参姜胶囊对肿瘤抑制作用的研究

李学庆 邹文俊

参姜胶囊(简称SJ)是以姜黄、人参2种中草药有效部位群姜黄素、人参皂甙以固定比例组成的复方制剂，具有扶正祛邪、活血通经止痛功效。SJ临床对多种肿瘤有抑制作用，文献研究SJ主药姜黄素(CUR)、人参皂甙(SPFG)有广泛的药理作用［1-2］。本文从体内、体外两个方面对SJ抗肿瘤作用进行了研究。根据小鼠与人类体表面积比等效剂量换算比率表，设定高、中、低3个剂量为抗小鼠肝腹水癌H22、小鼠肉瘤S180肿瘤治疗量，在体外测定CUR、SPFG对N-04神经癌、LU-04肺癌、BRE-01乳腺癌肿瘤细胞的IC50，研究其抗肿瘤作用。

1 材料与方法

1.1 试剂、仪器

实验药物:SJ由自主研制，经硅胶薄层鉴定，其主药成分与标准品的比移值相同。实验时以0.2%羧甲基纤维素钠(CMC)配制成高、中、低(240 mg/kg，120 mg/kg，60 mg/kg)浓度混悬水溶液。环磷酰胺(CTX，江苏恒瑞，批号:11061821);5-氟尿嘧啶(5-Fu，上海旭东海普药业，批号:fa11010);0.9%生理盐水(NS.四川科伦，批号:a11042802)。722型分光光度计(上海第三分析仪器厂);酶标仪550，96孔板清洗机为BIORAD产品;微量振荡器(上海医疗仪器厂);多通道可调移液器10～200 μl;倒置光学显微镜(重庆光学仪器厂)。SRB、MTT为SIGAMA公司产品;PBS清洗液;消化液(0.02%EDTA加0.25%胰酶等体积混合);二甲亚砜(DMSO)(分析纯，上海化学试剂厂)。昆明种二级小鼠，体重19～21 g，♀♂各半，均由成都中医药大学动物实验中心提供，合格证号为川实动管质第162号，饲养室温度(20℃ ±2℃)。肿瘤株:鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22(腹水型)由四川肿瘤研究所提供;人肺癌细胞LU-02、结肠癌细胞COL-05、乳腺癌细胞BRE-01为成都地奥筛选中心保种，用含10%小牛血清(上海轻工所)100 IU/ml青霉素及100 μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基(GlBCO产品)培养、传代，取对数生长期细胞用于实验。

1.2 SJ对移植性小鼠肝癌H22肿瘤抑瘤实验［3］

60只昆明小鼠，♀♂各半，瘤株接种按常规，在无菌条件下抽取荷瘤鼠腹腔瘤液，用生理盐水(NS)以1∶4倍稀释，调细胞数为 107个/ml，计活细胞数 ＞95%，取0.2 ml瘤液注射入小鼠右腋皮下，接种瘤珠24 h后，随机分为5组:NS对照组、5-Fu组、SJ高剂量组、SJ中剂量组、SJ低剂量组，化疗各组分别按0.1 ml/10 g，腹腔注射5-Fu(15 mg/10 ml);SJ 3个剂量组，同体积不同浓度(0.1 ml/10 g)灌胃给药，NS对照组给予同体积0.9%生理盐水，均于治疗的第11天称重，处死小鼠，取瘤块称重，计算抑瘤率(%)=［(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重］。

1.3 SJ对移植性小鼠肉瘤S180的抑瘤实验

60只昆明小鼠，♀♂各半，接种瘤株后，随机分为5组:NS对照组、CTX组、SJ高剂量组、SJ中剂量组、SJ低剂量组。化疗各组分别按0.1 ml/10 g、腹腔注射CTX(15 mg/10 ml);其余操作方法同小鼠肝癌的肿瘤试验。

1.4 SJ体外抗人肿瘤实验［4］

取成对数生长的N-04神经癌、LU-04肺癌、BRE-01乳腺癌细胞消化、记数分别以7 500/ml、15 000/ml、10 000/ml接种于96孔板，上下边缘孔空出，37℃培养24 h，用移液器吸出培养液，然后加入一定量新培养液，参照EXCEL抗肿瘤药物筛选模板，设4个复孔，加入 SJ主药成分 CUR 100 μg/ml、SPFG 200 μg/ml，并且10倍稀释至5个梯度(此时，测T0对照板用TCA固定)继续培养48h，50%TCA固定60min，SRB染色，10 min后，1%醋酸清洗5次加TRIS 200 μl振荡器震荡，比色540 nm，根据IC50模板测OD值，取均值，采用logist法计算 IC50(μg/ml)，IC50＜20 μg/ml表明 SJ对肿瘤细胞有抑制作用［5］。

