间皮素、D2－40和Glypican3在卵巢肿瘤中的鉴别诊断意义

印永祥，赵 华，龚 华

（南京医科大学附属无锡市妇幼保健院 病理科，江苏 无锡214002）

卵巢癌是第三大妇科恶性肿瘤，卵巢透明细胞癌临床较少见，约占卵巢上皮性恶性肿瘤的5%－10%，但在妇科病理鉴别诊断中却占有相当比例。与卵巢透明细胞癌相关的鉴别诊断包括原始生殖细胞肿瘤（特别是卵黄囊瘤和无性细胞瘤）及卵巢浆液性囊腺癌，卵巢癌的分类不同与预后及临床处理大不相同，需要更加客观的指标用来鉴别卵巢癌。本文的目的旨在 mesothelin、D2－40、Glypican3在卵巢癌诊断和鉴别诊断中的作用加以探讨。

1 材料与方法

1.1材料选取无锡市妇幼保健医院2003～2011年以国际FIGO诊断标准诊断的卵巢浆液性囊腺癌12例，卵巢透明细胞癌10例，卵巢卵黄囊瘤10例和卵巢无性细胞瘤10例。所有病例均未行放、化疗。

1.2方法鼠抗人间皮素mesothelin单克隆抗体购置epitomics公司（1：2000，克隆号EPR2685），即用型鼠抗人D2－40单克隆抗体（克隆号D2－40）、即用型鼠抗人磷脂酰肌醇聚糖Glypican3单克隆抗体（克隆号1G12）购置福州迈新生物技术有限公司。全部标本均经10%中性福尔马林固定，行常规石蜡包埋，4微米连续切片，染色按MaxVisionTM2试剂盒说明书操作。以抗体稀释液替代一抗作为阴性对照，以公司提供的阳性片作为阳性对照。

1.3结果判定在双肓下进行。间皮素和D2－40在细胞膜上着色，Glypican3在细胞质上着色。

2 结果

间皮素在卵巢浆液性囊腺癌中全都是弥漫阳性，透明细胞癌中阳性比例达90%，在卵黄囊瘤和无性细胞瘤呈阴性表达。D2－40在无性细胞瘤上弥漫阳性率90%，在卵巢浆液性囊腺癌中有20%的局灶阳性，在透明细胞癌和卵黄囊瘤呈阴性表达。Glypican3在卵黄囊瘤上90%呈弥漫表达，10%局灶表达，呈100%阳性；在透明细胞癌上50%的弥漫阳性，20%的局灶阳性；在卵巢浆液性囊腺癌和无性细胞瘤上呈阴性表达。见表1。

3 讨论

卵巢透明细胞癌一种较常见的妇科肿瘤，具有早期转移、早期复发、对化疗药物易耐药、预后差的特点［1］。间皮素是卵巢上皮性癌的新的筛查标记物和预后分子［2］。间皮素是一种细胞表面糖蛋白，通常仅表达在胸膜腔、腹膜腔和心包腔的间皮细胞。间皮素是一种分化抗原，近年来发现在恶性胸膜间皮瘤、胰腺癌和卵巢癌等恶性肿瘤中过表达，并可能参与肿瘤的黏附转移，与卵巢癌细胞在腹腔内的种植转移有关［3］。间皮素表达与卵巢癌病理分期、分级相关，说明间皮素可能通过增强细胞黏附来促进肿瘤细胞种植在腹膜上，导致肿瘤扩散。测定间皮素的量可以帮助判断卵巢癌的预后［4］和指导进行靶向治疗。间皮素和人类附睾蛋白HE4作为卵巢癌的生物标记，最近有人报道与间皮素相比，CA125和HE4结合具有更高的敏感性检测卵巢癌和早期卵巢癌［5］。透明细胞癌需与浆液性癌进行鉴别，我们的研究发现，间皮素在卵巢浆液性囊腺癌中100%弥漫阳性；透明细胞癌显示80%局灶阳性，10%弥漫阳性；在区别卵巢浆液性癌与透明细胞癌中有明显的鉴别意义。最近研究发现在间皮素在14例卵巢浆液性囊腺癌全阳性，8例透明细胞癌中有6例阳性，3例子宫内膜样癌全阳性，4例移行细胞癌全阳性［6］，与本文研究相符。

