电针不同穴位对慢性阻塞性肺病大鼠肠微循环及不同脏器VIP含量的影响

李志同,杨伟宁,解秸萍,赵雅芳,李胜杰



电针不同穴位对慢性阻塞性肺病大鼠肠微循环及不同脏器VIP含量的影响

李志同,杨伟宁,解秸萍,赵雅芳,李胜杰

(北京中医药大学,北京 100029)

观察电针丰隆(ST40)、尺泽穴(LU5)对慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)大鼠肠微循环及不同脏器血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)分布的影响,观察同经穴与相关经穴对肺及肠的影响特点,探讨穴位相对特异性的规律。将32只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、尺泽组和丰隆组,每组8只。除正常组外,其余各组均采用气管滴入LPS配合烟熏方法制备COPD模型。丰隆组和尺泽组隔日针刺1次,共治疗12次,实验周期为28 d。观察各组大鼠肠系膜微血管管径和血液流态的变化,并采用放射免疫法测定肺、肠及下丘脑中VIP含量。与正常组相比,模型组大鼠肠系膜微血管血流显著加快(＜0.05),丰隆组显著减慢(＜0.01);与模型组相比,尺泽组及丰隆组大鼠血流均显著减慢(＜0.01)。各组大鼠肠、下丘脑中VIP含量与同组肺中VIP含量比较,差异均具有统计学意义(＜0.01,＜0.05)。尺泽组大鼠下丘脑中VIP含量与模型组比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。尺泽、丰隆穴均可阻逆COPD引起的肠系膜微血管血流加快。尺泽穴可显著降低下丘脑中VIP含量,提示尺泽穴阻逆COPD引起的血流加快与尺泽穴降低下丘脑中VIP含量有关。

针刺疗法;电针;慢性阻塞性肺病;肠系膜微循环;血管活性肠肽;大鼠;穴,尺泽;穴,丰隆

“一穴多病、多穴一病”是针灸穴位效应的主要特点,但针对一穴对多病的作用效应是否相同?针对一病,多穴的作用是否相同?其作用的特点又是什么?这些问题是目前针灸研究亟待回答的问题。

尺泽是肺经合穴,可泻肺气,调胃肠,治疗咳喘、呕吐泄泻[1];丰隆是胃经络穴,其作用为健脾和胃,化痰理气,可治疗胃肠病,又是化痰要穴,用于治疗由痰浊引起的多种病症[2]。肺和大肠相表里,肺和肠为尺泽、丰隆二穴共同作用的部位。但针对慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD),二者对其肺和肠的作用特点及作用途径如何?目前尚未见报道,为此,本实验通过气管滴入LPS配合烟熏建立COPD大鼠模型,观察尺泽、丰隆二穴对肠微循环及肺、肠等组织中VIP含量的影响,以期初步了解同病异穴的作用特点,从而探讨腧穴相对特异性的规律。

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组

健康Wistar大鼠32只(北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂提供),体重(180～220)g,雄性,清洁级实验动物。按随机数字法将32只大鼠分为正常组、模型组、尺泽组和丰隆组,每组8只。

1.2 仪器设备与试剂

XW-B-3冷光源微循环显微检查仪、KEL-2000型显微镜温控仪、SG-H1型恒温恒湿实验系统,均由南京盛光光电医疗仪器有限责任公司提供;HANS-200型韩氏穴位神经刺激仪,南京济生医疗科技有限公司提供;汉医针灸针(0.25 mm×25 mm),天津杏林书院医疗器械有限公司提供;脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),北京环亚泰克生物技术有限公司提供;中南海牌香烟,北京卷烟厂提供;烟熏箱,自制。VIP放免试剂盒购自北京康源瑞得生物技术有限公司。Sn-69513型免疫计数器购自上海核所日环光电仪器有限公司。

1.3 模型制备

模型参照宋一平等[3]制备COPD方法,即采用烟熏加气管注入脂多糖(LPS)的方法,分别于第1、14天采用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)大腿外侧肌肉麻醉,将大鼠固定于解剖台上,将20号静脉套管针沿气管走行快速插入,注入溶于注射用生理盐水的浓度为1 mg/mL的脂多糖0.2 mL,继续注入等体积的空气,将大鼠直立,左右旋转,使脂多糖在肺内均匀分布。第2～13、15～28天将大鼠置于自制烟熏箱中,以铁丝插入香烟过滤嘴,点燃后于箱子顶部小洞深入,每次4支,每日1次,持续1 h,每箱4只大鼠,平均每只大鼠1支烟,周期为28 d。

