注射用盐酸头孢替安无菌检查方法的建立及验证

贺爱玲

注射用盐酸头孢替安为第二代头孢菌素类抗生素, 其抗菌作用机理是阻碍细菌细胞壁的合成。它对革兰阴性菌和阳性菌均具有广泛的抗菌作用。本文通过多次验证试验, 对无菌检查中的冲洗液和冲洗量进行了考察, 建立了适宜的检查方法。

1 试验材料

1.1 试验样品 注射用盐酸头孢替安(上海新先锋药业有限公司 , 规格 0.5 g)

1.2 试验菌株 金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］、铜绿假单胞菌CMCC(B)10104］、生孢梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］ 均购于中国食品药品检定研究院。

1.3 试药 营养肉汤培养基(100915)、营养琼脂培养基(110331)、玫瑰红钠琼脂培养基(1111072)、硫乙醇酸盐流体培养基(101118)、改良马丁液体培养基(120515)均购于中国食品药品检定研究院。

1.4 仪器 HTY-2000A型集菌仪、高压蒸汽灭菌器、净化间、净化台、生化培养箱。

2 方法

2.1 菌液制备 取经35 ℃培养18 h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜肉汤培养物, 用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍递增稀释, 使菌数约为50～100 cfu·ml-1。取经35 ℃培养24 h的生孢梭菌的新鲜液体培养物, 用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍递增稀释, 使菌数约为 50～100 cfu·ml-1。

取经25 ℃培养24 h的白色念珠菌的新鲜液体培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍递增稀释, 使菌数约为50～100 cfu·ml-1。

取经 25 ℃培养 5 d 的黑曲霉的琼脂斜面培养物 , 加 3～5 ml0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子, 用0.9%无菌氯化钠溶液进行 10 倍递增稀释 , 使孢子数约为 50～100 cfu·ml-1［1］。

2.2 方法 试验组 取一次性全封闭三联集菌器, 先用少量0.9%无菌氯化钠溶液将膜润湿, 取15支样品, 注入200 mL 0.9%无菌氯化钠溶液, 充分溶解后, 全量过滤, 再用pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液边振摇边冲洗, 每桶的冲洗量为500 mL, 每次 100 mL, 在最后一次冲洗时加入试验菌 , 过滤 , 然后加入相应的培养基, 作为试验组, 6种试验菌同法操作。

阳性对照组 取一次性全封闭三联集菌器, 注入相应的培养基, 然后分别加入各试验菌。

阴性对照组 取一次性全封闭两联集菌器 , 用 pH 7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液边振摇边冲洗, 每桶的冲洗量为500 mL, 每次100 mL, 然后将相应的培养基加入到滤筒内。

盛有硫乙醇酸盐流体培养基的培养器置于35 ℃培养5 d；盛有改良马丁液体培养基的培养器置于25 ℃培养5 d, 观察各试验菌生长情况, 结果见表1(表中“+”表示有菌生长,“-”表示未见菌生长, 表2同)。

表1 验证试验各菌生长情况

3 结果

以此试验方法, 试验组各试验菌均生长良好。因此, 注射用盐酸头孢替安的无菌检查法为：先用少量0.9%无菌氯化钠溶液将膜润湿, 取规定量供试品, 注入200 mL0.9%无菌氯化钠溶液, 充分溶解后全量过滤, 冲洗液为pH 7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液, 冲洗量为每膜500 mL, 阳性对照菌选用大肠埃希菌, 同时进行阴性对照试验, 按照2010年版二部中国药 典要求进行培养, 结果见表2。

表2 注射用盐酸头孢替安无菌检查试验结果

［1］ 国家药典委员会.中国药典(二部). 北京：化学工业出版社,2010：附录 107- 116.