磷酸川芎嗪气雾剂急性毒性及局部刺激性试验研究

杨 征 ，陈 雅 ，徐 果 ，胡金婷

(1.中国人民解放军第三军医大学野战外科研究所大坪医院药剂科，重庆 400042; 2.安徽省蚌埠医学院08级药学系，安徽 蚌埠 233030)

川芎嗪是川芎的有效成分四甲基吡嗪，有较强的扩张微血管、改善微循环、降低血黏度、改善血液流变学、降低毛细血管通透性、调节血小板功能和抗凝等作用，因此具有广泛、潜在的临床用途[1]。根据上述作用，大坪医院将2，3，5，6－四甲基吡嗪磷酸盐－水合物(磷酸川芎嗪)制成气雾剂，通过氧气混合吸入的方式而起到扩张鼻黏膜血管的作用，以应用于临床。为确保用药安全，现将其急性毒性及局部刺激性的实验研究报道如下。

1 材料与方法

1.1 试剂、仪器与动物

磷酸川芎嗪气雾剂(大坪医院制剂室制备，批号为111205B)。BP110型电子天平(德国Sartorius);BX151型双目显微镜(日本OLYMPS)。SD 大鼠，清洁级，雌雄各半，体重(200±15)g，动物合格证号为SCXK－(军)2007－004，由第三军医大学野战外科研究所大坪医院动物中心提供。

1.2 方法

急性毒性试验[2－3]:SD大鼠10只，雌雄各半，体重(200±15)g，禁食12 h，以原供试品溶液1%磷酸川芎嗪气雾剂5 mL/kg(相当于原药25 mg/mL，相当于成人日剂量的250倍)，滴入大鼠双侧鼻腔及灌胃;观察1周大鼠毒性反应和死亡情况，未能测出1%磷酸川芎嗪气雾剂滴鼻腔及灌胃无死亡情况。因此，将此给药剂量定为一次1 mL每只的最大耐受量试验(MTD)。随机分成空白组、对照组和给药组，每组10只。禁食12 h后，给药组以原供试品溶液1%磷酸川芎嗪气雾剂1 mL滴入大鼠双侧鼻腔及灌胃;对照组同法给予相同体积0.9%氯化钠注射液;空白组不作任何处理。给药饲养7 d后，详细观察给药后动物的外观、行为活动、精神状态、大小便色泽、呼吸状况，鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化、中毒反应的起始时间、严重程度等。

局部刺激性试验[4]:SD大鼠30只，雌雄各半，体重(200±15)g，随机分成空白组、对照组和给药组，每组10只。给药组以原供试品溶液1%磷酸川芎嗪气雾剂1 mL滴入大鼠双侧鼻腔;对照组同法给予相同体积0.9%氯化钠注射液;空白组不作任何处理。连续给药7 d，末次给药后24 h，分别处死给药组、对照组、空白组大鼠5只;其余各组大鼠分别观察至停药48 h后各组处死3只大鼠;停药72 h后各组处死2只大鼠，即时观察各项指标与解剖后的呼吸道局部黏膜的变化情况。

1.3 观察指标

一般情况观察，观察大鼠给药后恢复期间的呼吸频率、体表颜色改变以及是否出现哮喘、咳嗽、呕吐、窒息;解剖给药后鼻黏膜的变化情况，并按“局部黏膜刺激反应分级标准”[5]以计分方式表示，包括红斑、水肿、充血程度及范围等。解剖显微镜检查，取大鼠鼻腔及气管切片，置40倍显微镜观察变化。

2 结果

2.1 急性毒性试验

空白组、对照组、给药组给药后12 min内先后进食正常。连续给药7 d内各组大鼠外观、行为活动、精神状态、大小便色泽、呼吸状况均显正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物;各组均无死亡，无中毒反应。各组大鼠体重变化经 t检验无显著性差异(P＞0.05)，结果见表1。

2.2 局部刺激性试验

一般情况观察:连续7 d鼻腔给药及给药恢复期间，各组大鼠呼吸频率、体表颜色改变均未见异常，未见出现哮喘、咳嗽、呕吐、窒息反应。给药组在给药后3 min内会出现轻微搔动鼻子的

表1 急性毒性试验中各组大鼠体重的变化情况(n=10)

行为，3 min后停止搔动。鼻腔未见异常分泌物，各组大鼠无1例死亡;给药期间各组大鼠鼻腔黏膜未见红斑、水肿、糜烂、溃疡等症状;喉、气管等呼吸道黏膜组织形态、色泽均无异常，未见充血、红肿。

解剖显微镜检查:在显微镜下，3组大鼠鼻黏膜与气管黏膜对比无显著差异。见图1与图2。

3 讨论

本试验中，磷酸川芎嗪气雾剂为一日给药最大耐受量，相当于临床成人用药量的250倍，在短期内未见毒性反应及死亡情况，表明急性毒性较小，安全可靠。为保证磷酸川芎嗪气雾剂的含量不降低，其pH应控制在2.5～3.5，酸性对鼻腔有一定刺激。为保证制剂使用安全，对该制剂进行急性毒性及局部刺激性试验。在局部刺激性试验中，给药组有轻微的搔动鼻子的行为，根据其磷酸川芎嗪气雾剂的理化性质，初步分析是由于pH显酸性对鼻腔有一定的轻微刺激导致大鼠的抵抗性反应。经过观察，短时间内其行为停止。解剖显微镜检查观察到，给药组的鼻腔黏膜与气管黏膜的毛细血管较清晰，试验证明磷酸川芎嗪气雾剂对血管有扩张作用。本试验结果表明，磷酸川芎嗪气雾剂作为扩张鼻黏膜血管用于临床无明显毒性及刺激性，可供临床使用。

图1 鼻腔黏膜解剖显微图

图2 气管黏膜解剖显微图

[1]项蔷薇，罗运春，朱妍艳，等.川芎嗪在哮喘小鼠气道炎症和气道重塑中的作用及其机制[J].临床儿科杂志，2011，8(29):773－776.

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[3]汤 杰，方建国，施春阳，等.鱼腥草鼻用喷雾剂急性毒性、局部刺激性及过敏性的实验研究[J].中南药学，2006，4(6):403－406.

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