加味定喘片乙醇提取工艺的研究

李文烈 孟作环 曹海芳 柏艳柳 李锦 郑晓杰

（石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035）

加味定喘片乙醇提取工艺的研究

李文烈 孟作环 曹海芳 柏艳柳 李锦 郑晓杰

（石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035）

目的：优化加味定喘片乙醇提取工艺。方法：采用正交试验设计法，以盐酸麻黄碱、黄芩苷含量和出膏率为评价指标，优选加味定喘片乙醇提取工艺。结果：加味定喘片乙醇提取工艺优选为加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。结论：优选的提取工艺科学合理，可为工业化生产提供依据。

加味定喘片；盐酸麻黄碱；黄芩苷；出膏率；正交设计；乙醇提取工艺

加味定喘片是由麻黄、白果、黄芩等药物组成的中药复方制剂，具有宣肺降气、清热化痰之功效，临床治疗哮喘疗效确切。为充分提取有效成分，保证药效，同时省工节能，降低生产成本，本研究以盐酸麻黄碱、黄芩苷含量和出膏率为评价指标，以提取次数、提取时间、加乙醇量为考察因素，采用L9（3）4正交试验法对乙醇提取工艺进行优化，现报道如下。

1 实验仪器与材料

1.1 仪器

回流提取装置，高效液相色谱仪（Agilent 1100），色谱柱：Waters Sunfire C18（4.6 mm×150 mm）。

1.2 试剂与药品

盐酸麻黄碱对照品（批号 171241-200506，购自中国食品药品检定研究院），黄芩苷（批号110715-200815，购于中国食品药品检定研究院），乙醇为医用级，甲醇为色谱纯，水为重蒸水。饮片均购自安国以岭中药饮片有限公司，经鉴定均符合《中国药典》（2010年版）一部各自项下规定。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

选取提取次数（A）、提取时间（B）、加醇量（C）

为考察因素，（D）设为空白，以盐酸麻黄碱、黄芩苷含量和出膏率为指标，按L9（3）4正交设计表进行试验，因素水平见表1。

表1 乙醇提取工艺正交试验因素水平

2.2 试验方法

2.2.1 样品提取 按比例称取复方饮片共9份，按照 L9（3）4正交试验设计表，加 60%乙醇回流提取，提取液合并，滤过，减压回收乙醇，适量浓缩，转移至1 000 mL量瓶中，放冷至室温，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。

2.2.2 盐酸麻黄碱含量测定

2.2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（9∶91）为流动相，流速1 mL/min；检测波长207 nm[1]。

2.2.2.2 对照品溶液制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品10 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。精密量取3 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

2.2.2.3 供试品溶液制备 精密量取 2 mL提取液，置分液漏斗中，加入1 mol/L的氢氧化钠溶液10 mL，用乙醚提取5次（分别为 15，15，15，10，10 mL）合并乙醚层，加盐酸-甲醇（1∶100）1 mL，置水浴上挥干，残渣加流动相溶解，定容于10 mL量瓶中，摇匀，滤过。

2.2.2.4 测定方法 精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，测定供试品与对照品峰面积，计算。

2.2.3 黄芩苷含量测定

2.2.3.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.1%磷酸溶液（45∶55）为流动相，流速1 mL/min；检测波长280 nm[2]。

2.2.3.2 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品约10 mg，置 250 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。

2.2.3.3 供试品溶液的制备 精密量取提取液2 mL，置 50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

2.2.3.4 测定法 吸取供试品溶液和对照品溶液各 5 μL，注入高效液相色谱仪，测定供试品与对照品峰面积，计算。

2.2.4 出膏率测定 精密吸取提取液各 100 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥5 h，置干燥器中冷却 30 min，迅速精密称定重量，计算。

2.3 结果

见表2。

2.4 结果分析

直观分析表明，各因素对盐酸麻黄碱含量的影响大小依次为：提取次数＞提取时间＞加醇量，最佳工艺为A2B3C3；对黄芩苷含量的影响大小依次为：提取次数＞加醇量＞提取时间，最佳工艺为A3B3C3；对出膏率的影响大小依次为：提取次数＞提取时间＞加醇量。

