芳樟醇为指标对金银花药材质量的研究

何俊婷王晓博曹爱兰* 任 哲惠选柱王景峰

（1 陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075；2 陕西中药研究所，陕西 西安 710075；3 陕西医药控股集团山海丹制药有限责任公司，陕西 西安 710075）

芳樟醇为指标对金银花药材质量的研究

何俊婷1王晓博1曹爱兰2* 任 哲1惠选柱3王景峰3

（1 陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075；2 陕西中药研究所，陕西 西安 710075；3 陕西医药控股集团山海丹制药有限责任公司，陕西 西安 710075）

目的 研究金银花药材中芳樟醇的含量测定方法，及其加速稳定性试验条件下含量随时间变化的规律，为确定金银花质量研究提供科学依据。方法 采用气相色谱法检测金银花中芳樟醇含量，通过加速稳定性实验测定不同贮藏时期金银花中芳樟醇变化。结果 芳樟醇线性范围为0.0516～1.2907 mg/mL（r=0.9999），平均回收率为101.3%；金银花经加速稳定性实验后，芳樟醇下降率为1.91%～2.80%。结论 本方法可用于金银花中芳樟醇的含量测定，金银花药材经加速稳定性研究后芳樟醇含量有小幅度的下降，但未发生显著变化，金银花中芳樟醇成分较为稳定，在药材有效期内可作为指标性成分对金银花进行质量控制。

金银花；芳樟醇；气相色谱法；挥发油；稳定性

金银花挥发油是鱼金注射液有效成分，是通过水蒸气蒸馏得到的药用中间体之一。干金银花中挥发油成分有60多种，多为以芳香醇为主低沸点的不饱和萜烯类[1]。2006年，国家药品不良反应中心因不良反应问题暂停了鱼金注射液的使用。生产企业根据《中药注射剂安全性再评价质量控制评价技术原则》（试行）[4]要求，为提高注射剂的质量和安全水平，应采取有效措施保证原料质量的稳定。而金银花药材相关标准未对其挥发油进行规定和检验，为保证制剂安全、可靠、稳定、可控，企业做了大量的研究工作，本文对金银花药材中挥发性成分芳樟醇进行含量控制[5]，并经稳定性实验后对金银花中的芳樟醇进行测定，为原料的选择、贮藏条件及期限提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

GC7890A气相色谱仪，FID检测器（美国安捷伦）；AG-135型电子分析天平（德国梅特勒）；挥发油提取器及冷凝装置（西安玻璃仪器厂）；WD-A药物稳定性检查仪（天津药典标准仪器厂）。

表1 芳樟醇回收率实验结果

1.2 试药

芳樟醇（1503-200001，中国药品生物制品检定所）；乙酸乙酯（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）；甲苯（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 金银花采收[2]：本品为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，6月份采收于山东平邑县，为成长中期花蕾，十批样品批号为120601～120610。

2.2 挥发油量测定：取干金银花约500g置圆底烧瓶中，加8倍药材量的水，摇匀。连接挥发油测定装置，回流提取6h，按规定[3]方法操作读取挥发油量。 结果显示，蒸馏得到的挥发油在室温下为凝固的半固体状态，粘稠，不流动。颜色微黄，偏白。由于金银花挥发油特殊的易凝固状态，造成其挂壁严重，挥发油中易夹杂水泡，因此检读挥发油量较为困难，误差较大。

2.3 芳樟醇含量测定

2.3.1 供试品制备：精密称取本品50g，于圆底烧瓶中，加水500mL，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，再加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管装置。加热回流6h，停止加热，放置片刻，分取乙酸乙酯层，测定器再用乙酸乙酯洗涤2次，每次1mL。合并洗涤液，定量转移至5mL量瓶中，并加入乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀。

2.3.2 色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：安捷伦DB-WAX型毛细管色谱柱(60μm×250μm×0.25μm)；检测器：FID；氮气为载气,载气流速2.0 mL/min；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流比：5∶1；程序升温：初始120℃，保持5min，以每分钟5℃升至190℃，保持2min，以每分钟30℃升至250℃；进样量为1μL；理论板数按芳樟醇峰计算，应不低于800。色谱图见图1。

