头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑色氨酸羟化酶、单胺氧化酶A的影响

张 淼，李虹霖，徐 飞

（1．黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨150001；2．黑龙江省医院康复科，黑龙江哈尔滨150036）

头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑色氨酸羟化酶、单胺氧化酶A的影响

张 淼1，李虹霖1，徐 飞2

（1．黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨150001；2．黑龙江省医院康复科，黑龙江哈尔滨150036）

目的：探讨头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑色氨酸羟化酶（TPH）、单胺氧化酶A（MAO－A）表达的影响。方法：取8周龄健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，除12只作空白对照组外，其他大鼠造疲劳力竭模型，随机分为模型组、头穴透刺组和传统针刺组，每组12只。共进行游泳大鼠模型训练4周后，观察各组大鼠力竭游泳后力竭时间；采用Western blot方法比较各组大鼠下丘脑组织TPH、MAO－A表达。结果：与模型组相比，针刺治疗组小鼠的力竭运动时间显著延长（P＜0.05）。传统针刺组和头穴透刺组均能显著降低TPHmRNA的表达，增强MAO－AmRNA的表达，与模型组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）；头穴透刺组在降低TPHmRNA表达，增强MAO－AmRNA表达方面优于传统针刺组，组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：头穴透刺能降低大鼠下丘脑组织中的TPHmRNA表达，增强MAO－AmRNA表达。

运动性疲劳；头穴；透刺；TPH；MAO－A；大鼠

运动性疲劳是机体各种复杂内在变化的一种综合外在表现，是机体在长时间的运动后，其生理现象在运动过程中表现为机体运动能力下降，使其运动能力不能持续在特定的运动水平和/或预定的运动强度。对运动性疲劳防治的研究是运动医学关注的热点和焦点。大量研究［1－2］显示，中医药对运动性疲劳有良好的防治前景。本组研究采用针刺预处理方法，观察头穴透刺对运动性疲劳的防治作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 取8周龄健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，体质量（200±10）g。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，大鼠质量合格证书编号：SCXK（黑）2008004。

1.2 试剂和仪器 试剂主要有TPH抗体和MAO抗体，均购自于millipore公司，荧光定量Realtime PCR试剂盒、逆转录试剂盒，均购自于takara公司产品。主要仪器有电子天平（赛多科斯，万分之一）、水浴锅、游泳箱（55cm×55cm×40cm）、秒表。

1.3 实验方法

1.3.1 动物分组 将48只大鼠随机分为4组，每组2只，分别为空白对照组、模型组、头穴透刺组和传统针刺组。

1.3.2 造模方法 模型组和治疗组方法参见文献［3－4］建立疲劳力竭模型，空白对照组适应性训练1周，正常饲养。

1.3.3 治疗方法 头穴透刺组和传统针刺组大鼠每天在针刺预处理1h后进行造模。每只大鼠针刺前束缚固定，参照中国针灸学会实验针灸研究会制定的《动物针灸穴位图谱》选穴。头穴透刺组：针刺双侧百会透太阳、双侧足三里、肾俞、关元，留针15min，出针1h后进行造模。传统针刺组：针刺双侧足三里、肾俞、关元，留针15min，出针1h后进行造模。空白对照组：正常饲养不给予任何处置。模型组：正常造模，造模前后均不给予任何治疗。共进行4周的游泳大鼠模型训练，每周游6d。第1周每天游30min，每周递增30min。

1.4 观察指标

1.4.1 一般状况 观察造模后各组大鼠的精神状态、体毛、体质量、大小便及活动情况等。

1.4.2 力竭游泳实验 第4周末进行力竭性游泳，记录游泳时间，力竭标准以大鼠游泳的协调动作消失，水淹没鼻尖，身体下沉，至再次浮出水面的时间超过10s，并连续3次者。

1.4.3 标本采集及及荧光定量逆转录聚合酶链反应用1％戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉，麻醉满意后固定于鼠板上，用含4％多聚甲醛缓冲液灌注固定取下丘脑。参照文献［5］提取RNA。逆转录参照试剂盒说明书进行操作。荧光定量聚合酶链反应参照试剂盒说明书进行操作。

2 结果

2.1 一般情况 造模后，各模型组大鼠的饲料、饮水量均有所减少，体毛干枯，体质量缓慢增长，活动减少，眼裂变小，眯眼明显，精神萎靡，反应迟钝。

2.2 各组力竭时间结果比较 见表1。

表1 各组力竭时间结果比较（±s，n＝12）s

表1 各组力竭时间结果比较（±s，n＝12）s

注：与模型组比较，＃＃P＜0.01；与传统针刺组比较，△P＜0.05。

组 别力竭时间组 别力竭时间空白组 422．06±30．21 传统针刺组348．84±25．17＃＃头穴透刺组381．52±27．65＃＃△模型组 304．20±24．59

2.3 各组下丘脑组织中TPH、MAO－AmRNA表达的影响 见表2。

表2 各组下丘脑组织中TPH、MAO－AmRNA表达的影响（±s，n＝12）

表2 各组下丘脑组织中TPH、MAO－AmRNA表达的影响（±s，n＝12）

注：与模型组比较，＃＃P＜0.01；与传统针刺组比较，△P＜0.05。

actin空白组 0．838 0±0．133 1 0．574 8±0．002 9头穴透刺组0．733 8±0．093 9＃＃△0．678 9±0．021 8＃＃△传统针刺组0．838 6±0．163 4＃＃0．357 6±0．008 6＃＃模型组 0．957 9±0．018 5 0．133 8±0．006 1组 别TPH/β－actin MAO－A/β－

3 结论

运动性疲劳尚属中医学“虚证”范畴。［6－7］针刺具有疏通经络，激发正气，改善血液循环，抗脂质过氧化，清除自由基，调节免疫功能，纠正代谢紊乱，纠正运动性神经—内分泌—免疫调节紊乱等作用。本研究发现，头穴透刺能降低大鼠下丘脑组织重的TPH mRNA表达，增强MAO－A mRNA表达，其抗运动性疲劳机制可能与此有关。

［1］岳丽军，姜丽红．慢性疲劳综合征的中西医研究概况［J］．长春中医药大学学报，2008，24（2）：230－231．

［2］周建辉，李玲，欧阳静萍．桂枝四逆散对小鼠耐缺氧能力和抗疲劳作用实验研究［J］．吉林中医药，2009，29（10）：908－909．

［3］肖明珠，郭庆芳．动物运动性疲劳方法学研究之一：同刺激方法对大鼠跑台运动疲劳及恢复期糖代谢的影响［J］．中国运动医学杂志，2003，17（4）：334－338．

［4］Ohba H，Takda H，Musha H，et al．Effects of prolonged strenuous exercise on plasma levels of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide in healthy men［J］．American Heart Journal，2001，141（5）：751－758．

［5］孙薇，吴博，石伟彬，等．刺五加胶囊对抑郁大鼠海马组织TH、TPH表达的影响［J］．现代生物医学进展，2011，11（22）：4247－4249．

［6］李海燕，方剑乔．5－羟色胺及其相关代谢物与运动性中枢疲劳［J］．长春中医药大学学报，2009，25（1）：65－67．

［7］林楠，钟琳琳，李娜．人参花提取物抗疲劳作用的研究［J］．长春中医药大学学报，2010，26（3）：336－337．

R246

A

1007－4813（2013）02－0194－02

2012－11－19）

黑龙江省教育厅科学技术研究项目资助课题（编号：12511506）。

张 淼（1973－），女，在站博士后，副教授，副主任医师，硕士研究生导师。研究方向：针刺防治老年性疾病。