于书海 ,王 军 ,何 文
(1.河南省人民医院药学部,河南 郑州 450003;2.武汉大学人民医院药学部,湖北 武汉 430060)
口腔溃疡发病率较高,病情易反复,而常用的溶液剂、膏剂、糊剂、散剂等均存在口腔黏膜滞留性不理想的缺点,影响治疗效果。口腔黏附片利用生物黏附性高分子材料的特性,可较长时间地黏附于口腔黏膜,发挥长效、高效的作用[1]。乙酰螺旋霉素为临床应用较多的十六碳大环内酯类抗生素,体内外抗菌效果均优于螺旋霉素,并对黏膜炎症有较好的疗效[2]。本试验前期主要对乙酰螺旋霉素口腔黏附片的处方进行初步研究[3],现拟在进一步完善其处方的基础上,对不同处方的乙酰螺旋霉素口腔黏附片的性质作全面考察,为临床治疗口腔溃疡提供一种长效、高效的新制剂奠定基础。
单冲压片机(上海天翔健台制药机械有限公司);UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津);BY-300A型片剂硬度计(上海黄海药检仪器有限公司);黏附力测定装置(自制);ZRS-8型智能溶出仪(天津大学无线电厂)。乙酰螺旋霉素原料药(广州白云山制药有限公司,批号111212);乙酰螺旋霉素对照品(中国食品药品检定所,批号110222);卡波姆934P(美国BFGoodrich公司,批号20050630);羟丙甲茎纤维素(HPMC,K4M,美国Colorco公司,批号20110611);硬脂酸镁(亳州华元药用辅料有限公司,批号20110414);阿斯巴甜(常州市牛塘化工厂有限公司,批号20110315);二氧化硅(郑州瑞恒化工产品有限公司,批号20110129);甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
依据预试验结果,固定润滑剂及矫味剂的用量,重点考察黏附剂的比例,设计了5种处方,见表1。乙酰螺旋霉素口腔黏附片每片总重为25 mg,其中主药含量5 mg,硬脂酸镁、二氧化硅各0.25 mg,阿斯巴甜为 0.5mg。取主药,研细过 80 目筛,其他辅料均过60目筛,混匀后,粉末直接用压片法制备。所得片剂直径4mm,厚度 1mm,硬度 4 kg。
表1 乙酰螺旋霉素口腔黏附片的黏附剂组成(mg/片)
采用一阶导数法进行测定[4-5]。精密称取干燥至恒重的乙酰螺旋霉素对照品25mg,置50mL容量瓶中,用人工唾液(2.38 g NaH2PO4,0.19 g KH2PO4,0.8 g NaCl溶于 1 000mL 水中)溶解,并定容,摇匀,即得乙酰螺旋霉素的对照品贮备液。精密吸取贮备液2mL,置100mL容量瓶中,用人工唾液定容,摇匀。用人工唾液作空白对照溶液,在200~400 nm波长范围内做紫外扫描,结果表明,乙酰螺旋霉素在233 nm处有最大吸收。按处方量精密称取各辅料,同上述方法操作并测定,结果表明,辅料对主药的测定有干扰。采用一阶导数处理后,乙酰螺旋霉素在220~250 nm波长间的峰谷具有最大振幅(D),而辅料无明显振幅,不干扰主药的测定,故确定测定振幅 D作为主药含量的测定方法,见图1。
精密吸取乙酰螺旋霉素对照品贮备液 0.1,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL 置 100mL 容量瓶中,用人工唾液定容,摇匀。以人工唾液为空白对照,以振幅 D对质量浓度 C作标准曲线,得回归方程 D=0.340C+0.057(r=0.999 7),说明对照品贮备液质量浓度在0.5~30μg/mL范围内与振幅线性关系良好。精密吸取乙酰螺旋霉素对照品贮备液 1.0,3.0,5.0 mL,置100mL容量瓶中,按处方比例加入各辅料,用人工唾液充分溶解,摇匀。以人工唾液为空白,测定过滤液的 D,计算回收率。结果低、中、高 3种质量浓度的回收率分别为(99.39±0.20)%,(99.55±0.12)% ,(99.42±0.26)%;取 30 μg/mL 的样品,1 d内重复测定5次,连续测定5 d,结果日内 RSD为0.24%,日间RSD 为 0.32%。
