女贞叶醇提取物抗炎镇痛作用的实验研究

童东锡?唐坤?曾颂?刘新云?黄革丽?潘珏

[摘要] 目的 研究女贞叶醇提取物抗炎镇痛作用。 方法 选用昆明小鼠和大鼠，每个实验随机分5组，生理盐水组、阳性对照组、女贞叶醇提取物低、中、高剂量组（小鼠10、20、30 g/kg，大鼠5、10、15 g/kg），分别采用小鼠醋酸致痛、热板致痛，二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀。观察女贞叶醇提取物抗炎镇痛作用。 结果 女贞叶醇提取物高剂量能显著提高小鼠痛阀值（P<0.01），并能抑制小鼠耳廓和大鼠足趾肿胀（P<0.05），能减少角叉菜胶所致大鼠炎性渗出液中前列腺素E2的含量。 结论 女贞叶醇提物具有一定抗炎镇痛作用。

[关键词] 女贞叶；醇提取物；抗炎；镇痛

[中图分类号] R971+.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）06-26-03

女贞叶是木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的叶，具有消肿止痛、祛瘀散结、生肌及收敛防腐之功效。主要用于治疗头目昏痛，风热赤眼，疮肿溃烂，烫伤及口腔炎等疾病[1]。女贞叶在生药学、化学成分及临床应用方面均有报道[2]，到目前为止，未见有关其抗炎镇痛方面的药理研究。本项目以女贞子叶作为研究对象，观察其醇提物的抗炎镇痛作用，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV2550型紫外分光光度计（日本岛津公司），循环水真空泵（SHZ-Ⅲ），旋转蒸发器（RE-52AA）（上海亚荣生化仪器厂），HH-W600型数显三用恒温水箱（金坛市科析仪器有限公司），离心机（美国雅培），BT2245型电子公析天平（上海精科天平）。

1.2 试药

女贞叶自采于桂林市郊，药材经桂林医学院药学系天然药物化学教研室唐爱莲副教授鉴定为木犀科植物女贞

Ligustrum lucidum Ait.的叶。将女贞叶干燥后粉碎为粗粉，用6倍75%乙醇于80℃水浴中回流提取2次，减压回收乙醇浓缩成1︰1药液待用[3]；吲哚美辛肠溶片（广东华南药业集团有限公司，批号：20120528）；罗通定片（桂林裕民制药有限公司，批号：20120402）。

1.3 动物

SPF级昆明种小鼠150只，体重（19±2）g；雌雄各半SPF级SD大鼠25只，体重（150±16）g，购自桂林医学院实验动物中心，实验动物使用许可证号SCXK（桂）2007-0001。

2 方法

2.1 对小鼠热板反应的影响[4]

筛选合格的小鼠50只，随机分为5组，即生理盐水组，阳性组（罗痛定片0.02 g/kg），女贞叶醇提取物3组（按生药量计10、20、30 g/kg），ig给药，每天1次，生理盐水组ig给同等容积的生理盐水，连续7 d，于末次给药后，30、60、120 min分别测定小鼠痛阀值。

2.2 对小鼠醋酸致扭体反应的影响[5]

取小鼠50只，分组给药按“2.1”项下方法，末次给药30 min后每只小鼠ip 0.6%醋酸溶液0.1 mL/10 g，观察小鼠15 min内出现扭体的次数，并按下公式计算扭体反应抑制率。扭体抑制率=（生理盐水组平均扭体数-给药组平均扭体数）/生理盐水组平均扭体数×100%。

2.3 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

取小鼠50只，♀♂各半，随机分为5组，对照组（生理盐水20 mL/kg）阳性组（吲哚美辛肠溶片20 mg/kg）和女贞叶醇提取物3组（10、20、30 g/kg），ig给药，连续7 d，末次给药后60 min，右侧耳廓正反面均涂抹二甲苯0.05 mL，左耳涂抹等量生理盐水对照，30 min后断颈处死，沿耳廓基线剪下小鼠两耳，打下左右耳对称部位耳片并称量。按下公式计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率。

肿胀度（mg）=右耳片（mg）-左耳片质量（mg）。

肿胀抑制率（%）=（生理盐水组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/生理盐水组平均肿胀度×100%。

2.4 对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀及炎性渗出液中的前列腺素PGE2含量的影响[6]