图1 GC图（A 芳樟醇对照品；B 金银花供试品）

2.3.3 对照品溶液的制备：取芳樟醇对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含1.2907 mg作为对照品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察：精密吸取对照品溶液，用乙酸乙酯配置成芳樟醇浓度分别为0.0516，0.1291，0.2581，0.3872，0.5163，1.2907 mg/mL的对照品梯度溶液，进样，以色谱峰面积和浓度进行分析。表明，甲基正壬酮在浓度为0.0516～1.2907 mg/mL范围内，线性关系良好，线性回归方程为：Y=2665.8x+11.4，r=0.9999。

2.4.2 精密度实验：精密吸取同一对照品溶液，按2.3.2色谱条件重复进样5次，通过峰面积计算，得到芳樟醇峰面积的RSD（n=5）为1.3%，表明所用仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性实验：取供试品溶液一份，按2.3.2方法，分别于0，2，4，6，8，10，12，24h进样，测得峰面积计算RSD为1.26%，表明该样品在24h内稳定性良好。

2.4.4 重复性实验测：精密取同一批样品（批号120607）5份，按2.3.1方法制备供试品，按2.3.2测定，测定供试品芳樟醇平均含量为29.84μg/g，RSD为2.1%。

2.4.5 加样回收率实验：取已知芳樟醇含量的供试品溶液（批号：120610）5份，供试品浓度为28.85μg/g，分别精密加入与供试品等体积的对照品，混合均匀，测定其中芳樟醇峰面积，计算回收率，结果芳樟醇平均加样回收率为101.3%。见表1。

2.4.6 样品测定：分别取是个批号的金银花，每批样品取两份，按供试品制备方法制备样品。在上述色谱条件下分析测定，测定出芳樟醇的峰面积，计算含量，测定结果见表2。

表2 金银花中芳樟醇的含量

2.5 加速稳定性试验[5]

取三个批号干金银花药材对其进行加速稳定考察。将金银花药材在40℃±2℃，相对湿度75%±5%条件下储藏6个月，湿度调节选择NaCl饱和溶液（15.5-60℃，RH75%±1%）。在试验期间第0、1、2、3、6个月末取样照上述方法制备及检测样品，测定含量变化情况见表3。

表3 加速稳定性试验金银花中芳樟醇含量（μg/g）

3 讨 论

《中国药典》2010版一部中金银花药材含量测定成分为绿原酸和木犀草苷[2]，对以金银花挥发油为药效成分的制剂的原料控制并不全面，我们需要从挥发油的角度对金银花进行质量研究。实验发现金银花的挥发油在室温下为半固体状态，难以通过常规的测定挥发油量来控制金银花的质量。因此，对挥发油中的指标性成分芳樟醇进行含量控制。通过方法学研究，表明本文建立的气相色谱法能准确测定金银花中芳樟醇的含量。本方法简便，可操作性强，重复性好，准确度高，通过十个批次样品的检验，芳樟醇含量范围为28.11～35.93μg/g，为金银花中芳樟醇的含量限度提供了依据[6]。

通过三个批次金银花的加速稳定性试验考察，显示金银花在温度、湿度和光照的影响下，芳樟醇作为其控制金银花中挥发油的指标性成分，稳定性好，在考察期内芳樟醇含量下降率低于5%，未发生显著变化。为保证制剂质量，保证原料药的优良，建议将其储存在阴凉、干燥处，贮藏期限不宜超过其有效期，库房收发货物保证“先进先出”原则。

参考文件

[1] 张玲,彭广芳,林慧彬,等.山东金银花挥发油化学成分的研究[J].中国药学杂志,1995,19(11):651.

[2] 中国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:205.

[3] 中国药典委员会.中华人民共和国药典附录Ⅹ D(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:63.

[4] 国家食品药品监督管理局.中药注射剂安全性再评价质量控制评价技术原则[Z].国食药监办[2010]395号.

[5] 万琴,萧伟,王振中,等.气相色谱法测定金银花中芳樟醇的含量[J].南京中医药大学学报,2010,26(4):317.

[6] 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物稳定性研究技术指导原则[Z].国食药监注[2006]678号.

R282

B

1671-8194（2013）25-0070-03

陕西省科技统筹创新工程计划项目(编号：2011KTCG03-03)

*通讯作者