1.5 统计学处理

实验数据均用PEMS 3.1统计软件包(四川大学华西公共卫生学院卫生统计学教研室提供)处理。数据用表示，组间比较采用t检验。

2 结果

SJ对小鼠肝癌H22和S180均有抑瘤作用，结果见表1、表2，SJ高、中、低剂量组对小鼠肝癌的抑瘤率分别为 50.34%、46.96%、18.92%，5-Fu 抑瘤率为52.23%，以上各受试药物与肝癌对照组比较，SJ低剂量组差异不显著，P＞0.05;其他各组均有显著差异，P＜0.01;SJ高、中、低剂量组对小鼠S180抑瘤率分别为51.56%、42.91%、29.23%，CTX 抑瘤率为 57.05%，以上各受试药物与肝癌对照组比较，SJ低剂量组差异不显著，P ＞0.05，其他各组均有显著差异，P ＜0.01。SJ体外抗肿瘤实验结果见表3，SJ有效部位群CUR对LU-02、COL-05、BRE-01 的 IC50均小于 20 μg/ml，IC50分别为 18.89 μg/ml、8.33 μg/ml、12.5 μg/ml;SPFG对LU-02、COL-05、BRE-01 的 IC50均大于20 μg/ml。结果表明，SJ对小鼠肝癌、S180实体瘤均有明显抑瘤作用，SJ有效成分 CUR体外对人 LU-02、COL-05、BRE-01癌细胞有抑制作用，表明SJ对多种肿瘤有抑制作用。

表1 SJ对小鼠H22实体瘤的抑瘤作用

表2 SJ对小鼠S180实体瘤的抑瘤作用

表3 SJ体外抑瘤作用

3 讨论

本研究表明，SJ对小鼠H22、S180有抑制作用，并且SJ组活动能力及皮毛光华度要好于5-Fu、CTX对照组;治疗组移植肿瘤明显小于对照组，SJ对肿瘤的抑制表现出明显的量效关系，随剂量增加，抑制作用增强。在体外实验研究中SJ及其有效成分对肿瘤细胞有杀伤抑制作用。

SJ的有效成分为CUR、SPFG，其药理作用广泛，对多种疾病有治疗作用。研究报道姜黄素(CUR)具有降血脂，清除自由基作用，可预防肿瘤的发生，文献报道注射组50 mg/kg·d，CUR对S180肿瘤抑制率高达76%，明显高于口服给药组，并认为其具有抑制血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制肿瘤作用，本研究发现口服给药抑瘤率可达50%左右而体外实验抑瘤率可达75%，与文献报道的相符［6］，而且对肿瘤有直接杀伤作用的成分为CUR。

中药可减轻化疗药的毒副作用，可增加肿瘤对化疗药的敏感性，人参及其有效成分的研究多有报道，人参皂苷具有提高人体免疫力、促进物质代谢、抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老等作用，人参皂苷与化学药物的联合运用，增强疗效的同时能有效降低化学药物的毒副作用，此亦为中医学与西方医学相结合的发展［7］。人参皂苷在临床应用中疗效确切，人参皂甙(SPFG)中人参皂苷Rg3对多种肿瘤均显示了抗肿瘤作用［8］，已经在临床有广泛应用，其作用机理是通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖、影响蛋白和基因的表达等方式而抑制肿瘤发生、转移、生长、并抑制肿瘤细胞的侵袭［9］。人参皂苷Rg3有联合化疗增效减毒、抑制肿瘤血管新生、逆转肿瘤细胞耐药等诸多方面药理作用［10］。

复方是中医药的特点之一，可通过多靶点发挥作用提高治疗效果，改善患者的生活质量，SJ在增强抗应激性和抗肿瘤发挥疗效，中药对化疗药减毒、增效作用是其特点，SJ对化疗药的协同作用还有待深入研究。

随着肿瘤发病率的不断升高，临床急需用于预防肿瘤的安全药品，SJ组方是安全的防治肿瘤药物，姜黄与人参在食品与保健品中应用广泛，在用量合理范围内安全可靠，SJ制剂在急性毒性实验中未检测出致死量，在临床防治肿瘤及辅助化疗治疗中应该有广泛的应用前景，由于其给药途径及剂型需要考虑便利性、疗效等多方面因素，在化学、剂型、药理等方面还有必要进行深入研究。

［1］郑玉强，邓立普.姜黄素药理作用研究进展〔J〕.辽宁中医药大学学报，2011，13(2):212.

［2］Attele AS，Wu JA，Yuan CS.Ginseng pharmacology multiple constituents and multiple actions〔J〕.Biochem Pharmacol，1999，58(11):1685.

［3］陈 奇.中药药理实验方法学〔M〕.第2版.北京:人民卫生出版社，1996:757.

［4］周思朗，屈艳妮，张 健，等.SRB法与MTT法细胞计数应用比较〔J〕.中国现代医学杂志，2005，15(17):2615.

［5］司徒镇强，吴军正.细胞培养〔M〕.西安:世界图书出版社，1996.

［6］沃兴德，丁志山，袁 巍，等.姜黄素及其衍生物抑制肿瘤作用的实验研究〔J〕.浙江中医学院学报，2005，29(2):53.

［7］何道同，王 兵，陈珺明.人参皂苷药理作用研究进展〔J〕.辽宁中医药大学学报，2012，14(7):118.

［8］贺兼斌，廖慧中，张怡秋，等.人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用〔J〕.实用肿瘤杂志，2012，27(4):373.

［9］耿 良.人参皂苷 Rg3抗肿瘤实验研究进展〔J〕.北京中医药，2011，30(7):544.

［10］吴东东，刘 琪.人参皂苷Rg3对环磷酰胺的增效作用〔J〕.医药导报，2010，29(7):850.