食管鳞癌组织中NF-κB p50、ICAM-1及 MMP-9 的表达

王永霞，李道明，李海梅，高冬玲

(1.新乡医学院病理学教研室，河南 新乡453003;2.郑州大学第一附属医院病理科，河南郑州450052;3.安阳市肿瘤医院病理科，河南安阳455000)

食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其浸润和转移是影响患者预后的重要因素，但有关肿瘤浸润、转移的机制目前尚不完全清楚［1］。核转录因子－κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)是一类重要的核转录因子，在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用［2－3］，其主要形式为 p50和p65组成的二聚体，p50是与DNA结合的部位，p65参与基因转录的起始调节［4］。细胞间黏附分子－1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)及基质金属蛋白酶－9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在肿瘤的浸润、转移中具有重要作用。已有研究［5－6］表明，在人肺腺癌和肝癌组织中，NF-κB被激活后可引起ICAM-1或MMP-9表达增多。我们采用免疫组化 S-P 法检测 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9 在食管鳞癌组织中的表达，旨在探讨三者在食管鳞癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择郑州大学第一附属医院2002年7月至2004年6月手术切除的食管鳞癌组织标本49例(鳞癌组)，男27例，女22例;年龄38～75(60.6±9.5)岁，≥60岁29例，＜60岁20例;所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史，且均经病理证实;组织分化程度:高24例，中16例，低9例;有淋巴结转移23例;浅层浸润13例，深层浸润36例。另选癌旁不典型增生组织标本33例(癌旁组)，正常食管黏膜组织标本32例(正常组)，各组一般资料比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。

1.2 主要试剂 NF-κB p50多克隆抗体浓缩液(武汉博士德公司)，工作浓度1∶50;ICAM-1、MMP-9单克隆抗体浓缩液(北京中杉金桥生物有限公司)，工作浓度分别为1∶30和1∶100;S-P试剂盒及DAB显色剂(福州迈新生物有限公司)。

1.3 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9 表达检测 采用免疫组化S-P法。实验参照试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照。结果判断标准:NF-κB p50蛋白以胞核着棕黄、棕褐色为阳性表达;ICAM-1阳性表达定位于胞膜，呈棕黄、棕褐色;MMP-9蛋白以胞质表达为主，阳性染色为胞质中出现棕黄色或褐色颗粒。每张切片取10个高倍视野，计算阳性细胞百分数，阳性细胞数 ＜10%者为阴性，≥10%者为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0进行统计分析，率的比较采用χ2检验，相关性分析用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9 的表达 鳞癌组、癌旁组、正常组 NF-κB p50阳性率分别为 55.1%、51.5%、28.1%，ICAM-1 阳性率分别为 42.9%、0.0%、0.0%，MMP-9 阳性率分别为 71.4%、51.5%、34.4%。鳞癌组与正常组 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9比较差异均有统计学意义(χ2=5.706，P=0.017;χ2=18.514，P ＜0.001;χ2=10.831，P=0.001)。鳞癌组与癌旁组ICAM-1比较差异有统计学意义(χ2=19.012，P ＜0.001);鳞癌组与癌旁组 NF-κB p50、MMP-9 比较差异均无统计学意义(χ2=0.102，P=0.749;χ2=3.370，P=0.066)。癌旁组与正常组间三者比较差异均无统计学意义(χ2=3.703，P=0.054;χ2=0.985，P=0.321;χ2=1.946，P=0.163)。食管鳞癌组织中NF-κB p50、MMP-9蛋白阳性表达细胞主要以弥散及灶状分布为主，而ICAM-1蛋白表达则以点状及灶状分布为主。见图1～3。

2.2 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9 与食管鳞癌临床病理特征的关系 NF-κB p50表达与食管鳞癌组织分化程度、浸润深度有关(P 均 ＜0.05)，ICAM-1、MMP-9表达与食管鳞癌组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关(P均＜0.05)。见表1。

2.3 NF-κB p50 与 ICAM-1、MMP-9 相关性 NF-κB p50与ICAM-1、MMP-9在食管鳞癌中表达均呈正相关(r=0.533，P ＜0.001;r=0.337，P=0.018)。见表 2。

3 讨论

NF-κB是一类重要的核转录因子，未被活化时主要位于细胞质中，当细胞受到相应刺激后就会移位至细胞核，从而与细胞核内DNA链上的特异部位相结合，调控基因的转录。近年来，越来越多的研究［7］表明NF-κB与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。而其主要形式为p50和p65组成的二聚体，其中p50是与DNA结合的部位，称结合亚单位;p65是转录调节单位，参与基因的转录调节。本文结果表明，NF-κB p50蛋白的表达与食管鳞癌的组织分化程度、浸润深度均有密切关系，而与淋巴结转移间无明显关系，这一结果与NF-κB的调节亚单位p65的表达有着一定区别［8］。分析其原因可能是和样本量不同有一定关系，而且p65在体内还有其他存在形式。关于这方面还有待进一步的研究。但可以肯定的是NF-κB p50蛋白在食管鳞癌的发生、发展中均起着重要作用。

ICAM-1属于细胞黏附分子中的免疫球蛋白超家族成员之一，是目前研究最多的黏附分子。文献［9］报道，ICAM-1在恶性肿瘤组织中的表达可能与肿瘤的演进及转移有关。本研究结果显示，鳞癌组中ICAM-1阳性率明显高于癌旁组及正常组，证明其可能与食管鳞癌的发生有关。此与Rockett等［10］研究结果一致。同时也提示ICAM-1蛋白表达可能是食管鳞癌发生中的晚期事件。另外研究结果还显示，ICAM-1蛋白的表达与食管鳞癌的组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移关系密切，说明其在食管鳞癌的分化及肿瘤的播撒和远处转移过程中也起到重要作用。Spearman相关分析结果显示，NF-κB p50与ICAM-1表达呈正相关。这与Lin等［5］在肺癌中的研究结果相符。提示，NF-κB激活后，p50亚单位与ICAM-1的基因结合区相结合，从而可以发挥p65基因的调控作用，增强ICAM-1基因的转录活性，使ICAM-1表达上调，导致肿瘤细胞的侵袭和转移。说明在食管鳞癌中NF-κB的活化也可以上调ICAM-1的表达，从而增强肿瘤细胞的侵袭转移能力。

MMPs是一类参与细胞外基质降解的关键酶，在肿瘤浸润、转移中发挥重要作用。MMP-9属于明胶酶类，因其作用底物广泛，表达细胞众多而备受重视，成为研究的热点之一。由于MMP-9是降解细胞外基质的重要酶类之一，因此其活性上调与肿瘤的侵袭和转移有关［11］，故MMP-9在肿瘤浸润、转移中的重要作用已引起大家的广泛关注。本文结果表明，MMP-9蛋白的表达与食管鳞癌组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移关系密切，Spearman相关分析结果示NF-κB p50蛋白与MMP-9蛋白表达间呈明显正相关关系，此结果与Hsiang等［6］在肝细胞癌中证实的MMP-9的表达上调是通过NF-κB信号途径实现的研究结果相符。提示，NF-κB激活后，可以使MMP-9表达上调，从而增强肿瘤细胞的侵袭转移能力。

总之，NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9 蛋白的表达在食管鳞癌发生、发展过程中具有重要作用，三者联合检测对食管鳞癌的临床预后判断可能具有重要意义。

表1 NF-κB p50、ICAM-1、MMP-9与食管鳞癌临床病理特征的关系 例(%)

表2 食管鳞癌组织中NF-κB p50 与 ICAM-1、MMP-9 表达的相关性

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