Annexin－A1在胃食管交界处腺癌中的表达及临床意义

陶雪梅，张国梁，鲍文漪

（1.天津医科大学第一中心临床学院，天津300192；2.苏州大学附属儿童医院 消化科，3.天津医科大学第一中心医院 消化内科，天津300192）

胃食管交界处腺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。因为胃食管交界处腺癌所处的特殊部位，其早期症状轻微或不明显，患者就诊时肿瘤多已进入中晚期，所以治疗效果较差。近年来由于诊断技术的提升，胃食管交界处腺癌的检出率也明显提高，人们对其发生机制的研究也越来越引起重视。Annexin－A1（膜联蛋白－A1）属于钙磷脂结合蛋白家族（annexins）的重要成员之一，钙磷脂结合蛋白家族广泛参与炎症反应、信号传导和凋亡等生物学过程［1］，且相关研究表明其在肿瘤发生发展中也起作用，能够调控肿瘤的增殖与凋亡，导致肿瘤的发生，但是其在不同的组织中表达不一致，具有组织特异性。目前国内外对于Annexin－A1在胃食管交界处腺癌组织中的检测报道较少，本研究采用免疫组织化学S－P法检测Annexin－A1蛋白在胃食管交界处腺癌组织中的表达情况，分析其在胃食管交界处腺癌发生、发展中的作用，为胃食管交界处腺癌早期诊断及临床治疗提供一定的理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取天津市第一中心医院2009年1月至2011年12月收治的手术切除及内镜活检的经临床病理确诊的胃食管交界处腺癌组织标本66例，上皮内瘤变组织20例，正常黏膜组织20例，所有标本均为病理科存档蜡块。所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。贲门腺癌患者中，男52例，女14例；年龄38－87岁，中位年龄72岁；临床病理分期参照国际抗癌联盟（UICC）新颁布的胃癌TNM分期标准：其中Ⅰ－Ⅱ期19例，Ⅲ－Ⅳ期47例；组织分化程度：其中高中分化36例，低分化30例；浸润深度：侵及浆膜13例，未及浆膜53例；有淋巴结转移28例，无淋巴结转移38例；有远处转移18例，无远处转移48例。

1.2 方法 Annexin－A1鼠抗人单克隆抗体工作液购自北京中原公司，工作浓度为1∶100；SP试剂盒及DAB显色剂购自福州迈新生物有限公司；实验参照试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 免疫组织化学结果判定 Annexin－A1阳性细胞为棕黄色颗粒，位于细胞质内或细胞膜，基质内少量炎性细胞、淋巴细胞。染色阳性见图1，染色阳性结果判定采用双盲法，根据阳性细胞所占5个以上高倍镜视野比例计数分为4类：5%－25%为1分；26%－50%为2分；51%－75%为3分；＞75%为4分。染色强度分类：浅黄色为1分；黄或深黄色为2分；褐或棕褐色为3分。两者计分相乘大于3分为阳性。

1.4 统计学分析 采用SPSS17.0软件对数据进行处理，率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman法，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中Annexin－A1蛋白的表达 结果显示：Annexin－A1蛋白在胃食管交界处正常黏膜组织、上皮内瘤变组织及腺癌组织中的阳性表达率依次增高，差异具有显著意义（P＜0.05）（见表1）。

表1 Annexin－A1蛋白在胃食管交界处不同组织中的表达

图1 A 胃食管交界处腺癌Annexin－A1蛋白阳性表达（SP×200）图1B 胃食管交界处上皮内瘤变Annexin－A1蛋白阳性表达（SP×200）图1C 胃食管交界处正常黏膜Annexin－A1蛋白阴性表达（SP×200）

2.2 Annexin－A1蛋白的表达与胃食管交界处腺癌临床病理特征的关系 经统计学处理，Annexin－A1在胃食管交界处腺癌的阳性表达率与肿瘤临床病理分期、组织分化程度、淋巴结转移情况及浸润深度关系较大。在肿瘤临床病理分期晚、组织分化程度低、有淋巴结转移，未及浆膜者表达较高，而在临床病理分期早、组织分化程度高、无淋巴结转移、侵及浆膜者表达较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；但与年龄、性别及远处转移无明显关系（P＞0.05）（见表2）。

3 讨论

Annexin－A1是Annexins超家族的一个成员，具有Annexins超家族所共有的中心结构域和N端序列，是磷脂酶A2（c－PLA2）的抑制蛋白，也是表皮生长因子受体（EGFR）激酶和蛋白酶C的底物［2］，参与抗增殖、调节分化、促进凋亡等多种细胞生理过程［3］，其异常表达可造成细胞生长调控紊乱，从而影响肿瘤的形成［4］。

