BacT／ALERT 3D检测系统在快速检测结核分支杆菌中的应用

陈 昕，赵 雷，杨亚丽

（1.暨南大学医学院附属深圳人民医院 检验科，广东 深圳518020；2.河南省人民医院 麻醉科）

结核病是严重危害人类健康的全球性传染性疾病之一，近年来全世界发病率明显上升，每年有800万新发病例，另有300万人死于结核病。快速、可靠、特异性及敏感性高的检测方法是早期诊断、合理化疗、阻断结核传播的主要措施。本文通过全自动微生物快速检测系统（BacT／ALERT 3D）检测并与传统的结核诊断方法涂片法进行比较，为结核的快速诊断提供新的检测手段。

1 材料与方法

1.1标本来源于2010年1月至2010年5月本院收治的结核患者336例，留取各类标本检测。

1.2材料与仪器BacT／ALERT 3D 仪，MB／BacT培养瓶，含生长因子的抗生素添加剂（MAS）生产商：欧嘉隆公司（Organon Teknika）公司。

1.3方法

1.3.1 标本前处理 取5～10ml标本于50ml离心管内，加入新鲜配制的与标本等量的N－乙酰L关胱氨酸（NALC）－NaOH溶液，振荡混合直到标本完全液化，室温放置15min后加入磷酸盐（PBS）缓冲液至50ml，3 000g离心15min，弃上清，加入1ml PBS缓冲液振荡成悬浮液。

1.3.2 BacT／ALERT 3D仪检测 （1）在 MAS中加入10ml reconstituein flud溶解 MAS。（2）加0.5ml溶解的 MAS到 MB／BacT培养瓶中，再加入0.5ml处理后的悬浮液，经对培养瓶条码扫描后放入BacT／ALERT 3D仪内自动检测。

1.3.3涂片镜检取处理后的标本制成涂片，恒温电热板充分干燥，行萋尼氏染色，OLYMPUS生物显微镜检测。

1.4统计学分析采用SPSS 13.0软件完成统计学处理，计量资料以s表示，比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1检测敏感度比较336例患者在住院期间均提供多种类型的标本进行结核病细菌学检测。不同方法对不同标本的检测敏感度不同，BacT／ALERT 3D仪检测的阳性检出率明显高于涂片镜检法（P＜0.05，差异有统计学意义），见表1。

表1 两种方法对结核病人不同标本的检测敏感度

2.2不同标本检出率和检测时间比较涂片镜检法在标本接受当天发布结果报告，BacT／ALERT 3D仪阳性检出时间平均为14.1天，见表2。

表2 BacT／ALERT 3D仪不同标本的阳性检出率和检测时间

3 讨论

结核杆菌的快速、准确诊断一直是结核病基础应用研究的热点问题。结核病细菌学检测是发现传染源的主要途径和手段，是诊断结核病和确定化疗方案的的重要依据。目前，结核病细菌学诊断主要是涂片和结核菌培养。结核分支杆菌抗酸染色涂片法是最广泛使用的方法之一，该方法检测速度快，价格低廉，能检测出含菌量较高的标本，但是无法检测出含菌量较低的标本，因此其检出率较低，无法早期诊断结核病。细菌培养法敏感性高并可鉴定死菌与活菌，被誉为结核病诊断的“黄金标准”［1］。但传统培养方法培养时间较长，且每周观察一次培养基表面菌落生长情况，就容易造成人为的报告延误［2］。近年来，结核病新诊断技术进展显著，其中BacT／ALERT 3D全自动微生物快速培养检测系统的应用可以有效提高培养效率，缩短培养时间有助于及时报告阳性结果。

BacT／ALERT 3D是第六代崭新的全自动微生物快速检测系统，也是血液培养和分支杆菌检测系统的新标准。BacT／ALERT 3D全自动微生物快速培养检测系统依靠CO2比色检测装置显示培养系统中分支杆菌的生长情况。其培养瓶底部有颜色感应器，当培养瓶内有分支杆菌生长时，产生的CO2渗透至感应器经水饱和后产生氢离子（H＋）改变感应器的酸碱值且颜色也跟着改变由深绿色变为黄色，仪器自动连续检测，并且自动显示有无分支杆菌生长［3］。具有自动化程度高、污染率低、阳性率高等特点。

BacT／ALERT 3D检测法对结核分支杆菌的初代分离阳性率比常规方法提高了7%－18%［4，5］。

本实验结核分支杆菌的阳性检出率平均为39.9%，明显高于涂片法的14.7%。虽然培养时间仍需2－3周，但如使用分支杆菌快速培养管可使阳性培养时间缩短至4－11天。BacT／ALERT 3D快速培养检测系统不仅能检测结核分支杆菌，同时还能进行药敏实验和菌型鉴定，是一种准确、简便、快速的检测结核分枝杆菌的方法。

［1］Medeeins Sans Frontieres Tuberculosis and drug sensitivity testing：an overview of the current diagnostic pipeline［J］.Geneva，Switzerland：2006，10.

［2］吴龙章，蔡兴珊，吴幸怡，等.四种检测方法对结合病临床诊断价值的探讨［J］.中华检验医学杂志，2007，25（7）：742.

［3］胡忠义，勒安佳.结核分枝杆菌耐药性检测进展［J］.临床肺科杂志，2000，5（2）：116.

［4］张力兴，李京生，刘晓雪，等.BACTEC－460－TB与常规方法分离分枝杆菌药物敏感试验和菌型的初步鉴定［J］.中国防痨杂志，1992，14（2）：135.

［5］马曙光，王 辉，王会善，等.BACTEC－460临床运用于结果分析［J］.中国防痨杂志，1995，17（2）：161.