图1 乙酰螺旋霉素对照品及其他辅料的紫外扫描图
将F1~F5黏附片黏附于塑料背衬上,垂直放入37℃人工唾液中,分别于 30,60,90,120,150min 时取出称片重,膨胀率为溶胀后的片重与溶胀前的片重之比,以膨胀率对时间作图,结果见图2。可见,各处方在1 h时基本达到最大膨胀率,且随着处方中卡波姆934P用量的增加,膨胀率逐渐增大。
图2 F1~F5各黏附片的体外膨胀率-时间曲线
参考贴膏剂的初黏力测定法[7],采用斜坡滚球测定。将不同型号的不锈钢球(球号及规格均符合药典规定)从固定于倾斜板上的黏附片(片上滴加10μL水,涂抹均匀后15 s测定)的黏性面滚过,根据供试品黏性面能够粘住的最大球号评价其初黏性的大小。取F1~F5各黏附片各3片,应有2片或2片以上能粘住钢球;如有1片不能粘住,再取较小一号的钢球进行试验,应均能粘住;如果只有1片能粘住钢球,而另2片只能粘住较小一号的钢球,则应另取3片复试,3片均应能粘住较小一号的钢球。测定结果显示,F1及F5可黏附2号钢球,F2及F4可黏附3号钢球,而F3可黏附4号钢球,表明F3处方制备的乙酰螺旋霉素口腔黏附片体外黏附性最佳。
将处方F1~F5黏附片按小杯桨法进行试验。人工唾液100mL为释放介质,温度 37 ℃ ,转速 100 r/min,分别于 0.5,1,2,4,6,8,10 h时定时取样5mL,过滤,同时立即补加等量等温的新鲜释放介质。取出的样品过滤后测定 D值,计算累积释放率 Q(%),并将结果进行方程拟合,结果见图3和表2。表明各处方的黏附片体外释药均有一定的缓释作用,符合Higuchi方程;HPMC和卡波姆934P合用时,缓释效果比单用卡波姆934P显著,且随着HPMC含量的增加,药物的释放逐渐减慢。
图3 各处方样品累积释放率-时间曲线
表2 各处方样品的Higuchi方程
对各处方黏附片在健康志愿者口腔颊部的滞留时间进行初步考察(所涉及的体内试验已获得医院伦理委员会通过),结果滞留时间分别为 F1 102min,F2 128min,F3 148min,F4 122min,F5 99min。可见,F3在口腔中的滞留时间最长,与体外黏附力考察结果一致。
试制样品采用卡波姆与HPMC两种黏合剂,体外黏附性及口腔滞留性均优于两者单用,且以1∶1比例时最佳,此时黏附性及缓释性均满足要求;处方中硬脂酸镁、二氧化硅为润滑剂,阿斯巴甜为矫味剂。本品采用粉末直接压片法制备,片剂质量理想,且避免了卡波姆吸湿性强而制粒困难的问题。试制样品的体外释药速度与两种黏附剂的用量有关,随着HPMC用量的增加,释药速度减慢,说明HPMC与卡波姆相比,缓释效果更好。而体外膨胀率测定结果表明,卡波姆的膨胀性比HPMC大,更有利于药物的释放,进一步证实了体外释药特点。口腔贴片的黏附力大小直接影响制剂在口腔中的滞留时间,从而影响药效。本研究结果显示,处方F3即以卡波姆934P与HPMC配比为1∶1时为最优处方,药效学研究有待进一步进行。
[1]叶冬梅,池泮才,林红坚.粘膜给药新剂型——生物粘附片的研究开发[J].中国药房,2002,13(10):624 -626.
[2]方达任,高秀珍,陈学兵.乙酰螺旋霉素口腔糊剂的研制[J].中国药师,2005,8(11):933 -934.
[3]王 军.乙酰螺旋霉素口腔贴片的研制及体外释药的考察[J].中国药师,2006,9(11):1 024-1 025.
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[5]罗功才.一阶导数光谱法测定乙酞螺旋霉素胶囊中乙酞螺旋霉素含量[J].中国药业,2006,15(9):35 -36.
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[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:附录74.