老年骨肉瘤患者术后组织中VEGF、WTX和PTEN的表达及意义

黄 山 黄 帆 遇呈祥 晏铮剑 邓忠良 (重庆医科大学第二附属医院骨科，重庆 400010)

骨肉瘤在老年人病变中的特点与青少年不同，可能与老年人伴有退行性改变及骨质疏松有关，因此骨肉瘤病变进展时体内的蛋白表达亦可能有差别。骨肉瘤病变进展时体内多种蛋白异常表达，尤其与原癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。WTX基因是一种抑癌基因，由于X染色体定位的特殊性，因此抑癌的特异性强〔1〕。PTEN是抑癌基因，可以明显抑制肿瘤增殖及浸润。血管内皮生长因子(VEGF)是血管内皮细胞生成的促进因子，可以介导肿瘤血管新生，并对肿瘤进展有重要促进作用。近来也有研究显示VEGF是一种重要的癌基因〔2〕。本文关注VEGF、WTX和PTEN在老年骨肉瘤患者组织中的表达，关注其相关性及在不同临床特征中的表达差别。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2011年1月至2011年12月我院确诊为骨肉瘤的老年患者作为观察组，共62例，男32例，女30例，年龄60～78(平均67.6)岁。均经病理学主治医师确诊，并按WHO中关于骨肿瘤的标准进行分类。选择同期在我院行骨样骨瘤切除的老年人术后组织40例作为对照组，男20例，女20例，年龄60～77(平均67.9)岁。两组在一般临床特征的比较中，差别无统计学意义。

1.2 VEGF、WTX和PTEN蛋白检测 VEGF、WTX和PTEN蛋白均购自武汉博士德生物技术公司，三种蛋白的检测应用免疫组化SP法，常规组织取材并经脱钙后进行检测，应用DAB进行显色，均由同一病理技师操作，减少人为误差，严格质量控制。

1.3 结果判定标准 VEGF、WTX和PTEN蛋白均以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，随机选择10个高倍视野，计数阳性细胞的百分率，以阳性细胞的百分率≥25%为阳性，以阳性细胞的百分率＜25%为阴性。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12软件进行χ2检验及相关分析。

2 结果

2.1 VEGF、WTX和PTEN在观察组与对照组中表达的比较VEGF在观察组中表达的阳性率明显高于对照组，WTX和PTEN在观察组中表达的阳性率明显低于对照组(P＜0.000 1)。见表1。

2.2 观察组中VEGF、WTX和PTEN的表达在不同临床病理特征中的关系 观察组中VEGF、WTX和PTEN蛋白表达的阳性率与肿瘤的转移、最大直径、脉管浸润、临床分期及Ki67的表达密切相关。见表2。

2.3 观察组中VEGF、WTX和PTEN表达的相关性分析 观察组中VEGF和WTX(r=-0.43，P=0.011 3)、VEGF和PTEN(r=-0.48，P=0.028 7)的表达具有负相关性，而 WTX和PTEN(r=0.40，P=0.034 1)的表达具有正相关性。