表1 mesothelin、D2－40、Glypican3在卵巢癌上的表达

图1 间皮素、Glypican3和D2－40在卵巢癌上的表达

卵巢透明细胞癌（CCCs）是最常与原发性生殖细胞肿瘤相混淆的卵巢表面上皮性肿瘤，其诊断有时较困难。无性细胞癌和卵黄囊瘤中可出现透明细胞成分，卵巢透明细胞癌还需与无性细胞癌和恶性卵黄囊瘤鉴别。D2－40表达于淋巴管内皮细胞，而不表达血管内皮细胞，通常用于标记组织中的淋巴管内皮，有助于淋巴管内皮细胞源性肿瘤诊断及判断其他肿瘤组织是否发生淋巴道浸润和转移。D2－40是高敏感性无性细胞瘤免疫组化标记物，在无性细胞瘤诊断和卵巢原始生殖细胞肿瘤的鉴别诊断［7］中很有帮助。我们的研究同样发现，D2－40在无性细胞瘤中90%弥漫阳性，在卵黄囊瘤不表达；Glypican3在卵黄囊瘤90%弥漫阳性、10%局灶阳性。卵黄囊瘤最重要的IHC表达是AFP阳性表达，75%以上的肿瘤细胞质阳性；透明细胞癌CD15阳性，AFP阴性，可与卵黄囊瘤相区别［8］。但我们在实际工作中发现AFP在卵黄囊中表达并不理想，卵黄囊瘤细胞能与Glypican3蛋白产生免疫反应。

Glypican3蛋白是一种硫酸肝素糖蛋白和癌胚抗原。我们的数据表明Glypican3在透明细胞癌上50%的弥漫阳性，20%的局灶阳性。同样文献报道，Stadlmannn等［9］对308名卵巢癌患者的肿瘤组织进行检测，发现其中18% 的肿瘤组织表达Glypican3，超过60% 的卵巢透明细胞癌表达Glypican3，以上结果提示，Glypican3可能成为卵巢透明细胞癌的肿瘤标志物。但也有相反的报道，在大部分卵巢透明细胞癌中检测发现Glypican3表达阴性［10］。最近报道Glypican3还与Ⅰ期透明细胞癌的预后密切相关，Glypican3表达阳性的患者预后差，且倾向于对紫杉类药物耐药［11］在手术病理学检查中，区别卵黄囊瘤和卵巢透明细胞腺癌组织比较困难，发现Glypican 3在卵黄囊瘤中弥漫性阳性率为100%，而在卵巢透明细胞腺癌中弥漫性阳性率只有10%，有望成为有效的鉴别诊断标志［12］。

过去认为卵巢透明细胞癌和卵黄囊瘤均来自于中肾，SCULLY发现与子宫内膜异位相关，提示透明细胞癌来自于卵巢表面上皮。现其Mullerian性质已经被广泛接受，但在某些病例中，仍存在鉴别诊断问题，因这些肿瘤组织组织学表现有一定程度的重叠。知晓患者年龄、临床情况及血清AFP水平有助于鉴别。一般而言，P53在透明细胞癌中可阴性表达，也有偶有表达，其强度及范围要比浆液性癌弱。WT1与P53相似。故P53和WT1胞核弥漫性强阳性可支持浆液性癌诊断［8］。除了免疫组化指标有助于鉴别诊断，还可能通过临床表现、年龄等指标辅助诊断。无性细胞瘤一般发生于年轻人。而透明细胞癌一般发生于老年人。

我们首先发现间皮素免疫组化染色有助于卵巢肿瘤的诊断，间皮素在卵巢浆液性囊腺癌中弥漫性高表达，在卵巢透明细胞癌中局灶表达，D2－40在无性细胞瘤中表达的敏感性高，Glypican3在卵黄囊瘤中高表达。当卵巢肿瘤组织学难以区分时，在卵巢癌的疑难诊断上，通过这三种抗体能对卵巢浆液性囊腺癌、透明细胞癌、无性细胞瘤和卵黄囊瘤相鉴别。当然，当免疫标记物与组织学相左时，还是以组织HE为主。

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