其中，男26例，女19例；年龄29～63岁，平均49岁；非小细胞肺癌27例，小细胞肺癌7例，乳腺癌转移6例，消化系统转移3例，B细胞恶性淋巴瘤2例；身体功能状态（Karnofsky′s performance status，KPS）评分均不低于60分。

1.2 分组 将上述病例按治疗方案分为化疗组和CIK组。化疗组22例，其中，男15例，女7例；年龄29～61岁，平均48岁；非小细胞肺癌13例，小细胞肺癌3例，乳腺癌转移4例，消化系统转移2例。CIK组23例，其中，男12例，女11例；年龄30～63岁，平均51岁；非小细胞肺癌14例，小细胞肺癌4例，乳腺癌转移2例，消化系统转移1例，B细胞恶性淋巴瘤2例。两组患者在性别、年龄、病理类型方面的差异无统计学意义（P＞0.05）。所有入组患者治疗前均签署知情同意书，并经医院伦理委员会论证通过。

1.3 CIK细胞的制备 外周血以淋巴细胞分离液分离并收集单个核细胞，以磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS）洗涤3次，将细胞按2×106／mL的密度悬浮于RPMI 1640完全培养基中，加入干扰素γ（interferonγ，IFN-γ）1 000U／mL，于37℃、5%CO2条件下培养。培养24h后加入CD3单抗100ng／mL、白细胞介素2（interleukin 2，IL-2）1 000U／mL继续培养，每隔2～3d分瓶1次，并补充RPMI 1640完全培养基及IL-2。培养10～14d检测无污染后，收集CIK细胞（细胞数约为1×109个），离心，生理盐水洗涤3次，以生理盐水20mL重悬细胞制成CIK细胞悬液。

1.4 CIK细胞的表型及病原学检测 培养第10天，采用流式细胞术检测细胞表面CD3、CD4、CD8、CD56等表面抗原情况，CD3＋CD56＋细胞所占百分比应不低于20%，CD3＋CD8＋不低于40%，并经微生物学检测证实细菌、真菌、支原体、内毒素均为阴性。

1.5 治疗方法 在B超或CT引导下行心包腔穿刺置管引流术，彻底引流心包积液。化疗组患者于心包腔内灌注顺铂（60mg）及地塞米松（5mg），1次／周，连续2～3周；CIK 组患者于心包腔内灌注CIK细胞悬液，每次注入的细胞数约为1×109个，连续3d。灌注药物或CIK细胞悬液后夹管，并嘱患者2h内不断转动体位，以使药物或CIK细胞悬液与心包腔充分接触。化疗组患者还给予止呕、水化、利尿等对症处理；CIK组患者预防性口服“吲哚美辛”。两组患者定期采用彩色多普勒超声仪检测心包积液情况，并复查血常规、肝功能、肾功能。

1.6 疗效评判标准 心包积液的疗效评判按照WHO统一标准，完全缓解（complete remission，CR）：心包积液完全消失，并持续4周以上；部分缓解（partial remission，PR）：心包积液减少不低于50%，并持续4周以上；无变化（no change，NC）：心包积液减少未达到50%或病情进展，将CR＋PR计为有效。

1.7 统计学处理 应用SPSS13.0软件进行统计学分析，采用Mann-Whitney U秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 疗效的比较 化疗组及CIK组心包积液患者治疗的有效率分别为81.8%（18／22）、95.6%（22／23）。CIK 组患者的疗效优于化疗组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组心包积液患者疗效的比较

2.2 不良反应的比较 化疗组患者存在骨髓抑制、胃肠道反应、肝功能及肾功能损害等不良反应；而CIK组患者的上述不良反应均未发生，CIK组患者白细胞减少及胃肠道反应的发生率明显低于化疗组（P＜0.05）。CIK组有3例患者出现中、低度发热，体温最高达38.3℃，均在2～3h后自行缓解，不影响治疗的继续进行。

表2 两组患者不良反应的比较

续表2 两组患者不良反应的比较

3 讨 论

恶性心包积液临床上很常见，约10%～20%的恶性肿瘤患者并发恶性心包积液［1-2］，常因恶性肿瘤转移所致，以肺癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤等最为常见［3］，其中肺癌、乳腺癌所致恶性心包积液的发生率占其总发生率的60%～75%［4］。心包积液患者多以心包填塞症状为首发，如呼吸困难、疲劳、乏力、咳嗽、端坐呼吸等，严重者可出现心力衰竭、心音遥远、奇脉等方面的症状及体征。若不及时处理，患者多死于心包填塞。因此，恶性心包积液，尤其是中、大量心包积液需积极治疗。

