食管癌组织中EGFR和PTEN蛋白的表达

王建正，冯笑山，周福有，高社干，王新帅，杨海军，王洽印

(河南科技大学第一附属医院肿瘤外科、河南科技大学肿瘤研究所，河南洛阳 471003）

食管癌组织中EGFR和PTEN蛋白的表达

王建正，冯笑山，周福有，高社干，王新帅，杨海军，王洽印

(河南科技大学第一附属医院肿瘤外科、河南科技大学肿瘤研究所，河南洛阳 471003）

目的探讨食管癌组织中表皮生长因子受体(EGFR）和PTEN蛋白表达及意义。方法选择食管癌组织标本60例和正常食管组织60例，对所有标本采用免疫组化方法进行EGFR和PTEN蛋白检测。结果EGFR在食管癌组织中表达阳性率为56.67%，高于在癌旁正常食管组织中的11.37%(P＜0.05）;PTEN在食管癌组织中表达阳性率为46.67%，低于癌旁正常食管组织中的96.67%(P＜0.05）。EGFR和PTEN蛋白的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05），而与患者年龄、性别无关(P＞0.05）。食管癌组织中EGFR与PTEN的蛋白表达呈负相关(r=－0.616，P＜0.05）。结论EGFR蛋白的高表达和PTEN蛋白的低表达可能参与了食管癌的发生、发展过程，在食管癌的侵袭和转移过程中发挥了重要作用，可作为预测食管癌预后的重要指标。

食管癌;表皮生长因子受体;PTEN

食管癌的预后较差，总的5 a生存率只有10% ～15%［1］，顺铂联合5-Fu是目前临床上治疗食管癌的标准化疗方案，但其有效率也仅为20% ～50%［2］。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR）在多种肿瘤组织中高表达，且其在调节细胞的生长、增殖、分化、恶变、血管生长及细胞死亡中发挥着重要的作用［3］。研究［4］表明许多肿瘤组织都存在EGFR的过度表达，其中食管癌组织中EGFR的表达率70%以上。食管癌组织中EGFR高表达有利于肿瘤的侵袭性生长，同时也是肿瘤预后不良的因素之一［5］。PTEN，又称 MMAC1 或 TEP1，是 Li等［6］从原发性乳腺癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤细胞株克隆得到的定位于人染色体10q23.3的一种具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因。作为迄今为止发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因，PTEN自发现起就受到众多学者的关注，其结构、功能异常广泛存在于人类多种恶性肿瘤组织中，已成为近年肿瘤学研究的热点，成为继p53后又一具有重要意义的抑癌基因。目前已发现PTEN基因的缺失和突变与乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌和神经胶质瘤等多种肿瘤有关［7］。作者用免疫组化方法检测食管癌和癌旁正常食管组织中EGFR和PTEN蛋白的表达，并探讨其与食管癌临床病理参数之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 食管癌组织及癌旁正常食管组织均选自安阳市肿瘤医院2005年1月至2011年12月收治的60例未经化放疗、诊断明确的食管癌手术切除标本及60例癌旁正常食管组织，其中男30例，女30例;≥60岁37例，＜60岁23例;临床分期采用国际抗癌联盟1987年公布的TNM分期标准，Ⅰ期7例、Ⅱ期10例，Ⅲ期43例;高分化15例，中分化26例，低分化19例;有淋巴结转移23例，无淋巴结转移37例。

1.2 检测试剂 鼠抗人EGFR免疫组化单克隆抗体、鼠抗人PTEN免疫组化单克隆抗体、即用型快捷免疫组化MaxVision试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 检测方法及结果判定 检测EGFR和PTEN蛋白在食管癌及癌旁正常食管组织中的表达采用免疫组化MaxVision法，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每张制作完成的切片在阳性表达较高区随机选择10个高倍镜视野(×400），连续计数至少1 000个肿瘤细胞，计算阳性细胞的百分率:阳性细胞数＜10%或无阳性着色为阴性，阳性细胞数≥10%为阳性。其中EGFR以细胞膜及细胞浆出现黄褐色或淡黄色颗粒为阳性表达，PTEN以胞浆或细胞核出现呈棕黄色颗粒为阳性表达。

1.4 统计学处理 使用SPSS 17.0进行数据分析，不同组织中EGFR和PTEN蛋白表达及两者与食管癌的各临床病理参数关系的分析采用χ2检验，食管癌组织中EGFR和PTEN蛋白表达的相关性分析用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 EGFR和PTEN在食管癌组织与癌旁正常食管组织中的表达 EGFR在食管癌组织中表达阳性率为56.67%，高于在癌旁正常食管组织中的11.37%(P＜0.05）;PTEN在食管癌组织中表达阳性率为46.67%，低于癌旁正常食管组织中的96.67%(P＜0.05）。见图1、2，表1。

2.2 EGFR和PTEN蛋白的表达与食管癌临床病理参数的关系 EGFR和PTEN蛋白的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05），而与患者性别、年龄无关(P＞0.05）。见表2。