取大鼠25只，随机分为5组，即生理盐水组，阳性组（吲哚美辛肠溶片0.015 g/kg），女贞叶醇提取物3组（按生药量计5、10、15 g/kg），ig给药，连续4 d，末次给药后用毛细管放大法测量右后足容积，并标出测定记号线，然后在每只大鼠右后足踞皮下注射1%角叉菜胶混悬液0.1 mL，致炎后，每隔1 h测1次右后足趾容积，连续4次，并按下公式计算肿胀率。断颈处死大鼠，按标记线剪下右后足称重并剪碎，用4 mL生理盐水和1 mL甲醇浸泡10 h，4500 r/min离心3 min，取上清液0.6 mL加0.5 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液2 mL，在50℃水溶中异构化20 min，加甲醇至10 mL，在278 nm波长处测吸光度（A），以每1 g炎性组织相当的A值表示PGE2含量（A/g足重）。

肿胀率（%）=（致炎后足容积-致炎前足容积）/致炎前足容积×100%。

2.5 统计学处理

数据的统计分析运用EXCEL软件的数据分析功能，计量资料用（）表示，统计采用组间对照进行t检验，P<0.05具有统计学意义。

3 结果

3.1 对小鼠热板反应的影响

与生理盐水相比，女贞叶提取物低、中剂量组没有镇痛作用，高剂量组小鼠在3个测定时段痛阈值差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），其中在120 min时，镇痛作用最明显，见表1。

3.2 对小鼠醋酸扭体反应的影响

与生理盐水组相比女贞叶提取物低剂量组小鼠扭体次数有所减少，但不明显，女贞叶提取物中、高剂量组小鼠扭体次数差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。扭体抑制率分别为27.0%、49.5%，提示女贞叶提取物对小鼠因醋酸刺激引起的疼痛有一定的镇痛作用。见表2。

3.3 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

女贞叶低、中剂量组小鼠耳廓肿胀与生理盐水组比较差别不明显，高剂量组小鼠耳廓肿胀差异有统计学意义（P<0.05），耳廓肿胀抑制率14.67%，见表3。

3.4 对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀及炎性渗出液中前的PGE2含量的影响

与生理盐水组比较，女贞叶醇提取物低、中剂量组对大鼠足趾肿胀没有明显抑制作用，而高剂量组在180～240 min内对大鼠足趾肿胀有抑制作用（P<0.05），提示女贞叶醇提取物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的抑制作用时间较长，见表4。与生理盐水组比较，女贞叶醇提取物高剂量组大鼠角叉菜胶炎性渗出液中PGE2含量显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），而低、中剂量组大鼠炎性渗出液中PGE2变化不明显，见表5。

4 讨论

女贞叶微苦、性平无毒，具有消炎消肿、祛瘀散结、生肌

止痛及收敛防腐之功效。故推测女贞叶有抗炎镇痛作用。本实验运用扭体法和热板法研究女贞叶醇提取物对小鼠的镇痛作用，结果显示女贞叶醇提取物对醋酸引起的疼痛有抑制作用。并呈量效关系。而热板实验显示，女贞叶醇提取物低、中剂量组无镇痛作用，高剂量组有明显的镇痛作用。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验研究表明。

女贞叶醇提取物高剂量对小鼠耳廓和大鼠足趾肿胀有一定抑制作用，并能减少大鼠炎性足渗出液中PGE2的含量，提示女贞叶醇提取物抗炎作用可能与抑制炎性部位PGE2的生成有关。女贞叶含有多种化学成分，醇提物中有熊果酸、齐墩果酸、丁香甙、甘露醇、大波菊甙等，具有广泛的生物活性，其中熊果酸具有抗炎镇痛、抗菌、安定和降温等作用。本研究结果与女贞叶消炎、消肿、止痛功效具有一致性，综上所述，女贞叶醇提取物有抗炎镇痛作用。

[参考文献]

[1] 中药大辞典编委会.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1985：239.

[2] 陆林杰.女贞叶的研究开发利用及前景[J].中华西医杂志，2001，2（16）：1495.

[3] 石静，徐云玲，聂晶.女贞叶三萜类化学成分研究[J].时珍国医国药，2012，23（6）：1568.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：347，350.

[5] 陈萍，王爱武，王福文.口溃宁颗粒对小鼠的抗炎和镇痛作用[J].中国医院药学杂志，2012，32（1）：26.

[6] 秦贻强，李江，蔡小玲.红鱼眼醇提物镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国药房，2011，22（43）：4046.

（收稿日期：2013-02-01）