1.4 治疗方法

取尺泽、丰隆穴。穴位根据大鼠形态、解剖、生理等特点,参照大鼠标准穴位图谱[4]定位。尺泽位于大鼠肘弯横纹偏外的凹陷中;丰隆位于大鼠小腿骨的中点腓骨后缘相当于丰隆穴肌肉中。将毫针刺入穴区3～5 mm,另一针刺入同一穴区皮下,两针接韩氏电针仪,选择疏密波,频率2～100 Hz,强度以动物肢体微微抖动为度,留针20 min。尺泽组和丰隆组从第2天起,隔日下午2时针刺1次,共治疗12次。正常组和模型组期间仅抓取不做针刺治疗。

1.5 实验方法

1.5.1 肠系膜微循环观察方法

采用20%乌拉坦(1 g/L)于大鼠大腿外侧肌肉进行麻醉。将大鼠仰卧固定于操作台,腹正中做切口1～2 cm,取回盲肠部附近的肠系膜平铺于生理盐水恒温(37℃)肠系膜观察盒内,接通微循环显微测试仪,在恒温恒湿实验系统下选择直径为20～100mm、有动静脉伴行的、周围无杂乱血管的肠系膜微血管进行观测,记录肠系膜微血管管径变化情况,于1×、2×、4×镜下采集静态图像,2×、4×镜下采集动态图像。每10 min观察1次,连续观察4次,取均值进行统计。

1.5.2 组织匀浆制作

各组大鼠腹主动脉放血处死后,迅速分离右肺、结肠及下丘脑。生理盐水洗净后,各组织切取约400 mg,与生理盐水按1:4放入匀浆管中,放置在冰上研磨,制成匀浆,以3500 r/min离心15 min,取上清液,﹣20℃冻存备用。

1.6 观察指标

1.6.1 VIP含量

放免法检测肺、结肠及下丘脑VIP含量,按试剂盒说明操作。

1.6.2 肠系膜微血管管径、血液流态

血液流态依据田牛[5]的半定量流速分级测定法结合本实验的特点,将血液流态分为4级。0级为血流停滞不动或血流不可见;Ⅰ级为血流慢,成泥沙状,流动缓慢或前后摆动;Ⅱ级为血流较快,微有颗粒感或有显著的颗粒感;Ⅲ级为血流快,呈光滑的索条状,无颗粒感。

1.7 统计学方法

实验数据用SPSS17.0软件包进行统计学处理,用均数±标准差表示。若数据是正态分布,用单因素方差分析();若数据是非正态分布,用非参检验。等级资料采用秩和检验。以＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

正常组大鼠一般情况良好。模型组、尺泽组及丰隆组大鼠4星期时毛色萎黄,精神不振,厌食,体重显著减轻,喘息,大便干结或不成形,呼吸道分泌物增多;尺泽组与丰隆组大鼠状态较模型组略轻。

2.2 各组大鼠肠微循环及微血管管径变化

选择直径在20～100mm、有动静脉伴行的、周围无杂乱血管的肠系膜微血管进行观测,各组内符合要求的大鼠均为7只。模型组、尺泽组、丰隆组肠系膜微血管管径与正常组比较,均有增加趋势,但差异均无统计学意义(＞0.05);尺泽组、丰隆组肠系膜微血管管径与模型组比较,均有减小趋势,但差异均无统计学意义(＞0.05)。模型组和丰隆组血液流态与正常组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05,＜0.01);尺泽组和丰隆组血液流态与模型组比较,差异均具有统计学意义(＜0.01)。

表1 各组大鼠肠微血管管径及肠微循环血流状态比较

注:与正常组比较1)＜0.01,2)＜0.05;与模型组比较3)＜0.01

2.3 各组大鼠组织内VIP含量比较

由表2可见,各组大鼠肠、下丘脑中VIP含量与同组大鼠肺中VIP含量相比较,差异均具有统计学意义(＜0.01,＜0.05)。正常组大鼠下丘脑中VIP含量与同组大鼠肠中VIP含量相比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。尺泽组大鼠下丘脑中VIP含量与模型组比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。

表2 各组大鼠组织内VIP含量比较 (±s,pg/mL)

