真姬菇菌糠提取液对5种食用菌的化感作用*

李 挺，宋 斌，林 敏，沈亚恒

(广东省微生物研究所，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物应用新技术公共实验室，广东省华南应用微生物重点实验室－省部共建国家重点实验室培育基地，广东 广州 510070)

真姬菇（Hypsizygus marmoreus）又名蟹味菇、海鲜菇、斑玉蕈、假松茸等，其肉厚质嫩、味纯鲜香，且具有较高的食用保健价值，获得了越来越多消费者的青睐，市场前景广阔，工厂化生产规模不断扩大[1，2]。至2008年止，中国的真姬菇年产量已达到10585 t，在食用菌工厂化生产品种中，其产量仅次于金针菇和杏鲍菇[3]，按生物学效率为60%计算，中国的真姬菇产业每年至少产生约6351 t的真姬菇菌糠。真姬菇培养基料主要是由木屑、棉籽壳、玉米芯等物质组成，经过真姬菇工厂化栽培后，它们当中仍含有较多的纤维素、半纤维素、木质素、菌丝残体蛋白、脂肪、氨基酸、矿物质以及一些次生代谢产物[3，4]，具有作为食用菌栽培新原料再利用的潜力[4－6]。但由于食用菌菌糠中可能存在着化感物质（主要是一些次生代谢产物），导致食用菌之间存在的化感作用（Allelopathy），从而促进或抑制食用菌菌丝体或子实体的生长发育[7]。因此，本文研究了真姬菇菌糠的水提液和醇提液对金针菇（Flammulina velutipes）、灵芝 （Ganoderma lucidum）、真姬菇 （H.marmoreus）、花脸香蘑 （Lepista sordida）和糙皮侧耳 （Pleurotus ostreatus）等5种食用菌菌丝体生长的化感作用，为循环再利用真姬菇菌糠栽培食用菌研究提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

供试食用菌品种有金针菇（F.velutipes），菌株编号GDGM29087；灵芝（G.lucidum），菌株编号GDGM29083；真姬菇（H.marmoreus），菌株编号ACCC51583；花脸香蘑(L.sordida)，菌株编号GDGM5.315；糙皮侧耳（P.ostreatus），菌株编号GDGM29079。均由广东省微生物研究所提供。

1.1.2 菌糠

真姬菇菌糠均由广东菇木真生物科技股份有限公司提供。真姬菇培养基料为杂木屑30%、棉籽壳20%、玉米芯20%、小麦8%、豆秸5%、米糠12%、石灰0.5%、石膏0.5%、大豆皮4%。

1.1.3 仪器设备

AIR TECH超净工作台、LRHO2500G生化培养箱、粉碎机、研钵、分析筛、分析天平、电热恒温水浴锅、恒温烘箱、凯氏蒸馏装置、高温炉、消煮器、过滤装置等。

1.2 试验方法

1.2.1 菌糠水提液的制备

[8]中的方法选取干燥、无霉变的真姬菇菌糠试样，粉碎至40目，用四分法将试样缩减至200 g，加水1000 mL，煮沸20 min，用6层纱布过滤，补充水至1000 mL。

1.2.2 菌糠醇提液的制备

按参考文献 [8]中的方法选取干燥、无霉变的真姬菇菌糠试样，粉碎至40目，用四分法将试样缩减至200 g，加无水乙醇1000 mL，浸泡过夜，将上清液旋转蒸发，回收乙醇再浸泡菌糠过夜，重复2次，得到真姬菇菌糠醇提膏状物，加水1000 mL，制成浑浊液。

1.2.3 平板培养基的制备

取马铃薯200 g洗净去皮，切成小块，分别按体积比0（对照）、20%、40%、60%、80%、100%的比例加入真姬菇菌糠水提液、醇提液，煮沸30 min，用纱布过滤，滤液加入琼脂20 g，煮沸溶解后加葡萄糖20 g，或用水补至1000 mL，得到12种不同的平板培养基，分装于500 mL三角瓶里，115℃灭菌20 min，冷却至常温备用。

1.2.4 培养

在超净工作台上将灭菌后的培养基倒入口径为9.0 cm的无菌培养皿中，每皿约8 mL～9 mL，摇匀并冷却制成平板。取在PDA试管培养基上培养好的5种食用菌菌丝体，分别转接到平板培养基上，倒置于培养箱中，25℃暗照培养36 h，待菌丝萌发后，每隔24 h观测菌丝生长状态，并用十字交叉法测定菌落直径，取平均值。每个处理设3次重复。

