p21和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

仰丽丽 文 剑

胃癌(gastric carcinoma)是指源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国，胃癌新发病例数和死亡率居恶性肿瘤的首位。近年来，大量研究已证实胃癌的发生、发展和预后是多基因改变的结果，因此研究胃癌相关基因及其蛋白改变不仅有助于了解胃癌的发病机制，而且也可发现在胃癌诊断和预后评估中有临床意义的分子标记物。p21蛋白是目前已知的具有广泛抑制激酶活性的细胞周期抑制蛋白，是细胞周期内具有双重特征的通用抑制物，是CKI家族中的重要一员。Survivin是近来发现的肿瘤特异性的凋亡抑制因子，它不仅在各种肿瘤中发挥着重要作用，而且是影响肿瘤预后的重要因素之一。本研究采用免疫组化法检测p21和Survivin在胃癌及癌旁组织中的表达，并分析它们与各临床病理指标的相互关系，探讨p21和Survivin蛋白表达在胃癌发生、发展、转移及预后中的作用及相关性，从而为胃癌的预防、诊断、治疗和预后判断提供新的途径。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2006年5月-2010年5月南京市第二医院手术及内镜下切除标本90例，分为2组。胃癌组50例，男性33例，女性17例，≥60岁32例，＜60岁18例，平均年龄67.82岁。所有胃癌患者术前均未接受放疗和化疗处理，临床资料完整，其中高分化腺癌4例，中分化癌17例，低分化腺癌29例;根据国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准进行临床分期，Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期17例，Ⅳ期11例。正常对照组40例，男性27例，女性13例，平均年龄61.54岁。2组间性别和年龄具有可比性(P＞0.05)。

1.2 免疫组化方法

鼠抗人p21、鼠抗人Survivin单克隆抗体和SP试剂盒由美国Santa Cruz公司生产，将入选病例的原发灶病理蜡块进行常规切片，制成4 μm厚的切片，0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液微波抗原修复，SP免疫组化染色。染色步骤严格按照说明书进行，DAB显色，苏木精复染细胞核，PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定

p21主要表达于癌细胞胞核，Survivin主要表达于癌细胞胞质，呈棕黄色或棕褐色颗粒。采用染色指数法计算阳性结果，综合考虑阳性细胞百分数和染色强度。阳性细胞数计分方法:0% ～5%为0分，≥6% ～25%为1分，≥26% ～50%为2分，≥51% ～75%为3分，≥76%为4分;染色强度计分方法:肿瘤细胞不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。如在同一病变中存在不同评分标准的视野，则取最大值和最小值的平均值作为评分结果。上述两项之和即为该肿瘤细胞的染色指数评分，染色指数0～2分定义为阴性表达，3～7分定义为阳性表达。

1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0软件进行统计学分析。计数资料采用χ2检验;配对资料采用Spearman等级相关分析。P＜0.05表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p21和Survivin蛋白的表达

免疫组织化学检测结果显示:胃癌组织中p21和Survivin 的阳性表达率分别为 46.0%(23/50)、56.0%(28/50)，正常对照组中p21和Survivin的阳性表达率分别为77.5%(31/40)、0%(0/40)，组间差异均有统计学意义(χ2=9.188，P=0.002;χ2=20.522，P=0.000)。

2.2 p21和Survivin表达与胃癌临床病理特征的关系

在胃癌组织中，p21蛋白阳性表达率与分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05)，与性别、年龄、浸润深度无关(P＞0.05)。Survivin的阳性表达与分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但在不同性别、年龄、TNM分期中差异不显著(P＞0.05)。见表1。

表1 p21、Survivin的阳性表达与胃癌临床病理参数之间的关系

2.3 p21和Survivin在胃癌组织中表达的相关性

p21和Survivin在胃癌组织中的表达呈负相关，χ2=11.298，P=0.001，相关系数 γ =-0.475。见表2。

表2 p21和Survivin在胃癌组织中表达的相关性(例)

3 讨论

抑癌基因p21是细胞周期负性调节因子，正常组织中均可检测到p21蛋白表达，而肿瘤组织多为低表达或表达缺失［1］。p21蛋白是目前已知的具有广泛抑制激酶活性的细胞周期抑制蛋白，是细胞周期内具有双重特征的通用抑制物，是CKI家族中的重要一员。如果p21蛋白发生异常，则失去对细胞周期素、CKD及其复合物蛋白激酶活性的正常调节，影响细胞增殖与分化的调控，导致恶性肿瘤的发生。

本实验发现在正常胃组织及胃癌中p21阳性表达率分别为77.5%与46.0%，随着病变恶性程度的增高，p21阳性率逐渐下降，与文献报道一致［2-3］。本实验亦提示，高中分化胃癌p21表达率明显高于低分化胃癌，随着TNM分期的增高，分化程度降低及淋巴结转移p21表达亦逐渐下降。提示p21蛋白低表达可能参与胃癌的发生和发展，可作为评估胃癌细胞恶性程度以及预后的指标之一。有研究显示，p21基因转染可以抑制人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖，并能诱导其发生细胞凋亡［4］。因此，p21既可以作为内源性分子标记，了解胃癌的发生发展的生物学特性，也可能成为胃癌基因治疗的新靶点。

凋亡抑制基因Survivin的主要作用是抑制肿瘤细胞凋亡，除了具有抗凋亡作用外，还有促细胞增殖、促血管生成的作用，这可能同肿瘤具有侵袭性及转移性有关［5］。研究发现Survivin除可在胚胎组织和正常胸腺组织中表达外，在正常成熟组织中几乎不表达，但在多种肿瘤组织中高表达［6］。本实验中胃癌组织中Survivin表达阳性，而正常组织中则无表达，也进一步印证了上述结果。本研究结果显示，Survivin蛋白表达与胃癌患者的年龄、性别、病理分期无关(P＞0.05)，与分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05)，考虑Survivin的异常表达导致胃癌细胞的凋亡抑制，同时Survivin通过抗凋亡保护肿瘤血管内皮细胞的生长增殖，造成肿瘤邻近和远处部位转移灶形成。在胃癌组织中，Survivin蛋白的阳性表达率随组织分化程度降低、局部淋巴结转移出现而增高，提示Survivin蛋白的表达强度与肿瘤的恶性程度及发展趋势明显相关，可以作为预后不良的一项参考指标。

关于p21和Survivin在胃癌中表达的相互关系，目前鲜见报道。有研究显示［7］，外源性p21的高表达可能会抑制HepG2细胞中Survivin的表达，而且该抑制机制可能与p21导致的G0/G1期阻滞有关。本研究结果显示，在胃癌组织中p21和Survivin的表达呈高度负相关，我们推测p21可能通过下调Survivin的表达，促进胃癌发生、发展、侵袭和转移。

综上所述，对p21和Survivin研究的不断深入，将对胃癌的预防、诊断、治疗和预后判断等都有积极的临床意义，为制定更有效的基因治疗方案提供有效的帮助。

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［4］张学彦，景德怀，刘志强，等.p21～(WAF1)基因对人食管鳞癌细胞增殖的抑制作用〔J〕.世界华人消化杂志，2009，17(14):1384.

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［6］Cho GS，Ahn TS.Expression of the survivin-2B splice variant related to the progression of colorectal carcinoma〔J〕.J Korean Surg Soc，2011，80(6):404.

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