牛蒡子微波加热炒制与传统清炒法的比较试验

(重庆市北碚区中医院，重庆 400711)

近年来微波技术在炮制中的应用发展迅猛。微波加热效率高，且具有节能、省时、方便、卫生等优点。于定荣[1]用微波技术对炒法的操作进行了初步探索，结果显示微波炮制品的性状及成分溶出度优于传统炮制品。为深入中药饮片炮制工艺的改革，本研究中设计了牛蒡子微波炮制法与传统清炒法的比较试验。

1 仪器与试药

微波炉(格兰仕wp700型);普通电炒锅;YFLLL型粉碎机(浙江瑞安市历制药机械有限公司);药典筛;Agilent1200型高效液相色谱仪(配有VWD检测器，四元梯度泵);Chem Station工作站(Agilent科技有限公司);HC－TPLL－10型架盘药物天平(上海精科天平);HHS型电热数显水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);超声提取器(功率220 V，50 Hz，上海声源超声仪器设备有限公司)。牛蒡子(四川新荷花中药饮片股份有限公司);牛蒡苷对照品(批号为110819－200606，中国药品生物制品检定所);甲醇、乙腈为色谱纯，试验用水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 传统炮制品制备

取牛蒡子500 g，按2010年版《中国药典(一部)》清炒法(附录ⅡD)依法炮制[2]。

2.2 微波炮制品制备

取牛蒡子500 g，平铺在转盘上，0.5～1 cm厚，放入微波炉，加热炮制到符合规定。

2.3 薄层色谱比较[2－3]

取牛蒡子清炒和微波炮制品粉末各0.5 g，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取牛蒡苷对照品，加乙醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液3 μL、对照药材溶液 3 μL、对照品溶液 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(40∶8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，薄层色谱图见图1。结果表明，在微波法与清炒法的供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液及对照品溶液色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点。

图1 牛蒡子薄层色谱图

2.4 有效成分含量比较[4]

2.4.1 色谱条件

参考2010年版《中国药典(一部)》，确定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇－水(1∶1.1)，检测波长为280 nm。理论板数按牛蒡苷计算应不低于1 500。

2.4.2 溶液制备

精密称取牛蒡苷对照品5 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含牛蒡苷0.5 mg)。精密称取牛蒡子清炒品和微波炮制品粉末(过3号筛)各0.5 g，分别置50 mL量瓶中，各加甲醇约45 mL，超声处理20 min，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4.3 方法学考察

线性关系考察:吸取牛蒡苷对照品溶液 6，9，12，15，18 μL，依次进样，依法测定，以牛蒡苷量与峰面积值作图，得线性回归方程 Y=269 318 X+273 975，r=0.999 7(n=5)。结果表明，牛蒡苷进样量在3～9 μg范围内与峰面积值线性关系良好。

稳定性试验:在拟订的色谱条件下，取同一牛蒡子供试品溶液，于 0，2，4，6，8 h 时测定峰面积值，结果的 RSD 为 0.05%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

精密度试验:在拟订的色谱条件下，精密吸取同一牛蒡子对照品溶液1份，连续进样5次，记录峰面积值。结果的 RSD为0.04%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:在拟订的色谱条件下，取同一批样品，平行制备6份供试品溶液，依次进样，记录峰面积值并计算含量。结果的RSD为2.06%(n=6)，表明测定结果稳定、可靠。

加样回收试验:在拟订的色谱条件下，取已知含量的供试品溶液 6 份，分别精密加入对照品溶液 0.4，0.5，0.6 mL，照 2.4.2项下供试品制备方法制备加样回收供试品溶液，依法测定，记录峰面积值，按外标法分别计算含量。结果见表1。

表1 牛蒡子苷加样回收试验结果(n=6)

2.4.4 牛蒡苷含量测定

按拟订的色谱条件，精密吸取牛蒡子供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积值(见图2)，按外标法分别计算含量。结果清炒炮制品3批样品含量平均值为5.236%，微波炮制品3批样品含量平均值为5.330%。结果表明，微波法炮制的牛蒡苷含量为清炒法的1.02倍，说明微波法炮制略优于清炒法。

图2 高效液相色谱图

3 讨论

从外观性状比较，两种方法的成品外观均能达到药典对该品种项下的要求，微波炮制的时间也比清炒法时间短。薄层色谱鉴别结果表明，两种方法的成品中都能出现与对照品溶液和对照药材溶液相同颜色的斑点，说明微波法没有改变供试品溶液中的主要指标成分。高效液相色谱法结果表明，两种方法成品的含量均能达到药典的规定，且微波炮制法的含量测定略高于传统清炒法，说明通过微波炮制后，更有利于饮片中有效成分的溶出。

本研究结果表明，微波炮制法在外观性状、和有效成分含量等方面的检测结果均优于传统清炒法，同时微波炮制法较传统清炒法具有省工、省时、工艺简便、易掌握、饮片洁净度高、劳动强度小、无环境污染、工艺指标可量化等优点，为中药饮片炮制较为理想的方法之一。

[1]于定荣.微波炮制决明子、酸枣仁的实验研究[D].长沙:湖南中医学院硕士学位论文，2004.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:66.

[3]陈新培，窭志英，肖学风.微波技术在中药炮制中的应用[J].中国中药杂志，2001，26(7):501.

[4]刘惠如，李 萍，唐家福.微波技术在中药炮制中的应用探讨[J].基层中药杂志，2002，16(5):41.

[5]蔡宝昌，刘训红.常用中药材HPLC指纹图谱测定技术[M].北京:化学工业出版社，2005:23－24.