表2 胃食管交界处腺癌组织中Annexin－A1蛋白的表达与临床病理参数的关系

近年来的研究表明Annexin－A1在正常组织和肿瘤组织均有表达，且其在肿瘤中的表达具有组织特异性［5］，例如外周血白细胞、结肠癌和胰腺癌中Annexin－A1表达增高，而在食管鳞癌、前列腺癌、头颈部鳞癌中表达下调［4］。一般情况下表达程度高的组织，发生恶变后表现为不同程度的缺失；相反，通常不表达或表达低的组织恶变后却出现表达上调。在本研究中我们采用免疫组织化学方法针对Annexin－A1在胃食管交界处不同病变组织中的表达变化进行了初步研究，探讨其在胃食管交界处组织中的表达情况。实验结果显示Annexin－A1在胃食管交界处腺癌中的阳性表达率较正常黏膜及上皮内瘤变组织的高，差异具有统计学意义（P＜0.05），这与Yu G 等［6］在胃癌和谭等［7］在食管鳞癌中的研究结果不一致，提示胃食管交界处腺癌有其自己特殊的致癌机制，其发生机制有别于胃癌和食管癌，同时Annexin－A1在胃食管交界处腺癌中的过表达也体现了Annexin－A1在胃食管交界处组织表达与人体其他组织相比的特异性，这对于认识胃食管交界处腺癌提供了一定的线索。

此外，本实验中Annexin－A1在胃食管交界处腺癌中的异常表达与Su N等［8］在结肠癌中的研究结果较一致，提示Annexin－A1的高表达可能参与了胃食管交界处腺癌的恶变过程，Annexin－A1的在蛋白水平的表达改变可能是癌变过程中的先于形态学异常的早期变化，对胃食管交界处腺癌的早期诊断可能具有一定的参考价值。我们研究发现Annexin－A1蛋白在正常黏膜组织，上皮内瘤变及腺癌组织中的表达呈现逐渐递增的趋势，提示Annexin－A1在胃食管交界处正常黏膜—上皮内瘤变—腺癌组织轴中的表达发生了不同程度的变化，更直观的比较了同一个体肿瘤的进展，从分子水平上体现了生物学行为逐渐进展的过程，这对于认识胃食管交界处腺癌的形成及有效预防起到一定的启示作用。

Annexin－A1在胃食管交界处腺癌中的阳性表达与肿瘤临床病理分期、组织分化程度、淋巴结转移情况以及浸润深度关系较大。Annexin－A1在肿瘤临床病理分期晚、组织分化程度低、有淋巴结转移、未及浆膜者表达较高，而在临床病理分期早、组织分化程度高、无淋巴结转移、侵及浆膜者表达较低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；这与Liu等［9］在肺腺癌中报道的较一致，提示Annexin－A1的表达改变可能参与了胃食管交界处腺癌的浸润、转移等恶性生物学行为。关于Annexin－A1参与肿瘤转移及侵袭能力的机制，有研究报道［10］Annexin－A1可能通过甲酰肽受体起作用，组织中过表达的Annexin－A1激活甲酰肽受体，进而引起细胞内一系列信号途径的传递，导致肿瘤的发生及细胞侵袭。因此在胃食管交界处腺癌中检测Annexin－A1的表达有助于胃食管交界处癌恶性程度的评估及预测肿瘤发展趋势，但是Annexin－A1的表达与年龄、性别及有无远处转移无关（P＞0.05），提示肿瘤的远处转移可能有其他原因参与，尚有待探讨。

综上所述，Annexin－A1的高表达可能在胃食管交界处腺癌的发生、发展中起着一定的作用，检测其表达对胃食管交界处腺癌的早期诊断和评估预后有一定的参考价值。

［1］Fatimathas L，Moss SE.Annexins as disease modifiers［J］.Histol Histopathol，2010，25（4）：527.

［2］Grewal T，Enrich C.Annexins－modulators of EGF receptor signalling and trafficking［J］.Cell Signal，2009，21（6）：847.

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［4］Mussunoor S，Murray GI.The role of annexins in tumour development and progression［J］.J Pathol，2008，216（2）：131.

［5］Dreier R，Schmid KW，Gerke V，et al.Differential expression of annexins I，II and IV in human tissues：an immunohistochemical study［J］.Histochem Cell Biol，1998，110（2）：137.

［6］Yu G，Wang J，Chen Y，et al.Tissue microarray analysis reveals strong clinical evidence for a close association between loss of annexin A1expression and nodal metastasis in gastric cancer［J］.Clin Exp Metastasis，2008，25（7）：695.

［7］谭婉燕，熊枝繁.AnxA1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义［J］.胃肠病学和肝病学杂志，2010，19（9）：823.

［8］Su N，Xu XY，Chen H，et al.Increased expression of annexin A1is correlated with K－ras mutation in colorectal cancer［J］.Tohoku J Exp Med，2010，222（4）：243.

［9］Liu YF，Zhang PF，Li MY，et al.Identification of annexin A1as a proinvasive and prognostic factor for lung adenocarcinoma［J］.Clin Exp Metastasis，2011，28（5）：413.

［10］Khau T，Langenbach SY，Schuliga M，et al.Annexin－1signals mitogen－stimulated breast tumor cell proliferation by activation of the formyl peptide receptors（FPRs）1and 2［J］.FASEB J，2011，25（2）：483.