方差分析（结果见表 3，4，5）表明，对3个指标提取次数的差异均具有统计学意义，其中盐酸麻黄碱（P＜0.01）、黄芩苷（P＜0.05）、出膏率（P＜0.01），其他因素的差异均无统计学意义。

从提取次数分析，提取3次与提取2次相比，盐酸麻黄碱和黄芩苷含量差异均较小，但提取3次比提取2次出膏率明显增加，结合节约能源、降低成本和降低服用量因素考虑，确定提取次数为2次。从提取时间分析，盐酸麻黄碱和黄芩苷含量两个指标随提取时间延长均呈上升趋势，确定提取时间为2 h。从加醇量分析，加醇量对3个指标影响均较小，考虑到乙醇成本较高，确定加醇量为第1次10倍量，第2次8倍量。综上所述，确定乙醇提取工艺为：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

2.5 乙醇提取工艺的验证实验

称取选净的药材，分别按最佳工艺A3B3C3的组合条件和选定工艺的A2B3C（3，2）组合条件进行重

复验证实验，测定盐酸麻黄碱、黄芩苷含量和出膏率，结果见表6。

表2 乙醇提取工艺正交试验结果

表3 乙醇提取工艺方差分析——盐酸麻黄碱

表4 乙醇提取工艺方差分析——黄芩苷

表5 乙醇提取工艺方差分析——出膏率

结果表明，最佳工艺和选定工艺的3个指标含量差距较小，而且选定工艺乙醇用量减少，节约能源，有利于降低生产成本，故采用选定工艺。

3 讨论

3.1 根据前期预实验，盐酸麻黄碱和黄芩苷在60%乙醇中溶解度较大，因此本研究正交试验采用60%乙醇回流提取。

3.2 麻黄为本方君药，具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿的作用[3]，麻黄碱类生物碱是麻黄主要

的有效成分；黄芩苷为黄芩中主要有效成分，具有抗菌、消炎等作用[4]，与加味定喘片的功能主治一致，故以盐酸麻黄碱、黄芩苷为含量考察指标。

3.3 本研究采用正交实验设计，以盐酸麻黄碱、黄芩苷含量和出膏率为评价指标优选了影响提取物含量的3个因素，得出最佳提取工艺，再结合实际大生产情况，对各影响因素进行了优化，最终确定了乙醇提取工艺为：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

表6 乙醇提取工艺验证结果

[1] 赵文明，承伟.RP-HPLC法同时测定小儿肺热咳喘泡腾颗粒中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的含量[J].沈阳药科大学学报，2010，27（6）：474-476.

[2] 王晓宏.孕妇金花片的质量标准研究[J].现代中药研究与实践，2012，26（4）：72-75.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[M].北京：中国医药科技出社，2010：300-301.

[4] 黄志军.黄芩苷药理作用研究进展[J].天津药学，2012，24（3）：61-64.

Study on the Ethanol Extraction Process for Jiaweidingchuan Tablets

Li Wenlie，Meng Zuohuan，Cao Haifang，Bai Yanliu，Li Jin，Zheng Xiaojie（Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.Ltd.，Hebei Shijiazhuang 050035，China）

Objective:To optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Methods:Based on the orthogonal experiment design and using the contents of ephedrine hydrochloride and baicalin and the rate of extractum as indexes to optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Results:The optimum condition for the ethanol extraction of jiaweidingchuan tablets was the reflux extraction twice with addition of 60%ethanol，2 hours each time （10 and 8 times in volume respectively）.Conclusion:The optimized extraction process is scientific and reasonable，which can provide a basis for commercial productions.

Jiaweidingchuan Tablets；Ephedrine Hydrochloride；Baicalin；Orthogonal Design；Rate of Extractum；Ethanol Extraction Process

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.11.005

2012-11-13）

李文烈，男，硕士，主管中药师。研究方向：中药新药研发。通讯作者E-mail：liwenlie21@163.com