HE4蛋白在子宫内膜异位症与卵巢癌鉴别诊断中的意义

赵 慧 靳卫国 李爱华

(聊城市人民医院妇科，山东聊城 252000)

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是妇科常见病，表现为慢性盆腔痛、性交痛、痛经、月经异常、不孕症及盆腔包块等，这些症状的非特异性常导致诊断的延误。腹腔镜虽是子宫内膜异位症诊断的金标准，但属有创性检查，费用昂贵，且有一定的并发症，寻找内异症理想的标记物是各国学者研究的热点。

人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年来新发现的肿瘤标志物，主要在生殖系统、上呼吸道、乳腺上皮、肾脏远曲小管、结肠黏膜中表达，在卵巢浆液性癌高表达。Hellstrom［1］等研究证明血清HE4蛋白诊断卵巢上皮癌灵敏度为60%，明显高于CA125的13%。本研究旨在通过检测HE4蛋白在内异症及卵巢上皮癌患者血清及组织中的表达，探讨HE4蛋白在盆腔包块鉴别诊断方面的价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2010年1月至2011年12月在聊城市人民医院妇产科因卵巢型子宫内膜异位症行手术治疗，并经病理证实为子宫内膜异位症患者86例;选取同期手术的卵巢上皮癌患者56例为阳性对照，包括卵巢浆液性囊腺癌46例，卵巢粘液性囊腺癌8例，子宫内膜样腺癌2例;高分化16例，中低分化40例;I～II期18例，III期～Ⅳ期38例;共行淋巴清扫术30例，多为早期患者，其中淋巴结阳性12例，淋巴结阴性18例;腹水34例，无腹水22例;选取同期手术的良性卵巢肿瘤患者26例为阴性对照，包括浆液性囊腺瘤16例，粘液性囊腺瘤10例;随机选取我院查体中心健康查体人员20例为正常血清对照，以上各组患者血常规、肝肾功能、病毒筛检均正常，术前均未接受激素及其他抗内异症类药物治疗。以上各组患者均具有CA125检测结果。

1.2 标本处理 所有血液标本离体后即刻无菌操作，置于高压灭菌的生化促凝管中，室温下固定10～20 min，3000转离心3 min，提取血清，-80℃冰箱保存。将组织标本以10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片备用。

1.3 主要材料和方法 HE4蛋白酶联免疫检测试剂盒购自上海朗顿生物科技有限公司，兔抗人HE4蛋白多克隆抗体购自Abcam公司，即用型免疫组织化学超敏Ultra Sensitive TM SP试剂盒及DAB显色试剂，均购自福州迈新生物技术开发公司。按具体操作说明检测各组患者血清及组织中HE4蛋白的表达，免疫组化染色以磷酸盐缓冲液(PBS)为阴性对照。

1.4 免疫组化结果判断 参照Lgaws等方法，每张切片在400倍显微镜下顺序找5～10个视野，每个视野数100～200个细胞共计1000个细胞，以胞浆/胞核内出现棕黄色或棕色颗粒为阳性细胞，计算每张切片上阳性细胞表达的百分数。将阳性细胞数按其数量及显色强度分为3级:染色为棕褐色颗粒，且阳性细胞比例 ＞60%者，为强阳性(+++);染色为棕黄色颗粒，且阳性细胞比例 ＞30%，为中度阳性(++);染色为浅黄色反应，且阳性细胞比例 ＞10%，为弱阳性(+)，阳性细胞比例不足10%或无着色者为阴性(-)。由病理科医师盲法判断实验结果。

1.5 统计学分析 采用SPSS17.0软件进行统计学处理。计量数据使用均数±标准差(±s)来表示，样本均数比较采用方差分析或t检验;计数资料采用χ2检验 ，等级资料用Mann-Whitney U检验，P≤0.05表示差异具有显著性统计学意义。

2 结果

2.1 HE4蛋白在子宫内膜异位症、卵巢上皮癌及卵巢良性上皮性肿瘤组织中的表达 内异症多见较为完整的腺体，腺上皮受压，呈萎缩样，HE4蛋白在内异症组织中阳性表达率为6.97%(6/86)，在卵巢良性对照组织中阳性表达率为15.38%(4/26)，而卵巢上皮癌组织中阳性表达率为78.57%(44/56)(P=0.005)，表达强度多为++～+++(34/44)。