目前对恶性心包积液处理中最常用的方法是彻底引流心包积液，然后向心包腔内灌注化疗药物（顺铂最常用）行腔内化疗，有效率在80%左右［5-6］。但由于化疗药物的不良反应，限制了其临床应用，尤其是一般状况较差、无法耐受化疗的患者。

随着肿瘤免疫治疗技术的发展，逐渐出现了采用淋巴因子激活的杀伤（lymphokine activated killer，LAK）细胞、肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）及CIK细胞等进行过继性免疫治疗的方法，这种方法以杀伤活性高、抗癌谱广、不良反应小、患者易耐受等特点逐渐被医务工作者和患者接受，并广泛应用于临床。国外学者曾将TIL向心包腔内灌注用于恶性心包积液的治疗［7］。目前国内尚未见CIK细胞心包腔灌注治疗恶性心包积液的报道，笔者曾将CIK细胞悬液行胸腔内灌注治疗恶性胸腔积液，疗效显著［8］。

基于上述研究，笔者将CIK细胞悬液于心包腔内灌注治疗恶性心包积液，同时以心包腔内灌注顺铂为对照。研究结果显示，CIK心包腔灌注的疗效优于顺铂心包腔灌注，分析其原因，除了CIK细胞具有较好的抗肿瘤活性外，还可能与CIK细胞的连续灌注使疗效得到增强有关，而采用化疗药物心包腔灌注的治疗间隔需1周。在不良反应方面，接受CIK细胞心包腔灌注治疗的患者除个别出现一过性中、低度发热外，未发现其他不良反应，而采用顺铂心包腔灌注化疗的患者均出现了一定程度的骨髓抑制、胃肠道反应及肝、肾功能损伤等不良反应，CIK组患者白细胞减少及胃肠道反应的发生率明显低于化疗组（P＜0.05），提示CIK细胞心包腔灌注的不良反应程度低于顺铂心包腔灌注化疗，患者能更好地耐受，尤其对于一般情况差或本身有贫血，白细胞、血小板下降或肝、肾功能障碍而无法耐受化疗或其他高强度治疗的恶性心包积液患者，CIK细胞心包腔灌注治疗对他们来说是最佳选择。本研究中CIK细胞心包腔灌注治疗恶性心包积液的疗效优于笔者既往报道的采用CIK细胞胸腔灌注治疗恶性胸腔积液的疗效，这可能与心包腔容积较胸腔容积小、CIK细胞的治疗浓度更高、抗肿瘤活性更强有关。通过有效控制心包腔积液，大大改善了患者的生存质量，延长了患者的生存期，更重要的是，为后续的抗肿瘤治疗创造了条件。同时，笔者也曾尝试CIK细胞腹腔灌注治疗恶性腹腔积液，但效果不理想，这可能与恶性腹腔积液形成原因及腹腔环境更复杂、腹膜腔面积和容积大、CIK细胞无法达到有效的治疗浓度有关。

总之，CIK细胞心包腔内灌注是一种疗效好、不良反应小、安全性高的治疗方法，值得在恶性心包积液的治疗中推广引用。

［1］Skhvatsabaja LV.Secondary malignant lesions of the heart and pericardium in neoplastic disease［J］.Oncology，1986，43（2）：103-106.

［2］DeCamp MM Jr，Mentzer SJ，Swanson SJ，et al.Malignant effusive disease of the pleura and pericardium［J］.Chest，1997，112（4Suppl）：S291-295.

［3］于世英.临床肿瘤学［M］.北京：科学出版社，2006.

［4］孙燕，石远凯.临床肿瘤内科手册［M］.北京：人民卫生出版社，2010.

［5］韩灵敏，杜利力，宋华.恶性心包积液腔内顺铂化疗疗效的临床观察［J］.吉林医学，2011，32（12）：2415-2416.

［6］何仲琴，高宁梅.心包腔内置入中心静脉导管治疗恶性心包积液51例临床观察［J］.现代肿瘤医学，2008，16（12）：2104-2106.

［7］Toh U，Fujii T，Seki N，et al.Characterization of IL-2-activated TILs and their use in intrapericardial immunotherapy in malignant pericardial effusion［J］.Cancer Immunol Immunother，2006，55（10）：1219-1227.

［8］熊锐华，田秀荣，伍靖武，等.CIK细胞治疗恶性胸腔积液的临床研究［J］.肿瘤，2010，30（11）：973-975.