国产与进口吲达帕胺片在健康人体的生物等效性分析

潘学智

吲达帕胺是一种具有利尿作用和钙拮抗作用的药物，是新型的抗高血压药物，对血管平滑肌的选择性比较高[1]，可以降低血管外周阻力；还可以通过抑制肾皮质稀释段对钠的重吸收[2]，增加尿钠和尿氯的排出量，因此，增加了尿量，发挥了抗高血压作用。吲达帕胺是一种用量小、副作用少、疗效显著、价格经济实惠的新型抗高血压药物[3]，属于二氢吲哚类利尿药，方便长效，对心血管系统有保护作用，不致引起体位性低血压、心动过速和潮红，尤其对轻度和中度高血压疗效比较好。对样品中吲达帕胺的测定方法已有许多报道，由于吲达帕胺在红细胞中的分布比较多，因此，测定全血中吲达帕胺的含量已成为研究药代动力学的首选方法。本试验以进口吲达帕胺作为参比试剂，国产片作为受试试剂，采用HPLC-MS/MS分析方法测定血浆中吲达帕胺浓度在健康人体中药代动力学，为临床用药提供合理的依据。

1 资料与方法

1.1 受试者选择 6 0 名健康男性受试者，平均年龄（2 5.5±5.8）岁，平均身高（1.7 3±0.0 6）m，平均体重（65.7±7.2）kg，民族均是汉族。所有受试者通过体格检查和实验室检查（血常规、尿常规、心电图、肝功能、肾功能），未发现肝、心、脾、肺、肾、消化道、神经系统和代谢异常以及精神异常等疾病，经询问也没有既往病史，身体状况良好。在进行试验前的一个月以及实验期间没有服用过其他任何药物，也没有吸烟、酗酒等不良嗜好[4]。此次指定的实验方案经白求恩国际和平医院医学伦理委员会批准通过，且所有受试者均签署了知情同意书。

1.2 药品、试剂与仪器的选择 受试制剂：吲达帕胺片，批号：081010，规格：2.5 mg/片，由北京国药集团股份有限公司生产；参比制剂：吲达帕胺片，批号：687669，规格：2.5 mg/片，由法国施维雅药厂生产；吲达帕胺标准品，批号：100257—200002，含量99%，由济南市高华制药厂提供；瑞格列奈钙对照品(内标)，批号：100753—200501，由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，甲酸、乙酸乙酯为分析纯，实验用水为市场上销售的纯净水；空白人血浆由白求恩国际和平医院采供血中心提供。仪器 1100 型高效液相色谱仪,包括: 四元输液泵、在线脱气机、柱温箱和自动进样器,配备HP 1049 电化学检测器，美国Agilent公司产品;API-4000 型三重四级杆串联质谱仪和Analyst 1.4软件, 美国ABI公司产品。BP 211 D型十万分之一天平,德国Sartorius公司产品;XW-80 A旋涡混合器,上海精科实业有限公司产品; 80-2 型离心机,姜堰市新康医疗器械有限公司产品。

1.3 给药方法以及样品采集 采用自身对照随机交叉试验的方法，将60 名受试者随机分为两组，按照不同的顺序先后给予国产和进口吲哒帕胺片，两次用药间隔一周进行清洗。受试者在试验的前一天晚上进食清淡饮食以后，夜里禁食10 h，试验的当天早晨空腹服药，用温开水500 mL送服2.5 mg的吲哒帕胺片，服药2 h以后可以饮水，服药4 h以后统一进食标准午餐，10 h以后统一进食标准晚餐。给药前及给药后0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，3 h，4 h，6 h，8 h，12 h，

24 h，48 h，72 h时间点取肘静脉血约5 mL，放于被肝素化的试管中，6000 r/min离心10 min，分离血浆，于-50℃进行保存直至测定用。停药一周以后，进行交叉实验。

1.4 血样品的测定 血浆样品的预处理：用精密仪器量取血浆样品40 mL，放于1.5 mLEP的试管中，加入内标工作液(瑞格列奈钙乙腈溶液)40 (μL，涡旋混合均匀，加入乙腈300 mL，涡旋混合均匀，1×104r/min，4℃低温离心10 min，取上清液4μL样，-50℃下氮气吹干，最后进行HPLC—MS／MS分析。