2.2 子宫内膜异位症、卵巢上皮癌、卵巢良性上皮性肿瘤患者术前血清HE4蛋白含量测定 内异症患者术前血清HE4蛋白均值为58.562±18.147 pmol/L(50.415～66.709 pmol/L)，卵巢上皮癌患者均值为187.184±89.915 pmol/L(167.269～507.099 pmol/L)，良性对照均值为52.629±22.277 pmol/L(40.352～64.906 pmol/L)，健康对照均值为50.059±27.214 pmol/L(42.845～57.273pmol/L)。内异症患者术前血清HE4蛋白较对照组略升高，差异无显著性(P=0.484)。卵巢上皮癌患者术前血清HE4蛋白较子宫内膜异位症及其它对照组明显增高(P=0.007)，血清HE4以150 pmol/L为界值，卵巢上皮癌灵敏度为57.69%，特异度为90.90%，阳性预测值为95.47%，阴性预测值为43.47%。

2.3 卵巢上皮癌患者血清HE4蛋白含量与临床病理特征的关系血清HE4蛋白含量与上皮性卵巢癌患者年龄、病理分级、临床分期、淋巴结转移及腹水无关(P＞0.05)，而卵巢浆液性腺癌血清HE4水平明显高于非浆液性(P=0.036)。(见表1)。

表1 卵巢上皮癌患者血清HE4蛋白含量与临床病理特征的关系

2.4 子宫内膜异位症、卵巢上皮癌、卵巢良性上皮性肿瘤患者及正常对照血清中CA125含量测定 内异症患者术前血清CA125均值81.523±32.091U/ml(12.439～113.621U/ml)，卵巢上皮癌患者均值298.135 ±117.346 U/ml(56.804～965.496 U/ml)，良性对照均值28.819±15.482 U/ml(6.408～62.372 U/ml)，健康对照均值为10.117±6.846 U/ml(6.264～13.956 U/ml)。内异症组血清CA125水平高于对照组(P=0.005);卵巢上皮癌组血清CA125水平明显高于内异症组及其他各组(P=0.000)。血清CA125以50 U/ml为界值，内异症诊断的灵敏度为60.46%，特异度为50.53%;以100 U/ml为界值，卵巢上皮癌诊断灵敏度为65.85%，特异度为93.22%，阳性预测值为87.09%，阴性预测值为79.71%。而血清HE4和CA125联合检测卵巢上皮癌灵敏度为76.70%，特异度为77.78%，阳性预测值为90.32%，阴性预测值为55.26%。

3 讨论

HE4蛋白是近年发现的新型肿瘤标志物，是一种分泌型糖蛋白，含有高度保守的WAP结构域。其基因位于染色体20q12-13.1［2］，主要在生殖系统、上呼吸道、乳腺上皮、肾脏远曲小管、结肠黏膜中表达，在卵巢浆液性癌中的表达水平最高［3-5］，被称为卵巢上皮癌相关基因［6］。研究证明:HE4蛋白在卵巢子宫内膜样癌和高分化浆液性卵巢癌中高表达，而在透明细胞癌和黏液性卵巢癌中低表达［7-8］。本研究结果显示:HE4蛋白在子宫内膜异位症及卵巢良性上皮性肿瘤组织中表达多为阴性，卵巢上皮癌组织阳性表达率为78.57%，表达强度多为强阳性。Moore等［9，10］检测了 531 例盆腔包块患者，结果显示: 卵巢上皮癌、交界性卵巢肿瘤患者血清HE4蛋白中位水平分别为260.90 pmol/L、65.21 pmol/L，明显高于对照组，单独检测血清HE4蛋白诊断卵巢上皮癌的灵敏度为72.9%，特异度为95%，认为血清HE4蛋白是卵巢上皮癌理想的标志物［1］。但由于样本量不同，检测试剂不统一，检测结果差异很大。董丽等［11］研究结果显示: 以150 pmol/L为界值点，诊断卵巢上皮癌的准确率更高;若以86 pmol/L为界值可降低漏诊率。徐春琳等［12］认为107.15 pmol/L为卵巢上皮癌诊断最佳界值点，灵敏度为88%，特异度为92.1%，阳性预测值为88%，阴性预测值为92.1%。而王术艺等［13］研究认为最佳界值为51.6 pmol/L，灵敏度和特异度分别为86.7%和98.0%。本研究结果显示: 内异症患者术前血清HE4较良性及正常对照组略有升高，但无统计学意义。卵巢上皮癌患者术前血清HE4蛋白较内异症及其它对照组明显增高，以150 pmol/L为界值，卵巢上皮癌灵敏度为57.69%，特异度为90.90%，阳性预测值为95.47%，阴性预测值为43.47%。由此可见，血清HE4蛋白在子宫内膜异位症的诊断方面未见明确的优势，但有助于盆腔包块的良恶性鉴别。