注:与同组肺中VIP含量比较1)＜0.01,2)＜0.05;与同组肠中VIP含量比较3)＜0.05;与模型组比较4)＜0.05

3 讨论

现代研究表明,组织内微循环状况可以反映该组织生理病理情况。同时,研究发现针灸对甲皱、胃肠、球结膜、心肌以及四肢等部位的微循环均有显著影响[6]。肠微循环可以反映肠的生理病理情况。本实验通过气管滴注LPS配合烟熏制备COPD模型,其直接损伤部位在肺,模型组肠微血管管径变粗、血流加快,与炎症时微循环变化相符[7],提示肺部炎症可以影响到肠微循环血流状态,可以印证中医学理论中“肺与大肠相表里及肺经下络大肠”。VIP是一种由28个氨基酸组成的肽类物质,属于促胰液素-胰高血糖素家族。有研究表明,VIP具有扩张气道平滑肌、调节黏液分泌和扩血管作用,同时还有调节气道炎症和肺功能的作用[8];VIP是一种抑制性神经递质[9],可松弛消化道平滑肌,参与调解胃肠运动,扩张血管,降低血压,刺激肠液的分泌[10];有研究发现[11],颅脑损伤后,脑脊液中VIP含量明显升高,颅脑损伤后0.5 h及24 h肺组织VIP含量下降,而6 h及24 h血浆和肺组织VIP含量明显升高,可引起VIP在肺组织含量的改变,但肺病引起脑内VIP含量变化却鲜见报道。VIP在模型组中呈升高趋势,说明模型组中微循环的改变与VIP含量的变化有一定的相关性。尺泽穴为肺经合穴,《难经·六十八难》中提出“合主逆气而泄”,临床报道,尺泽穴放血可治疗急性胃肠炎[12];丰隆穴是胃经络穴,具有健脾和胃,为化痰要穴,如《玉龙歌》:“伤风不解嗽频频,久不医时劳便成,咳嗽须针肺俞穴,痰多宜向丰隆寻。”然而,针对COPD中出现的肠微循环改变,二者对其调节作用是否相同?

本实验显示,与模型组相比,尺泽组和丰隆组肠微血管管径均呈减小趋势,且血流速度减慢,说明尺泽穴和丰隆穴均可阻逆炎症引起肠微循环血流变化,但二者未显示显著性差异(＞0.05)。二者在改变脏器中VIP含量的作用不同。尺泽组下丘脑内VIP含量显著下降,同时VIP含量在肺、肠内呈下降趋势,本实验模型为肺病模型,尺泽穴为肺经合穴,其作用直接在肺,可阻逆COPD病理引起的肺部病理改变,降低脑中VIP含量,VIP作为抑制神经递质,其含量的减少使肠微循环管径减小,流速降低,故尺泽穴调节COPD中出现的肠微循环改变的作用途径可能与下丘脑内VIP含量变化相关;丰隆仅使肺和下丘脑中VIP含量有下降趋势,对肠内VIP含量呈增加趋势,考虑为丰隆穴从化痰的角度阻逆COPD中肺的损伤。两组中肠内VIP含量的变化趋势截然相反,其原因有待进一步研究。

有学者认为,穴位的排列具有明显的“趋神经”现象[13],穴位特异性的作用点往往和同神经节段或相邻神经节段的内脏相关性密切。神经解剖学[14]中将人体体表感觉和肌肉运动与脊神经的节段性一一对应,同时,内脏的感觉和运动也存在脊神经的节段对应性。肠所对应的神经节段为T6-L3,与丰隆穴所处神经节段L4-S2相邻,与尺泽穴对应的神经节段C5-6相距甚远,但为何对肠中VIP含量的改变丰隆穴效果弱于尺泽穴?考虑为丰隆穴对肠的作用途径是通过脊髓反射,而未通过高级中枢,该作用的特点多为反应快,但作用时间短,本实验周期较长,脊髓反射的效应消失而中枢效应开始显现,故出现丰隆组肠内VIP含量呈上升趋势,尺泽组脑内VIP含量显著下降,肠内VIP含量呈下降趋势。

研究发现,在肺组织中存在大量的特异性VIP受体[15-16],本实验结果显示,VIP在肺内含量显著高于肠和下丘脑含量,与既往研究发现一致,本实验通过气管滴入LPS配合烟熏建立动物模型,其直接损伤部位在肺,而实验结果显示,与正常组相比,模型组肺、肠和下丘脑内VIP含量均有上升趋势,说明在一个脏器炎症损伤时,可以引起机体多个脏器的反应,且有高级中枢参与;尺泽组下丘脑中VIP含量显著下降,同时,尺泽组和丰隆组中肺、肠内VIP含量均呈下降趋势,可以从一个方面证明笔者之前提出的假说[17]——“脏腑组织存在相互通用的物质源,针灸穴位效应的本质是对相关脏腑组织之间物质的调配及其功能调节”。

[1] 旷秋和.尺泽穴的临床应用[J].针灸临床杂志,1999,15(9):56- 57.

[2] 陈明,张唐法,张红星,等.丰隆穴的临床应用[J].湖北中医杂志, 2006,28(11):18-19.