表1 VEGF、WTX和PTEN在观察组与对照组中阳性表达的比较［n(%)］

表2 观察组中VEGF、WTX和PTEN的阳性表达在不同临床病理特征中的关系〔n(%)〕

3 讨论

骨肉瘤在病变进展中出现蛋白表达的失常，尤其是癌基因和抑癌基因的失调有重要意义。VEGF是血管内皮细胞生成的促进因子，高表达于多种恶性肿瘤，且肿瘤恶性程度越高，其表达越高，因此其起作用的方式与癌基因相似。VEGF对血管生成的促进作用表现为多种方面，主要是对基质中CD34、CD31、CD105阳性的血管〔3〕，肿瘤间质血管生成多，使肿瘤的营养丰富，氧供丰富，肿瘤生成和代谢快，侵袭能力增加，转移潜能增强〔4〕。PTEN是由多功能磷酸酶编码的肿瘤抑制基因，不仅具有磷酸酯酶的活性，还具有多种肿瘤生物学的作用特征。PTEN的C端尾部含有富含丝/苏氨酸残基的PEST序列和一个PDZ结合区域，如果这个区域出现明显的突变则可以逆转抑癌基因的特点，进而影响突变体的稳定性和磷酸酯酶的活性，分子结构也将发生明显的变化〔5〕。但是PTEN也与其他的磷酸酯酶不完全相同，主要是PTEN没有调节的亚基，因此其表达及协同性具有特异性，PTEN也因此种结构的特点倍受学者的广泛关注〔6〕。研究显示WTX蛋白能够与APC、AXIN1和Keap1等形成复合物，并且能与细胞质中的β-catenin结合而使其降解，进而抑制信号转导〔7，8〕。WTX可以通过与WT1结合来促进WT1介导的内源性靶基因双调蛋白的转录，进而在细胞分化的核转录调控通路中发挥作用〔9〕。

本实验提示VEGF高表达、WTX和PTEN低表达促进肿瘤的发生，此机制与VEGF作为癌基因的作用相同，与WTX和PTEN作为抑癌基因的作用相同。WTX基因在肾母细胞瘤中异常表达率明显增高，而在白血病、肝细胞癌、胃癌、结直肠癌等肿瘤中异常表达率明显降低〔1〕，骨肉瘤是WTX表达异常的重要肿瘤之一，其低表达时对骨肉瘤发生具有独特的生物学作用。本实验提示VEGF、WTX和PTEN参与了肿瘤的进展，主要是当VEGF、WTX和PTEN异常表达时促进肿瘤的生长、增殖和脉管浸润;也提示联合检测VEGF、WTX和PTEN的表达可能与预后有一定关系。三种蛋白可能具有通路作用，由于PTEN和WTX高表达时均可以抑制肿瘤的血管生成，因此WTX和PTEN的协同作用可能与VEGF密切相关，即VEGF、WTX和PTEN的协同作用是通过血管的生成联系在一起的。WTX和PTEN具有抑制血管新生的作用，可以通过降低内皮细胞的迁移能力、增加血管内皮生长的抑制因子作用(如血小板反应蛋白)进而减少肿瘤的血管新生〔10〕。

1 李思齐，张 毅，梁道明，等.抑癌基因WTX在结肠癌中的表达及其意义〔J〕.中国普通外科杂志，2012;21(10):1217-21.

2 贺荣芳，胡忠良，沈 明，等.胃癌组织中PTEN、VEGF、MMP-9的表达及相关性研究〔J〕.中国普通外科杂志，2005;14(3):173-7.

3 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(4):886-7.

4 陈述伟，杨述华，张劲松，等.PTEN、MMP-7、VEGF在骨巨细胞瘤中的表达〔J〕.肿瘤防治研究，2007;34(4):290-2.

5 魏法才，陈 启，杨道贵，等.胃癌组织中PTEN和VEGF的表达及其相关性〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2007;14(8):601-3.

6 包健荣，姚卫康.PTEN、VEGF、BCL-2在大肠癌中的表达及相关性研究〔J〕.中国现代医药杂志，2012;14(5):34-5.

7 张庆玲，于莉娜，丁彦青.新抑癌基因WTX在肾肿瘤中的表达及意义〔J〕.广东医学，2011;32(10):1253-5.

8 朱水山，龚 辉，郭宏兴，等.WTX基因:第一个位于X染色体上的肾母细胞瘤抑癌基因〔J〕.中国病理生理杂志，2009;25(1):194-6.

9 覃 创，陈嘉勇，梁道明.WTX基因在肿瘤中的研究进展〔J〕.重庆医学，2012;41(5):502-3.

10 叶晓锋，高 平，韩恩善，等.MMP-2、VEGF和PTEN的表达与食管鳞癌浸润转移的关系〔J〕.宁夏医科大学学报，2012;34(4):326-8.