血清HE4蛋白与卵巢上皮癌临床病理特征的关系研究颇多，但结论各异。Kimberly等研究［14］报道血清HE4蛋白与患者年龄呈正相关，与卵巢上皮癌分期及组织学分级没有相关性。杨艳华等［15］研究发现:浆液性卵巢癌组高于黏液性卵巢癌组，与血清CA125及患者年龄呈正相关。亦有研究证明［16］卵巢上皮癌临床期别越晚、分化程度越低，血清HE4蛋白含量越高，且术后1周血清HE4蛋白水平较术前明显降低，认为HE4蛋白有望成为卵巢癌判断疗效及观察预后的指标。本研究结果显示: 血清HE4蛋白含量与卵巢上皮癌患者年龄、病理分级、临床分期、淋巴结转移及腹水无关，而卵巢浆液性腺癌血清HE4水平明显高于非浆液性。

一直以来，CA125被认为是卵巢上皮癌首选标志物，1986年首次报道内异症患者血清CA125明显升高，原因如下: 异位内膜细胞可产生较多的CA125;伴炎症的内异症提高CA125水平;内异症患者在位内膜具有极强的CA125分泌功能，是正常内膜的2～4倍;另外，异位病灶与血管的屏障破坏也可导致CA125升高。我们的结果显示: 内异症患者术前血清CA125均值高于良性及正常对照组，以50 U/ml为界值，内异症灵敏度为60.46%，但特异度仅为50.53%。

研究认为［17］血清CA125以35U/mL为界值，诊断卵巢上皮癌灵敏度为83.1%，特异度39.3%，阳性预测值57.0%，阴性预测值70.6%。本研究结果显示: 卵巢上皮癌患者术前血清CA125均值298.135±117.346U/ml，明显高于内异症组及良性对照组，以100U/ml为界值，卵巢上皮癌灵敏度为65.85%，特异度为 93.22%，阳性预测值为87.09%，阴性预测值为79.71%。但CA125特异性不强［18，19］，如子宫内膜癌及内异症、子宫腺肌病、盆腔脓肿、及其它疾病中血清 CA125浓度也升高，如:肝脏疾病、其它恶性肿瘤(如胰腺癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌等)、结核病、充血性心力衰竭等，在月经期、妊娠期、异位妊娠和产褥期 CA125也会升高。临床上联合检测多用来弥补不足，Moore等对与卵巢上皮癌数个标志物 (HE4、CA125、CA72-4、SMRP、OPEN、EGFR、ErbB2、抑制素及激活素)进行联合检测，分析发现: 就单一标志物而言，HE4有更好的特异性，单独检测HE4灵敏度为72.9%，特异度为95%，HE4蛋白和CA125联合检测灵敏度为76.4%，特异度为95%。本研究结果显示: 血清HE4和CA125联合检测卵巢上皮癌灵敏度为76.70%。特异度为77.78%，阳性预测值为90.32%，阴性预测值为55.26%。这与 Dong的研究结果一致［21］。可见联合检测血清HE4蛋白和CA125可提高卵巢上皮癌诊断的准确率，有助于鉴别卵巢上皮癌和内异症，以弥补单项检测CA125的不足［22］。

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