HPLC 测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸含量

黄依玲

广西壮族自治区南宁食品药品检验所，广西 南宁 530001

夏桑菊颗粒收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册，由夏枯草、桑叶、菊花等3味药材组成，具有清肝明目，疏风散热，除湿痹，解疮毒的功效，临床用于治疗风热感冒，目赤头痛，高血压，头晕耳鸣，咽喉肿痛，疔疮肿毒等症。方中夏枯草为君药，具有清肝泻火，明目，散结消肿的功效。该制剂标准中无含量测定项目[1]，为了更好地控制产品质量，本实验选用处方中君药夏枯草中主要成分迷迭香酸作为指标性成分，参照《中国药典》2010年版一部夏枯草项下迷迭香酸的测定方法[2]，建立高效液相色谱法测定本品中迷迭香酸的含量，为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

美国Agilent 1200高效液相色谱仪;KQ－300型超声波清洗器;迷迭香酸对照品 (批号:111871－201102，购自中国食品药品检定研究院，);不同厂家不同批号的夏桑菊颗粒均购自南宁市各零售药店;乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm);流动相:乙腈 －0.1%磷酸 (20∶80);检测波长:330 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:30℃;进样量:10μl，在此条件下，迷迭香酸峰与邻峰基线分离。取除夏枯草外的其他几味药材同法制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法同法制成阴性样品溶液，阴性样品溶液无干扰 (见图1)。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的迷迭香酸对照品10.18mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.2036mg/ml对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml置15ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，避光保存。

2.3 供试品溶液的制备 取夏桑菊颗粒适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇15ml，称定重量，超声处理30min(功率300W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜 (0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下对照品储备溶液0.5、1、2、4、6、8、10ml，分别置 15ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。分取上述不同浓度对照品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积的积分数值为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，回归方程:Y=2139X－37.8，r=0.9998(n=6)，说明迷迭香酸进样量在0.068～1.357μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，测定迷迭香酸的峰面积，其RSD为1.08%(n=6)。

2.6 稳定性试验 取批号20120210的供试品溶液，按供试品测定方法分别在0、2、4、6、8、10、12、24h进样测定，结果8次进样迷迭香酸峰面积的RSD=1.27%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验 取广州G药业股份有限公司，批号20120210的夏桑菊颗粒，精密称取6份，制备供试品溶液，并依法测定迷迭香酸峰面积，计算其平均含量为0.53 mg/g，RSD为0.87%。

2.8 加样回收率试验 取同一批供试品 (批号:20120210)9份，每份精密称取1g，分别精密加入一定量的迷迭香酸对照品，照“2.3”项下方法制得供试品溶液，进样测定，计算回收率。迷迭香酸平均回收率为99.15%，RSD=1.4%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果 (n=9)

2.9 样品含量测定 将夏桑菊颗粒的不同批号样品，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，进样测定，按外标法计算迷迭香酸的含量，结果见表2。

表2 夏桑菊颗粒含量测定结果 (n=3)

生产厂家 批号 含量 (mg·g－1)RSD(%)20110925 0.16 0.96广州G药业股份有限公司 20120210 0.53 0.87 20120315 0.54 0.88南宁市H制药有限公司 120215 0.17 0.98 120408 0.17 1.13广西I药业有限公司 120105 0.08 1.25 120212 0.09 0.69广西J制药有限公司 110903 0.07 0.87 111021 0.07 1.06

3 讨论

3.1 夏桑菊颗粒的质量标准中无含量测定项目，对夏桑菊颗粒质量标准的研究，分别有测定熊果酸、绿原酸、蒙花苷的含量[3～5]，但对迷迭香酸的含量测定未见有报道。本实验采用高效液相色谱法测定迷迭香酸的含量[6～8]，结果稳定、准确可靠，可为夏桑菊颗粒进一步制定质量标准提供参考依据。

3.2 迷迭香酸对照品溶液在自然光下稳定性较差，易产生分解，因此操作中应注意闭光，选择采用棕色量瓶。

3.3 按照《中国药典》2010年版一部的方法进行试验，发现流动相甲醇－0.1%三氟乙酸溶液 (42:58)并不适合夏桑菊颗粒。另考察了多个流动相系统，如甲醇－0.2%甲酸 (40:60)、甲醇－0.1%磷酸 (40:60)、乙腈－0.1%磷酸 (20:80)等，最后选择乙腈－0.1%磷酸 (20:80)作为流动相，出峰时间适当。同时还考察不同色谱柱，如phenomenex Gemini C18(4.6mm×250 mm，5μm)、Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm)、Diamonsil C18(4.6mm×250 mm，5μm)等，最后选择Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250 mm，5μm)作为色谱柱，结果迷迭香酸色谱峰的对称性和分离度均较好。

3.4 在实验过程中采用稀乙醇、甲醇、50%甲醇溶液和70%甲醇溶液同法处理样品，结果表明50%甲醇溶液提取迷迭香酸的含量最高。同时考察超声处理及回流提取法，结果表明，两种提取方法迷迭香酸的含量差异性不大，考虑到实验上操作方便，故采用超声法处理样品。

3.5 实验测定了不同厂家不同批号的夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量，实验结果表明，不同厂家生产的夏桑菊颗粒，迷迭香酸的含量相差较大，建议通过测定迷迭香酸的含量来控制夏桑菊颗粒的质量。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第15册 [S].1997:164.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [M].北京:中国医药科技出版社，2010:263.

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