高效液相色谱法测定复方甘草搽剂中甘草酸含量

曹阳虎，郑江萍，黄良永

(1.湖北江汉油田总医院，湖北 潜江 433124;2.湖北医药学院附属太和医院药学部，湖北 十堰 442000)

复方甘草搽剂由甘草流浸膏、甘油、乙醇等组方，是外用中药医院制剂(批准文号为鄂药制字Z20110958)，主要有消炎止痒作用，外搽患处，用于治疗皮肤干燥、瘙痒。高浓度甘草流浸膏具有抗真菌作用[1]，是处方的主要有效成分，原质量标准中只有甘草成分的鉴别试验，没有含量测定方法。为了控制本制剂的质量，笔者以甘草的主要成分甘草酸为定量指标，参考相关文献[2－5]建立了测定甘草酸的高效液相色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

Dionex Ultimate3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司，低压四元梯度泵、自动进样器、多波长紫外检测器、柱温箱);变色龙色谱工作站(美国戴安公司);UP5200H型超声清洗机(熊猫集团电子计量有限公司);AUW120D型电子分析天平(十万分之一，日本岛津公司);GWA－UN超纯水机(北京普析通用公司)。甲醇为色谱纯(美国天地公司);水为超纯水;甘草酸铵对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110731－201116，含量93.1%);复方甘草搽剂(本院制剂室生产，批号为20120215，20120308，20120329)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Cosmosil C18柱(美国 Waters公司，250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －0.2 mol/L 醋酸铵 － 冰醋酸(65 ∶35 ∶1);柱温:30℃;流速:1 mL/min;进样量:10 μL;检测波长:241 nm;甘草酸与其他成分分离度好，理论板数以甘草酸峰计应不低于5 500。

2.2 溶液制备

精密称取甘草酸铵对照品57.0 mg(含量93.1%，1 mg甘草酸铵折合甘草酸0.979 5 mg)，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得对照品贮备液(含甘草酸1.039 6 mg/mL);精密量取对照品贮备液2 mL，用甲醇稀释至10 mL，即得对照品溶液(以甘草酸计质量浓度为 207.92 μg/mL)。取复方甘草搽剂(100 mL/瓶)，振摇均匀，精密量取10 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声处理5 min(功率300 W，频率40 kHz)，放冷至室温，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量制备缺甘草流浸膏的搽剂，依照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.2项下3种溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下，复方甘草搽剂的供试品溶液和对照品溶液的甘草酸峰保留时间一致，理论板数以甘草酸峰计为5 500，而且阴性对照品溶液对测定无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密量取甘草酸对照品贮备液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定量稀释成含甘草酸 10.40，20.79，51.98，103.96，207.92，519.79，1 039.60 μg/mL 的系列对照品溶液，精密取 10 μL，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标(Y)、对照品质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，得标准曲线方程 Y=0.145 5 X－0.013 6，r2=1(n=7)。结果表明，甘草酸质量浓度在 10.40 ～ 1 039.58 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液(207.92 μg/mL)10 μL，在拟订色谱条件下连续自动进样5次。结果甘草酸峰面积的 RSD为0.04%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批号(批号为20120329)的样品，依法制备5份供试品溶液，按拟订色谱条件测定色谱峰面积，代入线性方程计算含量。结果甘草酸的平均含量为122.20 μg/mL，RSD为0.74%(n=5)，表明方法重现性好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，在室温下放置1，8，16，24，48，72 h，分别测定。结果甘草酸峰面积的 RSD为0.33%(n=6)，表明供试品溶液在72 h内稳定。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品(批号为20120329)2，5，10 mL各2份，按高中低浓度精密加入甘草酸对照品溶液1，3，6 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 甘草酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，在拟订色谱条件下，取对照品溶液(207.92 μg/mL)和供试品溶液各 10 μL，进样测定峰面积，以外标法计算含量。结果批号为20120215，20120308，20120329的3 批甘草酸样品含量分别为 612.10，611.42，611.04 μg/mL。

3 讨论

经试验，采用甲醇－0.2 mol/L醋酸铵－冰醋酸(65∶35∶1)流动相替代2010年版《中国药典(一部)》“甘草流浸膏”项下的流动相[2]，甘草酸的峰分离度好，可排除其他杂质的干扰。所建立的甘草酸含量测定方法操作简单，回收率高，可用于本制剂的质量控制。

依照中国药典规定，甘草流浸膏中含甘草酸不得少于1.8%(g/mL)，结合甘草流浸膏在本制剂处方中的用量为3%(体积分数)，考虑样品含量测定结果，建议暂订本制剂的含量以甘草酸计应不得低于0.58 g/L。

[1]徐林霞，武延隽.甘草流浸膏抗真菌作用的实验研究[J].长治医学院学报，2009，23(1):11－13.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:376.

[3]刘 源.高效液相色谱法测定利肺片中甘草酸含量[J].中国药业，2012，21(1):27 －28.

[4]王丽琼.反相高效液相色谱法测定甘草浸膏中甘草酸和甘草苷含量[J].中国药业，2009，18(17):16－17.

[5]杨 辉.甘草及其制剂中甘草酸含量测定研究进展 [J].中国药业，2008，17(10):73 －74.