[3] 宋一平,崔德健,茅培英.慢性阻塞性肺病大鼠模型的建立及药物干预的影响[J].军事进修学院学报,2001,22(2):99-102.

[4] 林文注.实验针灸学[M].上海:上海科学技术出版社,1994:290.

[5] 田牛.微循环方法学[M].北京:原子能出版社,1993:175.

[6] 陈文杰,田牛,赵国忠.微循环的理论与应用[M].北京:人民卫生出版社,1987:23.

[7] 黄玉芳.病理学[M].北京:中国中医药出版社,2003:56.

[8] 王科闯.肺肠合治法对哮喘豚鼠肺肠组织神经肽SP、CGRP、VIP影响的实验研究[D].成都中医药大学硕士学位论文,2006:14-27.

[9] 陈兰,刘诗.肠神经系统与慢传输型便秘[J].国际消化病杂志, 2007,27(3):178-179,185.

[10] 秦震声,王轶,赵耀,等.舒肝健脾颗粒对溃疡性结肠炎大鼠模型VIP和IL-10水平的影响[J].吉林中医药,2007,27(3):48-50.

[11] 孟毅,罗晓阳,曹治,等.脑损伤对大鼠血浆和肺组织血管活性肠肽含量的影响及意义[J].宁夏医学杂志,1998,20(4):224-225.

[12] 黄金宝,彭素敏.尺泽静脉放血治疗急性胃肠炎[J].中国针灸, 1999,19(7):426.

[13] 王佩,王少荣.根据神经节段支配理论探讨针灸取穴规律[J].针刺研究,1998,23(3):163-167.

[14] 白丽敏,李亚东.神经解剖学[M].北京:中国中医药出版社,2003: 53-54,155.

[15] Veliçelebi G, Patthi S, Provow S,. Structural characterization of vasoactive intestinal peptide receptors from rat lung membranes[J]. Ann N Y Acad Sci, 1988,527:266-281.

[16] Hassan M, Refai E, Andersson M,. In vivo dynamical distribution of 131I-VIP in the rat studied by gammaamera[J]. Nucl Med Biol, 1994,21(6):865-872.

[17] 解秸萍.针灸穴位效应的本质——生命物质的调配[J].中华中医药杂志,2009,24(10):1263-1267.

Effects of Electroacupuncture at Different Points on Mesenteric Microcirculation and the VIP Content of Different Viscera in COPD Rats

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,100029,

To observe the effects of electroacupuncture at points Fenglong(ST40) and Chize(LU5) on mesenteric microcirculation and the distribution of vasoactive intestinal peptide (VIP) in different viscera in rats with chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), investigate the characteristics of the influences of homo-meridian points and related meridian points on the lung and intestine and explore regularities in the relative specificities of acupuncture points.Thirty-two male Wistar rats were randomly allocated to normal, model, Chize and Fenglong groups, 8 rats each. A COPD model was made by intratracheal instillation of LPS with the cooperation of fume smoking in all groups except the normal group. Fenglong and Chize groups were given acupuncture once every other day, for a total of 12 treatments. The experimental period was 18 days. Mesenteric microvascular caliber and blood flow were measured in each group of rats. Pulmonary, intestinal and hypothalamic VIP contents were determined by radioimmunoassay.Compared with the normal group, blood flow velocity increased significantly in the model group (＜0.05) and decreased significantly in the Fenglong group (＜0.01). Compared with the model group, blood flow velocity decreased significantly in the Chize and Fenglong groups (＜0.01). There was a statistically significant difference between intestinal or hypothalamic VIP content and pulmonary VIP content in each group of rats (＜0.01,＜0.05). There was a statistically significant difference in hypothalamic VIP content between the Chize and model groups of rats (＜0.05).Points Chize(LU5) and Fenglong(ST40) can both prevent a COPD-caused increase in mesenteric microvascular blood flow velocity. Point Chize(LU5) can significantly reduce hypothalamic VIP content, suggesting that point Chize(LU5) preventing a COPD-caused increase in blood flow velocity is related to it reducing hypothalamic VIP content.

Acupuncture Therapy; Electroacupuncture; Chronic obstructive pulmonary disease; Mesenteric microcirculation; Vasoactive intestinal peptide; Rats; Point, Chize(LU5); Point, Fenglong(ST40)

1005-0957(2013)07-0604-04

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2013.07.604

2013-01-23

北京中医药大学自主选题项目在读研究生资助项目(2011- JYBZZ-XS099)

李志同(1986 - ),男,2010级硕士生

解秸萍(1961 - ),女,教授,研究方向为腧穴特异性研究, E-mail:xiejieping@sina.com