2.3 食管癌组织中EGFR与PTEN蛋白表达的相关性 食管癌组织中EGFR与PTEN的蛋白表达呈负相关(r= －0.616，P ＜0.05）。见表3。

表1 食管癌组织与癌旁正常食管组织中EGFR和PTEN蛋白的表达

表2 食管癌组织中EGFR、PTEN的表达与临床病理参数的关系

表3 食管癌组织中EGFR与PTEN蛋白表达的相关性

3 讨论

EGFR属于酪氨酸激酶型受体家族，其家族成员包括 EGFR(即 HER1）、HER2、HER3、HER4等4种同源受体。EGFR在表皮细胞和基质细胞、部分神经胶质细胞和平滑肌细胞中广泛表达，在调节细胞生长和组织修复中起着十分重要的作用，其信号系统所引起的细胞效应包括细胞增殖、迁移及黏附等多个环节，EGFR作为一种肿瘤标志物具有许多优点，主要表现为EGFR基因在许多上皮来源的肿瘤组织中呈过表达改变，EGFR的过表达可促进肿瘤细胞的增殖、血管生成、黏附、侵袭和转移，抑制肿瘤细胞的凋亡［8－9］，对表皮生长因子(EGF）具有高度亲和性，两者特异性结合后，激活酪氨酸激酶，促发细胞分裂信号，引起细胞增殖。EGFR表达异常，可导致正常细胞转化成无限生长的肿瘤细胞，并增加肿瘤的侵袭、转移能力［10］。本文结果显示，食管癌组织中EGFR存在高表达，明显高于癌旁正常食管组织(P＜0.05），表明其与食管癌的发生、发展有关;EGFR的表达与性别、年龄无关(P＞0.05）;而与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有明显关系(P＜0.05），表明其阳性表达的食管癌具有更大的侵袭性及转移能力，容易早期发生淋巴结转移及远处转移。EGFR基因扩增或伴随着的基因突变都与肿瘤的恶性侵袭性行为密切相关，可作为食管癌预后的重要标志。

PTEN是近年来发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色体10q23.3，编码403个氨基酸组成的蛋白质，PTEN在调控细胞的生长发育和凋亡，细胞信号转导及肿瘤细胞浸润转移过程中起着重要的作用，参与细胞生长、运动的调节，具有双特异性磷酸酶活性，通过脂质磷酸酶活性特异性的去除磷脂酰肌醇－3，4，5－三磷酸3位上的磷酸基团，负性调控PI3K/蛋白激酶通路使细胞周期停滞在G1期，促进细胞凋亡;通过蛋白磷酸酶活性去磷酸化灶性黏连激酶和含SH2的转化蛋白而调节细胞的黏附和迁移。本研究结果显示，PTEN蛋白在食管癌组织中的表达明显低于癌旁正常食管组织(P＜0.05），提示PTEN在食管癌的发生、发展过程中起着重要作用，PTEN蛋白表达与性别、年龄无关(P＞0.05）;而与TNM分期、分化程度及淋巴结转移关系密切(P＜0.05），表明其阴性表达的肿瘤更具有侵袭和转移能力。

在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段，至少有2个或2个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用，并在时间和空间上相互配合，协同促进了细胞的癌变。有研究［11－12］发现在肿瘤的演进过程中，EGFR能通过增加VEGF表达或与其协同作用促进肿瘤内新生血管形成，去除 EGFR的作用会阻碍血管的进一步发生，而PTEN可通过调节VEGF来抑制肿瘤细胞的运动性和血管形成［12］。在本研究中，EGFR和PTEN蛋白表达呈负相关，表明在食管癌的系列病理过程中，EGFR和PTEN具有相互协同效应，其机制有待进一步深入探讨。

另外，EGFR在非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌等实体肿瘤中高表达，其靶向治疗在上述肿瘤治疗中取得良好疗效。食管癌组织中EGFR存在高表达，在食管癌的浸润、促进淋巴结转移过程中起着非常重要的作用，为针对EGFR的分子靶向药物在食管癌综合治疗中的应用提供了理论依据，可能会成为食管癌一个新的判断细胞表型向恶性转化的分子生物学诊断指标。总之，深入研究PTEN在肿瘤发生中的作用机制，以及针对EGFR的分子靶向药物在食管癌综合治疗中的应用将为肿瘤的诊断，新的抗肿瘤药物开发，指导临床治疗提供新的策略。

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Expressions of EGFR and PTEN in Esophageal Carcinoma Tissues

Wang Jianzheng，Feng Xiaoshan，Zhou Fuyou，Gao Shegan，Wang Xinshuai，Yang Haijun，Wang Qiayin
(Department of Oncology Surgery，the First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology，Henan University of Science and Technology Institute of Tumor，Luoyang 471003，China）

ObjectiveTo investigate the expressions and significance of epidermal growth factor receptor(EGFR）and PTEN and their clinicopathological in esophageal carcinoma tissues.MethodsThe protein expressions of EGFR and PTEN were detected by immunohistochemical technique in 60 cases of esophageal carcinoma and 60 cases of pericancerous normal tissues.ResultsThe expression rate of EGFR in the esophageal carcinoma tissue was significantly higher than that in pericancerous normal tissue(56.67%vs11.37%，P ＜0.05）.The expression rate of PTEN in esophageal carcinoma tissuewas significantly lower than that in pericancerous normal tissues(46.67%vs96.67%，P ＜0.05）.The expressions of EGFR and PTEN were significantly correlated with TNM stages，differentiation and lymph nodemetastasis(P ＜0.05），butwere not correlated with age and gender of patients(P ＞0.05）.The expression of EGFRwere negatively related with PTEN in the esophageal carcinoma(P ＜0.05）.ConclusionEGFR and PTEN protein are involved in occurrence and development of esophageal carcinoma，they play an important role in the invasion andmetastasis ofesophageal cancer，and can be used for predicting the prognosis of esophageal carcinoma.

esophageal carcinoma;epidermal growth factor receptor;PTEN

10.3969/j.issn.1673-5412.2013.02.003

R735.1;R730.23

A

1673－5412(2013）02－0100－04

王建正(1982－），男，硕士在读，主要从事消化道肿瘤的基础与临床研究。E-mail:jianzhengwang@sohu.com

冯笑山(1957－），男，主任医师，博士生导师，主要从事消化道肿瘤的基础与临床研究。E-mail:sam.feng@hotmail.com

2012－09－11）