非小细胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶定量测定的临床价值

陈 伟

(上海市嘉定区中心医院肿瘤科，上海 201800）

非小细胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶定量测定的临床价值

陈 伟

(上海市嘉定区中心医院肿瘤科，上海 201800）

目的探讨非小细胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶(TK）水平变化在化疗疗效及预后评估中的价值。方法采用新型非放射性酶联免疫吸附试剂盒检测非小细胞肺癌患者血清TK水平。结果化疗后非小细胞肺癌患者血清TK水平明显低于化疗前(P＜0.05）。结论非小细胞肺癌患者血清TK定量测定为非小细胞肺癌治疗的疗效评价和预后检测提供一个新的方法。

非小细胞肺癌;胸腺嘧啶激酶;非放射性酶联免疫吸附试剂盒

我国肺癌发病率占所有恶性肿瘤的首位，在过去的20 a中是增长最快的恶性肿瘤［1］，目前非小细胞肺癌发病占全部肺癌的3/4左右。临床上采用联合检测血清中CYFRA21－1、CEA帮助指导化疗，但在实践过程中发现一些患者在手术前后始终没有CYFRA21－1和CEA异常改变，甚至有部分患者已发生明显远处转移时此2项指标仍提示正常。血清胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase，TK）存在于细胞的有丝分裂周期中，TK为G1晚期和S期合成DNA复制所需要的若干酶分子之一，编码TK的mRNA及其表达的蛋白质也成为细胞增生的标志物，应用同位素标记方法检测结果表明血清胸腺嘧啶激酶水平与肿瘤细胞的细胞分裂增殖数目正相关，血清TK已用于血液系统恶性肿瘤的治疗检测和愈后评估［2－5］。有临床研究［6］针对手术前后非小细胞肺癌作为研究对象发现:术前非小细胞肺癌患者血清TK1的水平高于健康对照，通过对比发现手术后1个月比手术前未发生转移患者其血TK1水平下降45%。因此，我们设想定量检测血清TK水平应用于非小细胞肺癌化疗的治疗评价及愈后评估。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2010年8月至2012年9月期间在我院就诊患者，依据入组标准纳入分组。非小细胞肺癌组:80例左右，经病理(手术/气管镜/脱落细胞检查）和PET－CT证实，男女各半。对照组1:慢性阻塞性肺炎患者，50例，男女各半。对照组2:健康体检者，50例，男女各半。化疗方案［7］(NP方案:长春瑞滨25 mg·m－2，第1、8 天;顺铂 30 mg·m－2第 1 ～3 天;TP 方案:泰素135 mg·m－2，第1 天;顺铂30 mg·m－2，第1～3天）。

1.2 主要试剂 非放射性酶联免疫吸附试剂盒(TK Divitum）购自瑞典Biovica公司。

1.3 操作步骤概要 第1天:取出试剂，解冻;重溶试剂A和试剂B;按照assayrun的设计，将10μL患者样品加入到样品稀释板的特定孔中;将500μL样品稀释液加入到样品稀释板的孔中;转移10μL稀释的血清样品至SORB板的对应孔中;将2 mL REAG B溶液加入到重溶的REAG A瓶配制反应混合液;将100μL反应混合液加入到SORB板的每个孔中。用胶带密封SORB板，33℃孵育过夜。第2天:取出试剂，解冻;制备洗板缓冲液;重溶酶联剂;洗SORB板;加酶联溶液100μL/孔。用盖子盖住SORB板，33℃孵育90 min;配制酶联底物溶液;洗板;加酶联底物溶液120μL/孔;在以下时间测定405 nm处吸光值:30 min，3 ～4 h，20 h左右(如有必要）;用 DiviTumEval软件评估数据。

1.4 统计学处理 利用SPSS 10.0进行数据处理，计量数据采用±s表示，比较采取t检验，检验水准α =0.05。

2 结果

化疗后非小细胞肺癌患者血清TK水平明显低于化疗前，差异有统计学意义(P＜0.05）。见表1、2。

表1 各组化疗前血清TK水平

表2 非小细胞肺癌患者化疗前、后血清TK水平比较

3 讨论

定量检测血清TK水平应用于非小细胞肺癌化疗的治疗评价及愈后评估，国际上已有报道［7］。目前国内采用放射性疫法、Western blotting(抗TK多克隆抗体法）、点免疫印记法检测血清TK酶活性。而Western blotting法操作烦琐，而且我院不具备同位素标记检测血清TK条件，且其有放射污染性、半衰期短、操作复杂的缺点，我们这项研究已经初步证实血清TK水平测定的临床价值，在不同分期非小细胞肺癌中可显示出良好的应用前景，是一个很好的评价预后及化疗疗效的指标，尤其通过随访血清TK水平的变化，可以指导肿瘤的分期，监测肿瘤的复发，评价肿瘤综合治疗的效果及治疗后生存期。

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Clinical Value of Quantitative Determ ination of Serum Thym idine K inase of Patientswith Non-small Cell Lung Cancer

Chen Wei
(Department of Oncology，Jiading District Central Hospital，Shanghai201800，China）

ObjectiveTo study the clinical value of serum thymidine kinase(TK）concentration changes of patientswith non－small cell lung cancer.MethodsThe serum TK concentration of patients with non－small cell lung cancer was detected by using non－radioactive enzyme linked immunosorbent assay kit.ResultsThe serum TK concentration before chemotherapy was higher than that after chemotherapy in the patients with non－small cell lung cancer(P ＜ 0.05）.ConclusionThe serum TK quantitative determination of patients with non－small cell lung cancer can provide a new method to detect the efficacy and prognosis.

non－small cell lung cancer;thymidine kinase;non－radioactive enzyme linked immunosorbent assay kit

10.3969/j.issn.1673－5412.2013.02.017

R734.2;R730.4

A

1673－5412(2013）02－0140－02

基金项目:嘉定区青年科学基金支持项目(编号:QNKYJJ 2008－11－01）

陈伟(1981－），硕士，主治医师，主要从事肿瘤基础研究。E－mail:yisheng_17@126.com

2012－06－17）