免疫球蛋白G在牙龈鳞状细胞癌中的表达

蔡晓珊，朱洪光，牛 娜

(1潍坊市第二人民医院，山东潍坊261041;2潍坊市人民医院;3潍坊医学院病理学教研室)

经典免疫学认为，IgG作为机体免疫系统中的最为重要的分子，仅由分化成熟的B淋巴细胞合成。近年来很多研究报道，非淋巴细胞包括上皮来源的癌细胞(肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、卵巢上皮性癌、甲状腺乳头状癌等)、增生性的上皮细胞、中枢神经系统神经元能够产生IgG。但是IgG在牙龈癌中的表达及临床病理学意义未有报道。2012年10月～2013年2月，我们应用免疫组化和原位杂交技术对IgG在牙龈鳞状细胞癌中的表达和分布情况进行了研究。

1 材料与方法

1．1 材料 选取潍坊市人民医院和潍坊市第二人民医院2010年以来手术切除牙龈鳞状细胞癌30例，其中高、中、低分化各10例;选取的蜡块癌组织周边均带少许正常上皮组织。

1．2 方法

1．2．1 IgG在牙龈鳞状细胞癌的表达检测 IgG单克隆抗体购自SIGMA公司，原位杂交探针及相关试剂由潍坊医学院牛娜博士提供，免疫组化PV9000试剂盒购自北京中杉试剂公司。免疫组化和原位杂交技术实验步骤参照试剂说明书及相关文献进行操作［1］。

1．2．2 结果判定 请三位病理医师双盲法阅片，按等级评分法，根据阳性染色强度和阳性细胞所占的百分比评估IgG的表达。免疫组化AEC显色IgG的阳性染色为红色，主要位于胞质。阳性结果判定根据以下两方面的总分进行判断:①按染色强度评分，0分为无色，1分为淡红色，2分为浅红色，3分为深红色;②按阳性细胞所占的百分比评分，5个高倍镜视野计数阳性细胞，阳性细胞率≤5%为1分，6% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。两者相乘分值＜3分为阴性(-)，3～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。原位杂交阳性信号为紫蓝色，呈细颗粒状。

1．2．3 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件，牙龈癌与正常上皮间IgG表达水平的比较应用秩和检验，牙龈癌中IgG的表达与癌组织分化程度的相关性采用等级相关分析。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

图1 免疫组化原位杂交IgG表达特点

2．1 HE染色 正常牙龈组织各层结构清晰，牙龈癌组织的各层结构消失，癌细胞成团、索状分布，高分化者有角化珠形成。在癌组织周边有大量淋巴细胞浸润，间质中可见小血管扩张充血。

2．2 免疫组化IgG表达特点 28例牙龈癌癌细胞胞质IgG染色呈现阳性反应，较强显色多出现在低分化的牙龈癌病例中，且分布较均匀;高分化病例阳性显色主要位于角化珠周围。IgG在癌旁正常上皮内胞质也略有显色，且在间质中的淋巴细胞呈强阳性表达(见图1-①、②、③)。

2．3 原位杂交IgG的表达特点 在低分化鳞癌中IgG的阳性信号较强，主要位于胞质;间质中的淋巴细胞作为阳性对照，为强表达(见图1-④、⑤)。

2．4 免疫组化IgG在牙龈癌组织和正常牙龈组织中表达水平的比较 在30例牙龈癌中有28例呈现IgG的阳性染色，且IgG在癌组织中的表达水平高于正常上皮组织，差异有统计学意义(Z=-2．140，P=0．032)。见表 1。

表1 IgG在牙龈癌和正常牙龈组织中表达水平的比较(例)

2．5 免疫组化IgG的表达强度与牙龈癌分化程度的关系 在牙龈癌组织中癌组织分化程度越低，IgG的表达强度越强。经Spearman等级相关分析表明，IgG的表达强度与牙龈癌的分化程度呈负相关(r=-0．509，P=0．004)。见表 2。

表2 IgG的表达强度与牙龈癌分化程度的关系(例)