2 方法学考察与评价

2.1 专属性 在设定好色谱的情况下进行测量，空白血浆中的内源性物质不影响吲哒帕胺的测定，吲哒帕胺的保留时间约为6 min。

2.2 标准曲线制备 将吲哒帕胺标准液用空白血浆稀释成不同浓度的标准血样，按照样品的处理方法进行处理，以样品的峰面积与内标峰面积之比对药物浓度进行回归处理。

2.3 回收率及精密度 配制浓度为1.73 ng/mL、16.2 ng/mL、86.4 ng/mL的吲达帕胺标准血浆各5 份，按上法平行操作进行测定，得到的日内相对标准差均＜15%，平均相对回收率分别为91.9%、98.8%和101.2%。经过处理以后，血样在24 h内比较稳定。每天配置以上浓度的血浆，连续测量几天，得到的日间相对标准差均＜15%。

3 统计学方法

应用SPSS 11.0 和DAS 10 软件进行数据分析。AUC用梯形面积法计算;Tmax和Cmax为实测值。

4 结果

4.1 血药浓度时间关系 经测量绘图得出，60 名健康志愿者单剂量口服试验制剂和参比制剂后的平均浓度时间曲线相似。

4.2 药代动力学参数 60 名受试者单剂量服用两种药以后，其血药浓度时间关系用相关软件处理以后，得到的药代动力学参数见表1。

表1 60 名受试者单剂量服用两种药物的药代动力学比较

4.3 生物等效性评价 对AUC和Cmax进行方差分析和单侧t检验。受试制剂AUCo∞m的90%可信区间为124.4%～110.4%，AUCo∞的90%可信区间是101.8%～111.2%，均在参比试剂的80%～120%以内；受试制剂的Cmax 90%可信区间为95.5%～110.3%，在参比制剂的75%～140%之间。实验结果表明受试制剂与参比制剂在生物学上等效。

5 讨论

经过参考有关的文献报道，本研究采用HPL-MS/MS法，测定健康人血浆中吲哒帕胺的浓度，方法简单易行，其中，精密度、准确度、特异度和灵敏度均符合药代动力学研究的指导原则和分析生物药品的要求[5]，所得的药代动力学参数可以为吲哒帕胺的研究提供参考。在本次实验建立色谱条件下，吲哒帕胺以及内标的测定，均不受血浆中内源性物质的干扰，其中精密度和回收率均能达到生物样本测定的要求。

本研究采用的是HPL-MS/MS法，测定了60 例成年健康男性受试者自身交叉口服单位剂量口服参比制剂（进口的吲达帕胺片）和受试制剂（国产的吲达帕胺片）2.5 mg后的血浆药物浓度。两种制剂在成年男性健康者中的代谢过程基本相似，所得到的全血中吲达帕胺的血药浓度及主要药代动力学参数与国外报道的文献基本相似。实验所得到的药代动力学参数经过方差分析，经过比较两者差异没有统计学意义（P>0.05）；经过生物等效性分析，表明进口吲达帕胺片与国产吲达帕胺片在体内吸收、分布与消除的过程基本相似，两种制剂为生物等效制剂。而且在试验过程中未发现不良反应。

[1]夏春华，王晓华，熊玉卿，等.高效液相一质谱法测定人体血浆中吲达帕胺的浓度及其生物等效性研究[J].中国现代应用药学杂志，2007,24(2)：136-138.

[2]佟玲，齐丹丹，毕开顺，等.高效液相色谱一串联质谱法测定人血浆中吲达帕胺及其生物等效性研究[J].中国新药与临床杂志，2006,25（11）：851-855.

[3]金智敏.吲哒帕胺对高血压高危患者血清肌酐、尿酸、血钾及左室肥厚的长期影响[J].高血压杂志,2002,13(3):235-239.

[4]陈端霞,游凯,傅如南,等.人血清中吲达帕胺的高效液相色谱法测定[J].中国医学科学院学报,2005,12(4):286-289.

[5]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志，1996,16（5）：343-346.