1.3 数据处理

试验数据采用SPSS19.0统计软件进行处理，各组间数据比较采用单因素方差分析，显著性水平为0.05。化感效应指数（RI）公式为：

RI=T/C－1

式中：C为对照值（CK）；T为处理值。

当RI＞0为促进作用，RI＜0为抑制作用，绝对值大小表示化感作用强度[9，10]。

2 结果与分析

真姬菇菌糠水提液和醇提液对5种食用菌菌丝生长的影响见表1。

表1 真姬菇菌糠水提液和醇提液对5种食用菌菌丝生长的影响

2.1 真姬菇菌糠水提液和醇提液对金针菇菌丝生长的影响

真姬菇菌糠提取液对金针菇菌丝生长的影响，结果见表1、图1。

实验表明，真姬菇菌糠水提液对金针菇菌丝的生长始终表现出抑制作用，以100%浓度时表现最强；而浓度20%～60%的菌糠醇提液对金针菇菌丝的生长具有一定的促进作用，当菌糠醇提液浓度大于60%时则表现为抑制菌丝的生长，且在100%时也达到最强。

2.2 真姬菇菌糠水提液和醇提液对灵芝菌丝生长的影响

真姬菇菌糠提取液对灵芝菌丝生长的影响，结果见表1、图 2。

在低浓度时，真姬菇菌糠水提液和醇提液对灵芝菌丝生长均有促进作用，但当浓度大于35%时，水提液和醇提液则表现出差异，随着浓度不断增大，水提液表现出对灵芝菌丝生长的抑制作用，生长速度低于对照组；而醇提液则表现出很强的促进作用，在浓度超过60%时化感效应指数达到最高为49%，在浓度超过95%时则低于对照组。总体看来，醇提液对灵芝菌丝的生长促进作用优于水提液。

图1 真姬菇菌糠提取液对金针菇菌丝生长的影响

图2 真姬菇菌糠提取液对灵芝菌丝生长的影响

2.3 真姬菇菌糠水提液和醇提液对真姬菇菌丝生长影响

菌糠提取液对真姬菇菌丝生长影响结果见表1、图3。

图3 真姬菇菌糠提取液对真姬菇菌丝生长的影响

实验表明，添加真姬菇菌糠水提液对真姬菇具有明显的抑制作用，当浓度40%时，化感效应指数为－27%；当浓度大于40%时，菌丝不生长。真姬菇菌糠醇提液对真姬菇菌丝具有更强的抑制作用，当浓度40%时，化感效应指数为－46%；浓度大于40%时，菌丝同样不生长。

2.4 真姬菇菌糠水提液和醇提液对花脸香蘑菌丝生长的影响

真姬菇菌糠提取液对花脸香蘑菌丝生长的影响，结果见表1、图4。

图4 真姬菇菌糠提取液对花脸香蘑菌丝生长的影响

添加真姬菇菌糠水提液和醇提液均对花脸香蘑具有明显的抑制作用。当水提液浓度为40%时，化感效应指数为－32%；浓度大于40%时，菌丝不生长。而醇提液浓度为40%时，化感效应指数为达到－63%；浓度大于40%时，菌丝同样不生长。

2.5 真姬菇菌糠水提液和醇提液对糙皮侧耳菌丝生长的影响

不同浓度真姬菇菌糠提取液对糙皮侧耳菌丝生长的影响，结果见表1、图5。

图5 不同浓度真姬菇菌糠提取液对糙皮侧耳菌丝生长的影响

实验表明，浓度20%～80%的水提液对糙皮侧耳菌丝生长有明显的促进作用，以浓度为40%达到最高为30.5%；但浓度大于80%时菌丝生长速度则下降，明显低于对照组。浓度20%～60%的菌糠醇提液，对糙皮侧耳菌丝的生长有促进作用，当浓度大于60%时菌丝生长速度则下降，明显低于对照组。

3 结论

本研究发现，当PDA培养基中加入浓度为20%和40%的水提液，有利于灵芝和糙皮侧耳菌丝的生长，而40%的醇提液对金针菇菌丝和糙皮侧耳菌丝有明显的促进作用，60%的醇提液对灵芝菌丝也有明显的促进作用；但水提液和醇提液对真姬菇和花脸香蘑的菌丝生长都产生强烈的抑制作用，说明一定浓度的真姬菇菌糠水提或醇提液适合金针菇、灵芝和侧耳的菌丝生长，但不适合真姬菇和花脸香蘑菌丝的生长。本研究为真姬菇菌糠的科学与合理利用提供了科学依据。

[参考文献]

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[2]李挺，宋斌，叶运寿，等.真姬菇子实体ITS序列和RAPD分析[J].贵州农业科学，2011，39(12)：5－8.

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[6]丁强，王鸿磊，马云飞，等.利用真姬菇菌渣栽培榆黄菇的配方研究[J].北方园艺，2011(8)：177－178.

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[10]Francisco AM,Juan CG,Jose MM.Allelopathy:Chemistry and mode of action of allelochemicals[M].UK:Taylor&Francis,2003.