3 讨论

IgG是人体体液免疫系统中最为重要的蛋白。最近的研究已经表明，不仅成熟的B淋巴细胞能够合成IgG，一些非淋巴细胞，包括肿瘤细胞和神经元等也能产生IgG。Niu等［2］研究发现，免疫球蛋白G及其受体在人体中央和外周神经系统中有广泛的表达和分布。进而又应用免疫组化、原位杂交和RTPCR方法检测到IgG抗体受体在眼内的上皮细胞和血管内皮细胞中有所表达［3］。以往对肿瘤免疫学的研究认为恶性肿瘤患者体内多存在机体免疫功能的异常，主要表现为细胞免疫受抑制，其效应细胞如NK细胞、LAK细胞、巨噬细胞功能减低，而在体液方面却呈现出外周血IgG水平的升高。但是近年来的免疫学研究开始转向肿瘤细胞本身。Kijanka等［4］研究发现，大肠癌患者血清免疫球蛋白IgG与正常人不同。大肠癌癌组织中IgG的表达水平与癌组织的分化程度、pTMN分期、淋巴结转移情况及间质炎症反应有明显的相关性，肿瘤分化程度越低，IgG表达水平越高，此结果已从蛋白和RNA水平上均得到了证实［1］。另有国内学者应用免疫组化法检测到IgG在卵巢上皮性癌组织中高表达，且表达强度与癌的病理分级呈正相关［5］。Chen等［6］研究发现，IgG轻链kappa在97．4%的肉瘤中表达，而在软组织良性病变中仅有31．7%的表达;又通过原位杂交方法检测到IgG1重链恒定区信使RNA的表达;且IgG在软组织肿瘤中的表达与肿瘤的分级和增殖标记物(PCNA、Ki-67和 cyclin D1)有明显的相关性。本研究从蛋白水平和RNA水平证明了IgG在牙龈癌癌细胞中的表达，进而发现IgG在癌组织中的表达较正常组织高，且其表达情况与肿瘤的分化程度呈负相关，即肿瘤分化程度越高，IgG表达越弱。提示IgG的表达与牙龈癌的发生、发展密切相关。

目前，对于非淋巴细胞产生的免疫球蛋白的功能研究甚少。Qiu等［7］用反义寡核苷酸和抗人的IgG抗体封闭了癌细胞产生IgG，均导致了细胞凋亡增加和肿瘤细胞生长抑制。之后，Qiu等［8］研究发现甲状腺乳头状癌细胞可以产生IgG，且IgG能够促进肿瘤细胞的生长和转移。这与Niu等［1，9］的研究结果一致:IgG的表达与增殖标记物 (如cyclin D1、PCNA)、抗凋亡及核转录因子的表达呈正相关，与抗凋亡蛋白(如Bcl-2)的表达呈负相关;同时证实将肿瘤细胞分泌的IgG下调后可以促进肿瘤细胞凋亡，抑制其生长，其克隆形成能力和侵袭能力下降，提示肿瘤源性IgG为肿瘤维持其恶性行为所必需。

总之，越来越多的研究发现了IgG在生理和病理条件下的更多功能，这将为肿瘤的靶向治疗提供更广的应用前景。但肿瘤细胞产生的免疫球蛋白究竟通过何种机制影响肿瘤细胞的生长和凋亡，有待于进一步研究。

［1］Niu N，Zhang J，Huang T，et al．IgG expression in human colorectal cancer and its relationship to cancer cell behaviors［J］．Plos One，2012，7(11):e47362．

［2］Niu N，Zhang J，Guo Y，et al．Expression and distribution of immunoglobulin Gand its receptors in the human nervous system［J］．Int J Biochem Cell Biol，2011，43(4):556-563．

［3］Niu N，Zhang J，Sun Y，et al．Expression of IgG and its receptors in an immune privilege site:the eye［J］．Cell Mol Life Sci，2011，68(14):2481-2492．

［4］Kijanka G，Hector S，Kay EW，et al．Human IgG antibody profiles differentiate between symptomatic patients with and without colorectal cancer［J］．Gut，2010，59(1):69-78．

［5］张多加，黄晶．免疫球蛋白G在卵巢上皮性癌中的表达［J］．中国妇幼保健，2009，24(4):549-552．

［6］Chen Z，Huang X，Ye J，et al．Immunoglobulin G is present in a wide variety of soft tissue tumors and correlates well with proliferation markers and tumor grades［J］．Cancer，2010，116(8):1953-1963．

［7］Qiu X，Zhu X，Zhang L，et al．Human epithelial cancers secrete immunoglobuling with unidentified specificity to promote growth and survival of tumor cells［J］．Cancer Res，2003，63(19)，6488-6495．

［8］Qiu Y，Korteweg C，Chen Z，et al．Immunoglobulin G expression and its colocalization with complement proteins in papillary thyroid cancer［J］．Mod Pathol，2012，25(1):36-45．

［9］Zhang J，Zhang BG，Zhang XM，et al．SATB1 expression is associated with biologic behavior in colorectal carcinoma in vitro and in vivo［J］．Plos One，2013，8(1):e47902．