原发性肝癌患者尿8－羟基脱氧鸟苷水平的观察

唐 毅，李辛平，唐振勇，刘丽丽，唐耘天＊

（1.广西医科大学第一临床医学院本硕062班，广西 南宁530021；2.广西壮族自治区人民医院 肝胆外科，广西 南宁530021；3.广西医科大学第一临床医学院本硕074班 ，广西 南宁530021）

原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，预后差。我国是肝癌大国，全球50%以上的肝癌病例发生在我国，且发病率呈逐年上升的趋势［1］。但迄今为止，其确切的发病机制尚未明了。有研究显示：DNA氧化损伤的主要产物8－羟基脱氧鸟苷（8－OHdG）在体内的长期积累会增加自发性突变率，与癌症的发生和发展有关联［2］。本研究通过ELISA检测法测定肝癌患者的尿8－OHdG水平，并与健康体检者进行比较，以探讨氧化损伤在肝癌发生发展中的作用，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 实验组：选择广西壮族自治区人民医院肝胆外科2011年8月至2012年10月期间收治的男性肝癌患者100例，年龄21－74岁，平均年龄为49.24±10.36岁。所有患者无严重心、肺和肾等重要脏器的急慢性疾病史，均经过术后病理学检查或经皮穿刺活检确诊为原发性肝细胞性肝癌；对照组：该院门诊男性健康体检者100例，年龄25－65岁，平均年龄为48.60±9.93岁。两组研究对象的一般资料经过统计学分析比较，无明显差异。

1.2 标本采集 采集肝癌患者以及健康体检者清晨中段尿，留取量各约10ml。标本不加任何防腐剂，采集后立即转移至－80℃冰箱中冷冻保存待用。

1.3 主要试剂和仪器 人8－OHdG单克隆抗体试剂盒以及人肌酐ELISA试剂盒均由BlueGene Biotech公司提供，主要仪器为酶联免疫监测仪（型号GF－M3000，购于山东高密彩虹分析仪器有限公司）。

1.4 尿8－OHdG检测方法 将尿样室温解冻，震荡混匀后离心15min（3 000r／min），取上清100μl。以ELISA法严格按试剂盒说明书操作检测尿8－OHdG。由于尿中的8－OHdG受尿浓缩程度的影响，最终数值采用尿肌酐（creatine，Cr）值较正，单位为（8－OHdG）ng／mgCr。尿肌酐亦采用 ELISA 法检测。

1.5 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件，各项数据以均数±标准差（±s）表示，肝癌组与实验组间相对表达水平的比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 8－OHdG标准曲线的制作 取8－OHdG标准液（0、10、25、50、100、250ng／mL）和空白对照（蒸馏水），采用相同测定方法用酶标仪测定光吸收值。以450nm下吸光度值为纵坐标，以8－OHdG含量（ng／ml）的对数值为横坐标，绘制标准曲线，见图1。

图1 ELISA方法测定8－OHdG含量的标准曲线

2.2 尿8－OHdG的检测 根据各尿样本在450nm下的吸光度值，结合8－OHdG含量的标准曲线，计算肝癌患者（HCC）和健康对照组尿8－OHdG的含量。经t检验，肝癌患者和健康体检者两组人群尿8－OHdG水平比较差异具有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 肝癌患者和健康体检者尿8－OHdG水平的比较

3 讨论

8－OHdG 是活性自由基（reactive oxygen species，ROS）攻击DNA分子中的鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物，由于其为代谢终产物，具有形成途经单一、在体内稳定、易于检测等优点，目前已成为评价机体内DNA氧化损伤水平的最常用的生物标志物。8－OHdG产生后无需进一步代谢而经肾脏排泄，其在尿中的含量不受饮食等因素影响，因此尿8－OHdG的含量可以反映机体氧化损伤的程度。既往研究证实，8－OHdG具有突变性，可以在DNA复制时引起G：C→T：A的颠换而导致点突变［3］。8－OHdG异常表达与恶性肿瘤的发生、发展密切相关，并且与很多恶性肿瘤的预后有相关性［4－8］。肝癌是常见的恶性肿瘤，其确切发病机制目前尚未被阐明。肝炎病毒感染、黄曲霉毒素污染、饮酒等暴露是肝癌发病的高危因素，其可引起肝细胞DNA氧化损伤，使损伤累积导致细胞恶性转化，并被认为此为肝癌的发病重要机制［9］。

研究表明，体内8－OHdG水平与年龄、性别、吸烟、剧烈运动、职业暴露、辐射以及糖尿病、肿瘤、心血管疾病等多因素有关［10－15］。本研究对象入组时严格排除了上述因素的影响，通过ELISA法检测肝癌患者尿8－OHdG的含量以研究DNA氧化损伤与肝癌发生发展的关系。具有：标本采集简单、无创伤、易于保存、检测指标稳定性强；检测方法对实验仪器的要求低；所需时间少、试样的制备简单、分析所需样品量少等诸多优点［16］。可作为一种大量人群中的肝癌普查筛查工具，该方法具有推广的可能性。

本研究结果显示：健康体检者尿8－OHdG的含量为12.21±4.51ng／mgCr，与其他研究结果接近［11，17，18］。肝癌患者尿8－OHdG的含量为16.12±5.30ng／mgCr，显著高于健康体检者，差异具有统计学意义（P＜0.01），这与已有的文献报导结果相一致［17］。故本研究的结论为，DNA氧化损伤水平与肝癌的发生发展具有密切的关系，测定尿8－OHdG的含量有助于肝癌的早期诊断，该方法有望成为肝癌筛查与诊断的新工具。

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